肠脂肪酸结合蛋白联合NLR、PCT检测对小儿绞窄性肠梗阻的诊断价值

【目的】探讨肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)联合中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、降钙素原(PCT)检测对小儿绞窄性肠梗阻的诊断价值。【方法】以两院收治的96例肠梗阻患儿作为观察组,另选取同期来医院体检的84例健康小儿为对照组。比较两组对象的血清IFABP、NLR、PCT水平。统计绞窄性肠梗阻患儿的发生情况,比较绞窄性肠梗阻患儿与单纯肠梗阻患儿的临床特征,采用Logistic多元回归分析影响绞窄性肠梗阻发生的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IFABP联合NLR、PCT水平诊断小儿绞窄性肠梗阻的价值。【结果】观察组患儿血清IFABP、NLR、PCT水平均高于对照组(P<0.05);96肠梗阻患儿中绞窄性肠梗阻的发生率为43.75%(42/96)。绞窄性肠梗阻患儿腹膜刺激征、腹部手术史构成比及血清IFABP、NLR、PCT水平均高于单纯肠梗阻患儿,且差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示:血清IFABP、NLR、PCT水平及腹部手术史均是小儿发生绞窄性肠梗阻的独立危险因素(P<0.05);ROC分析显示,血清IFABP、NLR、PCT水平诊断小儿绞窄性肠梗阻的最佳截断点分别为375.80 pg/mL、3.82 ng/mL、0.34 ng/mL,曲线下面积(AUC)分别为0.818、0.786、0.821,联合诊断时特异度和AUC均最高。【结论】绞窄性肠梗阻患儿血清IFABP、NLR、PCT水平均异常升高,其均可作为诊断小儿绞窄性肠梗阻的敏感指标,且联合诊断时价值更高。

L1范数最大间隔分类器设计

以L1范数为例,设计了一个L1范数的大间隔分类器L1MMC(L1-norm Maximum Margin Classifier),主要特点如下:(1)间隔由L1范数的点到平面距离解析表示;(2)该分类器与SVM一样,通过最大化L1间隔,达到同时最小化经验风险和结构风险的目的;(3)只需要通过线性规划进行求解,避免了SVM的二次规划问题;(4)分类精度达到甚至超过SVM.最后,在人工数据和国际标准UCI数据集上,验证了该方法的有效性.

保乳手术用于早期乳腺癌患者中的治疗效果及对其生活质量的改善价值研究

目的探讨保乳手术用于早期乳腺癌患者的治疗效果及对其生活质量的改善价值。方法选取2021年1月至2022年1月铜川市矿务局中心医院普外科接收的80例早期乳腺癌患者,按不同手术方式分作2组,38例接受改良根治术治疗者为对照组,42例接受保乳手术治疗者为观察组,对比2组的并发症发生情况、血清肿瘤标志物水平、预后情况及生活质量。结果观察组的并发症发生率是4.8%,低于对照组的21.0%(P<0.05);2组术后3个月时的血清糖类抗原125(CA125)、组织多肽特异性抗原(TPS)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平均低于术前(P<0.05),但组间比较差异无统计学意义(P>0.05);随访至术后12个月时,2组的局部复发、远处转移及生存率对比,差异无统计学意义(P>0.05);观察组术后12个月时的乳腺癌患者生命质量测定量表(FACT-B)评分高于对照组(P<0.05)。结论保乳手术应用于早期乳腺癌治疗中并发症少、疗效理想,且可进一步改善患者生活质量。

基于L1范数的k平面聚类算法设计

基于L2范数度量的k平面聚类(k-Plane Clustering,k PC)设计思想,本文提出了一种采用L1范数度量的聚类算法。由于在平面更新步骤中,所导出的优化问题是非凸的,文中给出了一种求解方法,即将非凸问题转化为有限个子集上的凸问题,为避免求解多个优化问题导致训练时间过长问题,本文还设计了一种新的优选策略,有限个子集的搜索任务可在线性时间内完成。本文所提出的方法只需要求解k个线性规划,而不再是k PC的求解特征值问题。在人工和UCI数据集上的实验结果表明:基于L1范数平面聚类算法的训练和测试时间更短,且在大多数数据集上均表现出了更好的聚类性能。

地铁车站建筑防火及安全疏散设计

近年来,随着我国经济的快速发展,地铁车站建筑的数量快速增加,而地铁车站的消防设计受到广泛重视,只有合理开展防火与安全疏散设计工作,才能确保地铁车站建筑的消防安全性,从而维护人们的生命财产安全。但是目前部分地铁车站建筑的消防设计工作中,还存在防火和安全疏散设计问题,对地铁车站建筑的安全性造成不利影响。这就需要在具体的设计工作中,结合防火、安全疏散的需求,合理开展设计活动,保证地铁车站建筑中的防火与安全疏散设计的科学性,为后续的安全使用夯实基础。

公共建筑设计中人性化设计的策略

围绕地铁车站公共空间设计展开研究,提出了可行的“人性化”设计策略,具体涉及系统设计、无障碍设计以及便民服务设施3大部分,并以广州地铁为例进行探讨,推动我国公共建筑设计向个性化、人性化发展。

腹腔镜与开腹胃癌根治术清除淋巴结的临床效果比较

目的比较腹腔镜与开腹胃癌根治术在清扫淋巴结中的临床效果。方法选取2010年10月到2015年10月铜川矿务局中心医院普外科行胃癌根治术患者753例,根据手术方式将患者分为腹腔镜胃癌根治术组(腹腔镜组) 384例和常规开腹胃癌根治术组(开腹组) 369例。记录并比较2组患者手术时间、出血量、切口长度、住院时间及淋巴结清扫情况。采用SPSS 19. 0统计软件对数据进行处理,根据数据类型,组间比较采用独立样本t检验或χ2检验。结果腹腔镜组患者手术时间显著大于开腹组[(275. 16±32. 59) vs (208. 72±27. 37) min,P <0. 001],但与开腹组比较,腹腔镜组患者出血量降低[(151. 62±28. 43) vs (319. 34±98. 15) ml,P <0. 001],切口长度减小[(6. 35±1. 47) vs (17. 53±1. 78) cm,P <0. 001],住院时间缩短[(9. 17±3. 24) vs (15. 64±5. 37) d,P=0. 004],差异有统计学意义。腹腔镜组总清扫淋巴结9984枚,每例患者淋巴结清扫数目15~41(25. 86±5. 47)枚;开腹组总清扫淋巴结9372枚,每例患者淋巴结清扫数目15~46(26. 47±6. 12)枚。2组患者淋巴结清扫总数及每例患者清扫数目差异无统计学意义(P> 0. 05)。2组患者在相同的区域、肿瘤胃壁浸润深度、手术方式、肿瘤大小及分化程度间,淋巴结清除数目差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论在各种临床病理特征相似的条件下,腹腔镜胃癌根治术的淋巴结清扫效果与常规开腹胃癌根治术无明显差异,但前者整体手术效果优于后者。

胃癌组织中HuR表达与临床病理及生存状况的关系

目的研究RNA结合蛋白HuR在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法选择铜川矿务局中心医院2010年8月至2012年3月收治的胃癌根治术患者的73份胃癌组织标本作为胃癌组,选择在同一时期内接受胃切除术的21例正常胃组织作为对照组。通过免疫组织化学技术检测胃组织福尔马林固定标本的表达情况,分别用细胞质和核染色评估HuR表达。比较正常胃组织和胃癌组织中HuR表达的差异。探讨HuR的表达与临床病理特征之间的关系,并比较不同HuR表达患者的生存率差异。通过COX模型确定胃癌根治术后预后的影响因素。结果在胃癌组织细胞中,癌细胞核中HuR的表达在53个样本中表达率很高(72. 6%;得分2,n=33;得分3,n=20)。癌细胞中的细胞质表达在20个样本中表达较高(27. 4%;得分2,n=13;得分3,n=7)。与正常胃组织相比,胃癌细胞核和细胞质HuR的表达显著增高(Z=5. 269、8. 475,P <0. 01)。在癌细胞核中,未观察到HuR表达与临床病理学特征有明显相关(P>0. 05);而在癌细胞质中,观察到HuR表达与TNM分期、淋巴结转移和肿瘤大小明显相关(P <0. 05)。在细胞质中,HuR阴性表达患者的中位生存期(54个月)比HuR阳性表达患者(29个月)更长(P <0. 01)。在细胞核中,HuR阴性表达患者的中位生存期(52个月)比HuR阳性表达患者(44个月)长(P=0. 016)。应用多元Cox回归模型分析独立预后因素,结果表明细胞质HuR蛋白表达、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期是影响患者生存的独立预后因素(P=0. 046、0. 041、0. 035和0. 012)。结论细胞质HuR表达与胃癌患者的恶性侵袭性和预后显著相关,可作为胃癌根治术后转移的预测指标。

旧棉翻新技术

旧棉翻新技术棉花的用途相当广泛，从日常生活到工业生产，从医疗卫生到国防工业，几乎涉及到每一个领域和部门。在纺织工业上它可以经过加工，生产出各色各样的棉纺织品供消费者使用；在造纸工业上，它可以制造强度高、白度高的高级纸张和特种纸张；在化工上，可以制造炸...

悬顶装配式炼焦炉

悬顶装配式炼焦炉张家芳，寇振宇忻州地区科委（山西０３４００）当前推广的各种改良型炼焦炉，如ＬＬ型焦炉、７５型焦炉、ＸＹ型焦炉、介休炉等都是窑洞式结构，炉顶是由耐火砖砌筑的固定拱顶。多年的生产实践证明，在炼焦过程中，由于炉内温度高，又是内熄焦生产工艺，...

沉默Nodal抑制高糖条件下培养的视网膜血管内皮细胞的生物学行为

目的观察高糖状态下Nodal对猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)生物学行为的影响。方法将RF/6A细胞分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖联合非特异小干扰RNA处理组(HG+NC组)、高糖联合小干扰Nodal处理组(HG+siNodal组)。蛋白质免疫印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应观察细胞内Nodal蛋白、mRNA相对表达量;噻唑蓝比色法检测Nodal对RF/6A细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测Nodal对RF/6A细胞迁移能力的影响;Matrigel体外三维成型法检测Nodal对RF/6A细胞管腔形成的影响;蛋白质免疫印迹法检测RF/6A细胞内磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(pERK1/2)蛋白相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析。结果与HG+NC组比较,HG+siNodal组细胞内Nodal蛋白(F=33.469)、mRNA相对表达量(F=38.191)显著下降,细胞增殖能力(F=28.548)、细胞迁移能力(F=24.182)显著降低,细胞管腔形成数量显著减少(F=52.643),差异均有统计学意义(P<0.05)。与HG+NC组比较,HG+siNodal组细胞内pERK1/2蛋白相对表达量显著降低,差异有统计学意义(F=44.462,P<0.01)。结论沉默Nodal表达可抑制高糖诱导的RF/6A细胞增殖、迁移及成管能力;其可能通过抑制pERK1/2的表达发挥作用。

聚嘧啶束结合蛋白相关剪切子高表达对视网膜微血管内皮细胞的影响

目的观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪切子(PSF)高表达对低浓度4-羟基壬烯醛(4-HNE)诱导下人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的影响,初步探讨其可能存在的机制。方法将体外培养的对数生长期HRMECs分为4-HNE处理组、PSF高表达联合4-HNE组(PSF+4-HNE组)、PSF高表达+核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂(ML385)联合4-HNE组(PSF+ML385+4-HNE组)、磷酸肌醇3激酶抑制剂LY294002预处理后4-HNE联合PSF组(LY294002+4-HNE+PSF组)。4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组细胞培养基加人10μmmol/L4-HNE刺激12h,PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组应用转染试剂脂质体2000将1.0μgpcDNA-PSF真核表达质粒导入细胞中转染24h后,PSF+ML385+4-HNE组加入ML385(5μmol/L)预处理48h。LY294002+4-HNE+PSF组,除采用LY294002预处理外,4-HNE浓度、刺激时间以及质粒转染时间同前。Transwell检测PSF对HRMECs迁移能力的影响;Matrigel体外三维成型法检测PSF对HRMECs管腔形成的影响;流式细胞仪检测PSF对HRMECs中活性氧(ROS)水平的影响;蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测PSF、Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白相对表达量以及磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(pAkt)蛋白相对表达量。两组间比较采用t检验。结果4-HNE处理组、PSF+4-HNE组细胞数、迁移细胞数、完整管腔形成数分别为(1.70±0.06)、(0.80±0.13)个,(24.00±0.58)、(10.00±0.67)个和(725.00±5.77)、(318.70±12.13)个。两组细胞数、迁移细胞数、完整管腔形成数比较,差异均有统计学意义(t-12.311、15.643、17.346,P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示,4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组ROS水平分别为816.70±16.67、416.70±15.44、783.30±17.41;组间两两比较,差异均有统计学意义(t=16.311、14.833、18.442,P<0.001)。Westernblot检测结果显示,4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、LY294002+4-HNE+PSF组HRMECs中pAkt、Nrf2、HO-1蛋白相对表达量分别为0.08±0.01、0.57±0.04、0.35±0.09,0.17±0.03、1.10±0.06、0.08±0.11,0.80±0.14、2.50±0.07、0.50±0.05。与PSF+4-HNE组比较,LY294002+4-HNE+PSF组pAkt、Nrf2、HO-1蛋白相对表达量显著下降,差异均有统计学意义(t=17.342、16.813、18.794,P<0.001)。结论PSF高表达通过活化磷酸肌醇3激酶/Akt通路上调HO-1的表达,从而抑制低浓度4-HNE诱导的HRMECs增生迁移和管腔形成。

糖尿病小鼠视网膜p21活化激酶4表达上调及其对视网膜血管内皮细胞行为和线粒体功能的影响

目的观察p21活化激酶4(PAK4)对视网膜血管内皮细胞行为和线粒体功能的影响。方法实验研究,分为体内动物实验和体外细胞实验两部分。体内动物实验:健康C57BL/6J雄性小鼠12只,随机分为正常对照组、糖尿病组,每组各6只小鼠。糖尿病组小鼠经链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型。建模后8周,采用蛋白质免疫印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应检测正常对照组、糖尿病组小鼠视网膜PAK4表达情况。体外细胞实验:人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)分为常规培养细胞组(N组)、空载体组(Vector组)、PAK4过表达组(PAK4组)。各组加人150μg/ml糖基化终末产物诱导细胞。细胞划痕实验检测各组hRMEC内细胞迁移情况;流式细胞仪检测各组白细胞粘附于hRMEC数量。SeahorseXFe96细胞能量代谢分析仪测定细胞内线粒体基础呼吸、三磷酸腺苷(ATP)生成、最大呼吸与备用呼吸能力。两组间比较采用检验;三组间比较采用单因素方差分析。结果体内动物实验:与正常对照组小鼠比较,糖尿病组小鼠视网膜中PAK4mRNA、蛋白相对表达量显著升高,差异均有统计学意义(t=25.372、22.419、25.372,P<0.05)。体外细胞实验:与N组、Vector组比较,PAK4组hRMEC中PAK4蛋白、mRNA相对表达量和细胞迁移率均显著升高,差异有统计学意义(F=36.821、38.692、29.421,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,PAK4组hRMEC上白细胞粘附数量明显升高,差异有统计学意义(F=39.649,P<0.01)。线粒体压力测量结果显示,PAK4组hRMEC内线粒体基础呼吸、ATP生成、最大呼吸与备用呼吸能力明显减弱,差异有统计学意义(F=27.472、22.315、31.147、27.472,P<0.05)。结论PAK4高表达损伤线粒体功能并显著促进白细胞粘附和内皮细胞迁移。

二甲双胍抑制糖尿病视网膜血管内皮细胞中核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3炎症小体活化和细胞焦亡

目的观察二甲双胍(Met)对糖尿病(DM)微环境下人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体及细胞焦亡的影响。方法实验研究,分为体内动物实验和体外细胞实验进行。体内动物实验:健康C57BL/6J雄性小鼠9只,随机分为DM组、正常对照组、DM+Met处理组(DM+Met组),每组各3只小鼠。DM组、DM+Met组小鼠经链脲佐菌素诱导建立DM模型;DM+Met组给予Met400mg/(kg·d)干预。建模后8周,免疫组织化学染色观察正常对照组、DM组、DM+Met组小鼠视网膜NLRP3、cleaved-膜穿孔蛋白D(GSDMD)、cleaved-半胱天冬酶1(Caspase-1)的表达。体外细胞实验:hRMEC分为常规培养细胞组(N组)、晚期糖基化终末产物(AGE)组、AGE+Met组。AGE组、AGE+Met组加入150μg/mlAGE诱导细胞,AGE+Met组另加入2.0mmol/LMet处理细胞。流式细胞仪检测各组细胞焦亡情况;2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组细胞中活性氧(ROS)表达;实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白质免疫印迹法检测各组细胞中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1mRNA、蛋白相对表达量。三组间比较采用单因素方差分析。结果体内动物实验:与DM组比较,正常对照组、DM+Met组小鼠视网膜中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1表达显著降低;三组间比较,差异有统计学意义(F=43.478、36.643、24.464,P<0.01)。体外细胞实验:流式细胞仪检测结果显示,AGE组细胞焦亡率显著高于N组、AGE+Met组,差异有统计学意义(F=32.598,P<0.01)。DCFHDA检测结果显示,N组、AGE+Met组细胞内ROS水平较AGE组明显降低,差异有统计学意义(F=47.267,P<0.01)。AGE+Met组细胞中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1的mRNA(F=51.563、32.192、44.473,P<0.01)和蛋白(F=63.372、54.463、48.412,P<0.01)相对表达量较N组显著下降。结论Met可下调hRMEC内NLRP3炎性小体相关因子表达并抑制细胞焦亡。

骨形成蛋白4靶向调控SMAD9表达影响Miller细胞迁移和活性氧产生

目的观察并初步探讨骨形成蛋白4(BMP4)靶向调控SMAD9表达对Muiller细胞迁移、活性氧(ROS)生成以及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养的Muller细胞分为正常对照组、BMP4组、BMP4+空载质粒组(BMP4+NC组)、BMP4+SMAD9小干扰质粒组(BMP4+siSMAD9)。BMP4组、BMP4+NC组、BMP4+siSMAD9组细胞培养基加人100ng/mlBMP4诱导细胞24h。其后,BMP4+NC组转染空载质粒;BMP4+siSMAD9组转染SMAD9小干扰质粒48h。细胞划痕实验测定BMP4对Miller细胞迁移的影响;流式细胞仪检测BMP4对Muller细胞内ROS生成的影响;蛋白质免疫印迹法(Westerm blots)、实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测Muller细胞内谷氨酰胺合成酶(GS)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白、mRNA相对表达量;免疫荧光检测Miller细胞内VEGF的表达。多组间比较采用单因素方差分析。结果细胞划痕实验检测结果显示,BMP4+siSMAD9组细胞迁移率较BMP4组、BMP4+NC组显著降低,差异有统计学意义(F=68.319,P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示,BMP4+siSMAD9组细胞内ROS水平较BMP4组、BMP4+NC组显著降低,差异有统计学意义(F=52.158,P<0.001)。Westernblot、qPCR检查结果显示,BMP4+siSMAD9组细胞内GS、GFAP蛋白(F=42.715、36.618)、mRNA相对表达量(F=45.164、43.165)较BMP4组、BMP4+NC组显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光检测结果显示,BMP4组、BMP4+NC组细胞内VEGF荧光强度较BMP4+siSMAD9组显著升高,差异有统计学意义(F=46.384,P<0.05)。结论BMP4靶向调控SMAD9表达,可上调VEGF表达,进而促进Miller细胞迁移及ROS生成。

缺氧状态下SB431542对视网膜血管内皮细胞的作用

目的观察并分析缺氧状态下SB431542对视网膜血管内皮细胞的作用。方法体内动物实验:健康C57BL/6J小鼠48只,随机分为正常组、氧诱导视网膜病变(OIR)组、OIR+二甲基亚砜(DMSO)组、OIR+SB431542组,每组各12只。小鼠17日龄时,作视网膜铺片观察新生血管情况;苏木精-伊红染色计数突破视网膜内界膜(ILM)的血管内皮细胞核数。体内细胞实验:人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)分为正常组、缺氧组、缺氧+DMSO组、缺氧+SB431542组。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;Matrigel体外三维成型法检测SB431542对hRMEC管腔形成的影响;细胞划痕实验检测hRMEC内细胞迁移情况;Seahorse XFe96细胞能量代谢分析仪测定细胞内糖酵解、糖酵解储备、糖酵解容量的细胞外酸化率(ECAR)。多组间比较采用单因素方差分析。结果体内动物实验:与正常组比较,OIR组新生血管增多(t=41.621,P<0.001);与OIR组比较,OIR+SB431542组突破ILM的血管内皮细胞核数明显减少,差异有统计学意义(F=36.183,P<0.001)。MTT比色法检测结果显示,与正常组、缺氧+SB431542组比较,缺氧组、缺氧+DMSO组细胞增殖显著增多,差异有统计学意义(F=39.316,P<0.01);缺氧+SB431542组细胞增殖较缺氧+DMSO组显著降低,差异有统计学意义(t=26.182,P<0.001)。正常组、缺氧组、缺氧+DMSO组、缺氧+SB431542组细胞完整管腔形成数、迁移细胞数比较,差异均有统计学意义(F=34.513、41.862,P<0.001、<0.01)。与缺氧+DMSO组比较,缺氧+SB431542组细胞完整管腔形成数、迁移细胞数明显下降,差异有统计学意义(t=44.723、31.178,P<0.001、<0.01)。细胞能量代谢测定结果显示,与缺氧+DMSO组比较,缺氧+SB431542组细胞内糖酵解、糖酵解储备的ECAR降低,糖酵解容量的ECAR增高,差异均有统计学意义(t=26.175、33.623、37.276,P<0.05)。结论SB431542可抑制缺氧诱导的hRMEC增殖、迁移及管腔形成能力,并降低细胞糖酵解水平。

聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子高表达对人视网膜微血管内皮细胞凋亡和内质网氧化应激损伤的保护作用

目的观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子(PSF)高表达对高浓度4-羟基王烯醛(4-HNE)诱导下人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)内质网(ER)氧化应激损伤的保护作用。方法体外培养的对数生长期hRMEC分为正常组、单纯4-HNE处理组(单纯4-HNE组),空载质粒联合4-HNE处理组(Vec+4-HNE组)、PSF高表达联合4-HNE处理组(PSF+4-HNE组)。单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞培养基加人10μmol/L4-HNE,刺激12h。其后,Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组应用转染试剂脂质体2000分别导人pcDNA空载体、pcDNA-PSF真核表达质粒,转染24 h。正常组细胞常规培养。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;2',7'-二氯二氢荧光素双乙酸盐探针检测各组细胞内活性氧(ROS)表达水平。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞内ER氧化物蛋白1(Ero-1)、蛋白质二硫键异构酶(PDI)、C/EBP同源转录因子(CHOP)、葡萄糖调节蛋白(GRP)78、蛋白激酶R样ER激酶(pERK)/磷酸化pERK(p-pERK)、真核起始因子(eIF)2α/磷酸化eIF(peIF)、活化转录因子4(ATF4)蛋白相对表达量。组间比较行单因素方差分析。结果单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞凋亡率分别为(22.50±0.58)%、(26.93±0.55)%、(11.70±0.17)%;细胞内ROS表达量分别为0.23±0.03、1.60±0.06、0.50±0.06。三组间细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(F=24.531,P<0.05);Vec+4-HNE组ROS表达水平较单纯4-HNE组、PSF+4-HNE组显著升高,差异有统计学意义(F=37.274,P<0.05)。正常组、单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞ER中Ero-1、PDI蛋白相对表达量分别为1.25±0.03、0.45±0.03、0.63±0.03、1.13±0.09和1.000.10、0.27±0.10、0.31±0.05、0.80±0.06;CHOP、GRP78蛋白相对表达量分别为0.55±0.06、1.13±0.09、0.90±0.06、0.48±0.04和0.48±0.04、1.25±0.03、1.03±0.09、0.50±0.06。4组Ero-1(F=43.164)、PDI(F=36.643)、CHOP(F=42.855)、GRP78(F=45.275)蛋白相对表达量比较,差异均有有统计学意义(P<0.05)。4组细胞ERp-pERK/pERK(F=35.755)、peIF2α/eIF(F=38.643)、ATF4(F=31.275)蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PSF可抑制高浓度4-HNE诱导的细胞凋亡及ROS产生;其作用机制与恢复ER稳态平衡及下调pERK/eIF2a/ATF4通路的活化水平密切相关。

早发性白内障与年龄相关性白内障患者房水代谢组学的差异研究

目的:探讨早发性白内障与年龄相关性白内障患者房水中代谢物及代谢通路的差异。方法:代谢组学研究。收集2020年8月至2022年9月就诊于天津医科大学眼科医院的16例(17只眼)白内障患者。其中早发性白内障8例(8只眼),年龄相关性白内障8例(9只眼)。收集患者年龄、性别、术前裸眼视力、眼压、晶状体功能失调指数和眼轴长度等一般临床资料,并于白内障摘除术中留取房水和前囊膜组织标本,采用液相色谱-串联质谱法非靶向检测房水中的代谢物,进一步使用主成分分析、差异分析、聚类分析、相关性分析筛选差异代谢物,并根据代谢物的变化倍数(FC)对差异代谢物进行排名。使用受试者工作特征(ROC)曲线分析和代谢富集分析来筛选两组间的差异通路,并鉴定早发性白内障的生物标志物。前囊膜组织行免疫组织化学染色。采用比色法检测丙酮酸含量验证代谢组学分析结果。结果:8例早发性白内障患者中男性7例,女性1例,年龄(37.50±4.90)岁;8例年龄相关性白内障患者中男性7例,女性1例,年龄(73.44±5.22)岁;基线资料除年龄外差异均无统计学意义(P>0.05)。差异分析共鉴别出347种差异代谢物,其中10种经ROC曲线分析确定为潜在的早发性白内障生物标志物(均P<0.05),其中阳离子(POS)模式5种,分别是丙氧卡因(log 2FC=7.26)、2-甲基-2,3,4,5-四氢-1,5-苯并氧氮杂卓-4-酮(log 2FC=6.35)、l-焦谷氨酸(log 2FC=-1.72)、亮氨酰脯氨酸(log 2FC=-0.77)和胆碱(log 2FC=-0.56),阴离子(NEG)模式5种,分别是N-苯乙酰谷氨酰胺(log 2FC=-1.84)、丙酮酸(log 2FC=1.07)、抗坏血酸(log 2FC=0.92)、假尿嘧啶核苷(log 2FC=-0.68)和棕榈酸(log 2FC=-0.51)。代谢富集分析共富集到72条差异通路(POS模式32条,NEG模式40条),其中谷胱甘肽代谢及半胱氨酸和蛋氨酸代谢、糖酵解或糖异生、丙酮酸代谢、三羧酸循环两组间的差异有统计学意义(P<0.05)。验证结果显示早发性白内障患者房水中乳酸脱氢酶减少,丙酮酸升高(P<0.05)。结论:丙酮酸等10种代谢物可能是潜在的早发性白内障生物标志物;谷胱甘肽代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、糖酵解或糖异生、丙酮酸代谢和三羧酸循环代谢通路在早发性白内障患者中明显失调。

组织蛋白酶L抑制剂经线粒体途径抑制氧化应激诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡

目的观察组织蛋白酶(CTS)L抑制剂对视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的作用及其对线粒体氧化应激的影响。方法体外培养的人RPE细胞分为正常组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、H_(2)O_(2)+CTSL抑制剂组。H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+CTSL抑制剂组置于含400μmol/L H_(2)O_(2)的培养基孵育24 h;H_(2)O_(2)+CTSL抑制剂组同时加入10μmol/l CTSL抑制剂。正常组为常规培养细胞。建模后24 h进行后续实验。流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应检测细胞中CTSL表达水平;MitoSOX荧光探针检测细胞中线粒体超氧化物表达水平;MitoTracker染色观察线粒体形态,定量分析线粒体平均面积、形状因子、分支节点。两组间比较采用双尾Student t检验;多组间比较采用单因素方差分析。结果与正常组比较,H_(2)O_(2)组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(t=3.307,P=0.0297);细胞中CTSL表达水平升高(t=19.950、6.916、14.220,P<0.05)。与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+CTSL抑制剂组CTSL表达水平、细胞凋亡率、细胞线粒体超氧化物水平显著降低,差异有统计学意义(t=11.940、4.718、16.680,P<0.05)。H_(2)O_(2)+CTSL抑制剂组细胞线粒体呈细长椭圆形或杆状;H_(2)O_(2)组细胞线粒体失去其连续轮廓与完整形态。4组细胞线粒体评价面积、形状因子、分支节点比较,差异有统计学意义(F=251.700、34.010、60.500,P<0.0001)。结论H_(2)O_(2)显著诱导RPE细胞的凋亡、CTSL表达升高;CTSL抑制剂可抑制H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞凋亡,降低线粒体超氧化物水平,有效恢复线粒体形态。