优雅蝈螽VASA蛋白cDNA序列的克隆与生物信息学分析

Vasa基因属于DEAD-box家族,其功能主要是特定mRNA的翻译调控。在许多动物中,它都是生殖系细胞发育所必须,对生殖干细胞分化具有重要作用。为探究vasa基因在半变态类昆虫生殖系细胞发育中的作用,本研究首先从基于Illumina高通量测序平台测得的优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa成体转录组数据中筛选出一段长度为1215 bp的vasa基因片段,进而设计引物并利用RT-PCR和RACE技术获得其c DNA序列全长,最后利用生物信息学技术进行分析。结果显示:优雅蝈螽vasa基因的c DNA序列全长3359 bp,其中,5'端非编码区82bp,3'端非编码区1306 bp,开放阅读框1971 bp编码656个氨基酸,理论蛋白相对分子量(Mw)72.3 k Da,等电点(p I)5.48。通过与Gen Bank数据库中收录的其他VASA蛋白序列比对,发现优雅蝈螽VASA蛋白具有DEAD-box蛋白家族所共有的9个保守基序,Ax TGo GKT(I)、PTRELA(Ia)、TPGR(Ib)、DEAD(Ⅱ)、SAT(Ⅲ)、LVFVE(Ⅳ)、TDVu ARGID(Ⅴ)、HRIGRTGR(Ⅵ)和Gacc Poh1Q(Q),其中,Gacc Poh1Q(Q)的第3个氨基酸残基存在显著变化,建议将Gacc Poh1Q(Q)修改为Gaxc Poh1Q(Q)。此外,优雅蝈螽VASA蛋白的N端还具有10个RG和2个RGG重复序列、起始及终止密码子附近的色氨酸(W)、C末端的7个氨基酸残基中有4个为酸性氨基酸残基(E),表明其具有ATP依赖的RNA解旋酶活性。基于氨基酸序列聚类结果显示:优雅蝈螽位于六足动物分枝末梢,与双斑蟋Gryllus bimaculatus的亲缘关系最近,这与二者的分类学地位相符。本研究表明基于短读长二代测序平台获得的转录组数据可以很好地服务于功能基因研究,所获得的优雅蝈螽vasa基因c DNA全长对于进一步深入研究VASA蛋白在半变态类昆虫生殖系细胞发育研究具有重要意义。

从提高遵医行为论消化性溃疡患者的饮食护理

消化性溃疡主要指发生于胃和十二指肠的慢性溃疡.是一种多发病、常见病.据文献报道人群中约有10%左右的人在一生中患过此病,近年来药物治疗有很大进展,但饮食治疗的配合仍属重要内容.

超声引导下肝癌病人微波凝固治疗的护理配合

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,然而其手术切除率不足20%,对于大量不能手术切除的肝癌病人,以局部间质疗法(如酒精注射、间质放疗、低温冷冻、高热疗法及药物灌注等)和阻断血流为手段的各种介入性方法已成为治疗的主要手段.1998年以来我科采用微波凝固治疗肝癌.由于微波本身的物理特性,使其具有受生物因素干扰小、能量输出稳定、热效率高、热凝固效果确切等优点,为晚期肝癌治疗开辟了一条新途径.现将治疗及护理体会报告如下.

“互联网+”时期的中职财会专业复合型人才需求调研分析

新经济模式的迅猛发展,对中职财会专业人才的目标定位、培养模式等提出了新要求。本文对当前中职财会专业人才社会需求状况,以及中职财会专业人才培养现状展开调查分析。结果表明,"互联网+"时期的社会经济对中职财会专业人才应具备的职业能力和职业素养提出了新要求,中职财会专业应加强校企合作,着力培养适应新经济发展需求的复合型人才。

会计专业行动导向教学法探讨

讨论了会计专业中的行动导向教学以学生为中心、以实践为中心、以能力培养为中心,强调在行动中学习。它符合中职教育规律,容易激发学生的学习兴趣,培养学生综合应用专业知识的能力。

基于项目教学法的会计学教学实践探索

本文对中职学校在会计专业教学中改变传统教学模式,采取项目教学进行了讨论。项目教学法以学生为中心、以实践为中心、以培养动手能力为中心,创建项目情境,设计学习任务,进行合理评价,使学生之间在沟通、交流、协作的过程中,发挥主动性和创造性。

浅谈动态教学模式在财会专业教学中的应用

文章讨论了中职教育财会专业中的动态教学模式的改革和应用,突出"以学生发展为本",围绕学生这个教育主体开展教学改革,探讨教学方法新思路,尝试创新教学方式方法,活跃教学氛围,提高教学质量。

FDTD算法的Matlab语言实现

分析了FDTD算法的基本原理及两种典型边界条件的算法特点,给出了Matlab语言编程的步骤和应注意的问题,并给出了实际的仿真结果,最后得出用Matlab语言对FDTD算法编程的几点结论。

案例教学在中职校会计专业课教学中的应用研究

从中等职业学校会计教学的角度分析了案例教学法的概念及其特点,指出了采用案例教学法的必要性,研究了会计专业课案例教学的具体实施方案。并对提高中职校会计专业课案例教学的效果提出了建议。

不同温度驯化策略诱导优雅蝈螽海藻糖合成酶基因表达及血淋巴糖类含量变化

[目的]研究模拟野外温度骤变和缓慢升降温驯化对优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa海藻糖合成酶(Trehalose-6-phosphate synthase,TPS)基因表达量、血淋巴海藻糖及总糖含量的影响以及三者间的相关性。[方法]通过高通量转录组数据筛选,从优雅蝈螽中克隆TPS基因cDNA全长。采取模拟野外温度骤变和缓慢升降温两种温度驯化策略,以热电偶温度计测得优雅蝈螽体温与环境温度最为接近的温度值作为最适温度,实时荧光定量PCR测定优雅蝈螽TPS表达,硫酸蒽酮法测定血淋巴海藻糖和总糖含量(以25℃最适温度作为对照)。[结果]克隆得到的TPS基因命名为GgTPS(GenBank登录号:KU578006),全长3 225bp,包含2 430bp的开放阅读框,5'-非编码区(5'-untranslated region,5'-UTR)153 bp和3'-非编码区(3'-untranslated region,3'-UTR)642 bp。共编码809个氨基酸,预测的蛋白分子量(Mw)91.35 ku,理论等电点(pI)6.28。骤然降温阶段TPS相对表达量呈先升高后降低的变化趋势,在15℃最高,与最适温度25℃差异显著。海藻糖相对含量在0℃显著高于25℃。总糖相对含量在0℃和10℃显著高于25℃。骤然升温阶段,TPS相对表达量呈先降低后升高,再降低的变化趋势,40℃达到最高且与25℃差异显著。缓慢降温阶段TPS相对表达量呈先升高后降低的变化趋势,在15℃和20℃显著高于25℃;海藻糖含量表现出先降低后升高的变化趋势,0℃显著高于25℃,总糖含量在0℃、10℃和20℃与25℃差异显著。缓慢升温阶段TPS相对表达量先降低后升高,30℃和45℃显著低于25℃。海藻糖相对含量在40℃显著低于25℃。总糖相对含量呈先升高后降低的变化趋势,40℃和45℃显著高于25℃。不同温度驯化策略比较TPS相对表达量在15℃、40℃差异显著;海藻糖相对含量在40℃和45℃差异显著;总糖相对含量在10℃和20℃差异显著;体温在30℃差异显著。[结论]温度驯化能够提高昆虫的抗逆能力,昆虫体内TPS表达量和海藻糖合成量与其所处环境温度及作用时间密切相关。低、高温条件下TPS的表达和海藻糖的积累模式不同。