LYRM1基因过表达对大鼠骨骼肌细胞线粒体功能的影响

目的评价LYRM1基因过表达对成熟骨骼肌细胞线粒体功能的影响。方法体外培养大鼠骨骼肌细胞株(L6),分别将pcDNA3.1及LYRM1-pcDNA3.1转染L6,通过G418筛选稳定表达株,应用Western blot技术验证其转染情况。诱导L6分化成熟后电镜观察线粒体形态;经Mitotracker red染色,应用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化。结果 Western blot技术证实LYRM1表达质粒转染成功;LYRM1-pcDNA3.1组细胞线粒体凝集、形态扭曲变形及线粒体空泡化、线粒体嵴排列不规则,甚至断裂、溶解、消失;流式细胞仪检测结果显示LYRM1-pcDNA3.1组荧光值为3.7667±0.1007,pcDNA3.1组荧光值为8.7633±0.2286,二组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LYRM1基因在骨骼肌细胞中过表达能明显改变线粒体形态,降低骨骼肌细胞线粒体的膜电位,提示LYRM1基因在骨骼肌细胞中过表达影响了线粒体的功能。

NYGGF4基因过表达对成熟脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响

目的探讨NYGGF4基因过表达对成熟3T3-L1脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响。方法以3T3-L1前体脂肪细胞为载体,建立NYGGF4基因稳定过表达细胞株,以空载质粒转染的细胞为对照,将前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞。采用透射电镜观察成熟脂肪细胞的线粒体形态,采用荧光定量PCR技术检测成熟脂肪细胞中线粒体融合基因(Mfn)1 mRNA、Mfn2 mRNA、线粒体动态相关基因(Drp)1 mRNA的表达水平。采用Western blot方法检测Mfn1蛋白、Mfn2蛋白、Drp1蛋白的表达水平。结果 1.电镜观察发现NYGGF4基因过表达的成熟脂肪细胞线粒体体积变小、数量明显减少,线粒体嵴断裂、减少、消失,部分线粒体肿胀,甚至呈空泡状;对照组成熟脂肪细胞的线粒体形态基本正常,线粒体嵴清晰可见,线粒体无明显肿胀、皱缩。2.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞Mfn1 mRNA及Mfn1蛋白表达水平均显著高于对照组。3.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞的Mfn2 mRNA、Drp1mRNA及相应蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义。结论在3T3-L1成熟脂肪细胞中,NYGGF4基因过表达可导致线粒体形态发生变化、数量减少,同时上调Mfn1 mRNA和Mfn1蛋白表达水平,提示NYGGF4基因在成熟脂肪细胞中过表达能影响细胞线粒体形态及动力学。

多氯联苯暴露对斑马鱼视网膜形态学及CRX基因表达的影响

【目的】探讨环境有机污染物多氯联苯暴露对斑马鱼视网膜形态学及视锥-视杆同源盒基因(cone-rod ho-meobox,CRX)表达的影响。【方法】以斑马鱼为模式生物,配制1.0、0.5、0.25、0.125 mg/L 4个不同浓度的多氯联苯对斑马鱼胚胎进行暴露处理,同时设空白对照和0.01%甲醇对照组,观察多氯联苯暴露对斑马鱼幼鱼存活率、视网膜形态学及CRX基因表达变化情况。【结果】1)低浓度(0.125 mg/L)多氯联苯暴露对斑马鱼幼鱼的存活率、视网膜形态学、CRX基因表达均无明显影响;2)中、高浓度(0.25 mg/L以上)的多氯联苯暴露96 hpf后,斑马鱼存活率明显下降;视网膜总厚度、神经节细胞层、感光细胞层厚度均较对照组明显增厚(P<0.05),感光细胞层细胞排列紊乱,同时在1 mg/L多氯联苯暴露组中可见感光细胞数明显减少;中、高浓度的多氯联苯暴露组CRX基因表达均较对照组明显降低(P<0.05)。【结论】中、高浓度的多氯联苯暴露对斑马鱼视网膜尤其是感光细胞层产生明显的毒害作用,必须加强对环境有机污染物的监测和控制。

STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧、线粒体膜电位的影响

目的探讨STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位的影响。方法应用锥虫蓝活性试验对细胞活性进行检测,并进一步确定STEAP4抗体原液按1:250的比例稀释。体外培养人前体脂肪细胞,应用质量浓度为0.5g.L-1的STEAP4抗体,按1:250的比例稀释后(即质量浓度为0.125g.L-1)干预人前体脂肪细胞。应用激光共聚焦显微镜拍照,定性、定量分析ROS、线粒体膜电位变化。结果 STEAP4抗体按1:250比例稀释作用于人前体脂肪细胞后,可显著降低细胞活性;人前体脂肪细胞在STEAP4抗体按1:250稀释浓度干预下,细胞内ROS水平显著增加、线粒体膜电位水平显著降低,差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论 STEAP4抗体按1:250比例稀释后,作用于人前体脂肪细胞后可显著提高ROS水平、降低其线粒体膜电位,推测STEAP4基因影响胰岛素敏感性的机制可能涉及线粒体功能变化。

人脂肪组织中NYGGF4基因转录本检测

目的:探讨肥胖相关新基因NYGGF4在人脂肪组织中转录本的大小及是否存在剪切异构体。方法:采用Northern blot技术检测NYGGF4基因在人脂肪组织中的表达情况。结果:检测到一条大小1.5kb左右的条带,与数据库中NYGGF4 mRNA长度一致,未检测到其他转录本。结论:NYGGF4基因在人脂肪组织中的转录本大小约为1.5kb,并不存在剪切异构体。

LYRM1基因过表达对骨骼肌细胞活性氧的影响

目的探讨LYRM1基因过表达对骨骼肌细胞活性氧簇（ROS）生成的影响。方法培养大鼠骨骼肌细胞株（L6），分别以pcDNA3．1及LYRM1-pcDNA3．1转染IJ6，构建空载对照细胞株（空载对照组）及过表达LYRM1基因细胞株（LYRM1基因过表达组），筛选、验证细胞株LYRM1的表达。诱导M分化成熟后以H2-DCFDA探针孵育，荧光显微镜下观察ROS的荧光强度，流式细胞仪定量测定ROS的生成变化。结果LYRM1基因过表达组荧光强度明显强于空载对照组；LYRM1基因过表达组荧光值为24．8933±4．4574，空载对照组荧光值为13．1512±0．7347，2组比较差异有统计学意义（t=24．12，P=0．00）。结论LYRM1基因在骨骼肌细胞中过表达可显著增加其ROS的产生，提示LYRM1基因过表达可影响细胞线粒体功能，造成线粒体损伤。