白血病细胞系APAF-1cDNA类型与基因表达关系的研究

目的:探讨白血病细胞系APAF-1cDNA的结构差异及其与基因表达的关系。方法:应用RT-PCR结合测序方法研究白血病细胞系K562和CEM/VLB100APAF-1cDNA类型;应用RT-PCR和Westernblot方法分析两个细胞系APAF-1基因的表达水平;检测caspase-3活性以比较APAF-1基因在两个细胞系的功能差异。结果:测序结果K562和CEM/VLB100APAF-1cDNA分别属于APAF-1XL和APAF-1L型,两个细胞系APAF-1mRNA表达水平无差异。K562细胞中APAF-1蛋白表达水平和caspase-3活性明显低于CEM/VLB100。结论:APAF-1的结构差异影响了APAF-1蛋白表达水平,可能是造成caspase-3活性降低的重要原因。

辽宁汉族成人前牙的性别判别研究

本文对辽宁地区汉族成人前牙（５０８颗）的牙根长、牙冠高、牙冠宽、牙颈宽、牙冠厚及牙颈厚的测量值进行了两类判别分析，获得了前牙的１２个性别判别方程式，其回代率分别为６８．４２％～８７．５０％、７０．４１％～８６．３６％。

人喉癌新的相关基因cDNA片段的克隆与鉴定

目的:寻找喉癌新的相关基因,阐明喉癌发生的分子机制,为喉癌的基因诊治提供研究的靶基因。方法:应用mRNA差异显示方法对喉癌患者的癌旁、癌及颈部转移淋巴结组织差异cDNA进行了筛选、克隆和测序,并对其进行了鉴定和同源性分析。结果:筛选出7个差异cDNA片段,克隆并鉴定了其中两个与喉癌发生相关的cDNA片段,它们与多种肿瘤相关基因的cDNA序列同源。结论:克隆的两个cDNA片段可能是喉癌新的相关基因cDNA片段,全长cDNA克隆及深入研究其功能有助于发现喉癌新的相关基因。

声门上喉癌特异染色体区和重要基因的发现

探讨声门上喉癌发生、发展的特异染色体区和重要基因．应用比较基因组杂交(CGH)分析了18例喉声门上鳞状细胞癌(LSCC)癌组织和癌旁组织的差异．同时,自行设计cDNA芯片对3 例喉声门上癌癌旁组织、癌组织和转移淋巴组织中基因表达的差异进行了研究和聚类分析．CGH 结果表明在某些染色体区存在特异的扩增和缺失．聚类分析将用于芯片研究的基因分为3组,即 A,B和C．同时还发现一些表达差异在5倍以上的特异基因与喉癌发生相关．上述特异染色体区和重要基因的发现将为喉癌发生、发展和转移的研究提供重要线索．

辽宁地区汉族成人切牙、侧切牙、尖牙的性别差异

本文用自动显示游标卡尺，对中国辽宁地区汉族成人切牙、侧切牙、尖牙（508颗）的根长、冠长、冠宽、颈宽、冠厚及颈厚六项指标进行了测量，得到了辽宁地区汉族成人切牙、侧切牙及尖牙的这六项指标的测量值，与王惠芸的测量结果进行了比较，并阐明了切牙、侧切牙及尖牙的性别差异。

喉鳞癌Apaf-1基因表达及启动子区甲基化研究

喉鳞癌细胞存在多种癌基因和抑癌基因异常 ,Apaf 1(apoptoticproteaseactivatingfactor 1)基因是诱导细胞凋亡的肿瘤抑制基因。为探讨Apaf 1基因在喉鳞癌发生中的作用 ,应用半定量PCR方法分析Apaf 1的表达用比较基因组杂交 (ComparativeGenomicHybrodization ,CGH)和杂合性丢失 (LossofHeterozygosity ,LOH)分析方法对喉鳞癌病人Apaf 1基因所在的 12 q2 2 2 3区域缺失情况进行研究 ,并用甲基化特异PCR对该基因启动子区甲基化情况进行了分析。结果表明 :11例喉鳞癌组织出现Apaf 1mRNA表达明显下调 ,占 4 0 7% (11/ 2 7) ,而 6例良性喉肿瘤未发现缺失或下调 ;CGH分析发现 ,18例喉鳞癌仅发现 2例存在 12 q2 2 2 3区域缺失 ,未发现扩增 ;LOH分析发现 ,72例喉癌组织Apaf 1基因的 5个多态位点LOH发生频率低 ,分别为 18 2 % (D12S346 )、13 9%(D12S170 6 )、18 2 % (D12S32 7)、2 2 2 % (D12S16 5 7)和 16 6 % (D12S393) ,11例出现Apaf 1mRNA下调的喉癌组织均检测到启动子区甲基化 ,而 16例Apaf 1mRNA表达未下调者仅 1例有甲基化 ,两者有显著差异 (χ2 检验 ,P=0 0 0 0 1)。通过以上结果 ,首次证实Apaf 1基因与喉鳞癌相关 ,在喉鳞癌中Apaf 1基因缺失发生率低 。

细胞角蛋白基因13在喉鳞状细胞癌中缺失和表达的研究

为了探讨细胞角蛋白基因 13(Cytokeratin 13,CK13)在喉癌发生中的作用 ,在CK13基因内部及附近选择 5个微卫星引物进行杂合性丢失 (lossofheterozygosity,LOH)分析 ,于DNA水平间接检测 72例喉鳞状细胞癌患者中该基因的缺失 ,应用NorthernBlot检测 16例喉鳞癌患者的配对肿瘤及癌旁正常组织中CK13基因的表达差异 :同时应用CK13蛋白单克隆抗体对不同分化程度的喉鳞癌组织进行免疫组化染色。结果表明 :5个STR位点均存在LOH ,其中D17S196 4E、D17S2 0 92、D17S791、D17S16 6 5及D17S80 8位点的LOH频率分别为 18.0 3%、2 8.13%、2 7.4 2 %、39.6 8%和 34.85 % ,其中D17S16 6 5位点的LOH频率最高 ,至少一个位点出现LOH的病例高达 77.78% (5 6 / 72 ) ,杂合性丢失与临床分期、淋巴结转移无显著相关 ,但与肿瘤分化程度高低相关 (P <0 .0 5 )。Northernblot结果表明 :16例喉鳞癌患者CK13基因在正常组织中的表达比肿瘤组织显著增强 ,免疫组化结果也显示CK13蛋白在正常组织或高分化肿瘤中的表达明显高于低分化者 ,且存在显著差异 (P <0 .0 1)。证实CK13基因可能在喉鳞状细胞癌的发生中具有重要作用 。

喉癌的比较基因组杂交研究

寻找与喉癌发生进展的相关基因 ,应用比较基因组杂交技术分析了 18例喉癌患者。结果显示 ,每例喉癌细胞染色体均有不同程度的变化 ,包括染色体全部或部分的扩增或丢失。平均每例有 12 9处异常区域 ,丢失多于扩增 ,分别为每例 7 2处和 5 7处。主要为 3q(78% )、5 p(6 1% )、11q(5 6 % )、1q(5 0 % )、8p(4 4 % )、8q(39% )和 15q(39% )的扩增 ;3p(70 % )、5 q(78% )、9p(6 7% )、13q(5 0 % )、1p(4 4 % )和 14q(39% )的丢失。有多条染色体区带上出现特异的扩增或丢失 ,特别是 1p13 2 1(8/ 18)、3p2 1 2 3(14 / 18)、5 p2 1 2 2 (14 / 18)、9p12 pter(10 / 18)和 13q2 1 31(8/18)的拷贝数增加明显 ,而 1q11 2 1(11/ 18)、3q15 2 1(12 / 18)、8p2 2 2 4 (6 / 18)、11q12 13(8/ 18)、15q2 1 2 3(7/ 18)和18p11(8/ 18)区域的丢失为喉癌的特征性变化 ,说明这些区域中存在与喉癌发生发展密切相关的癌基因。

HDGF在手术切除非小细胞肺癌中的异常表达及其在预测预后中的意义

背景与目的在前期研究中发现肝癌衍生生长因子(hepatoma-derived growth factor,HDGF)在A549、H226等非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中明显高表达,在促进NSCLC细胞侵袭、生长、迁移过程中起重要作用。本研究旨在进一步检测HDGF在NSCLC组织标本中的表达情况,探讨其临床意义。方法应用SP法,检测158例手术切除NSCLC及12例正常对照肺组织中HDGF蛋白表达情况,进行生存分析、预后判定。结果与12例正常对照肺组织比较,HDGF蛋白在158例NSCLC中明显高表达(P<0.001)。158例NSCLC中,HDGF高表达组(78例,占49.4%)的5年生存率为38.2%,明显低于HDGF低表达组(80例,占50.6%)的5年生存率63.1%(P=0.009)。直线相关分析表明HDGF表达水平与术后生存时间呈负相关(r=-0.183,P=0.022)。多因素生存分析表明术后病理分期和HDGF表达水平是手术切除NSCLC预后判定的独立因素。结论 HDGF在NSCLC中呈现高表达;HDGF高表达代表预后不良,HDGF可以作为手术切除NSCLC预后判定的新的分子标志物。

HOXD13、FHL1和先天性马蹄内翻足的相关研究

为研究HOXD13、FHL1和先天性马蹄内翻足的关系,应用变性梯度凝胶电泳技术检测HOXD13基因在先天性马蹄内翻足个体中的突变,应用半定量RT-PCR及免疫组织化学技术检测HOXD13、FHL1在先天性马蹄内翻足患者肌肉组织中的表达;并用软件预测FHL1基因上游HOXD13的结合位点,凝胶阻滞试验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证HOXD13和FHL1的相互作用。结果84例先天性马蹄内翻足患者中未发现HOXD13基因编码区突变存在。与同期正常足部肌肉组织相比HOXD13(33.3%),FHL1(46.6%)在先天性马蹄内翻足患者肌肉组织中表达明显下调。EMSA结果表明,当HOXD13存在时出现特异的DNA阻滞条带。上述结果说明:HOXD13的编码区突变可能不是先天性马蹄内翻足发生的原因,而HOXD13和FHL1表达水平的改变可能与马蹄内翻足畸形的发生有关,HOXD13可能通过直接调控FHL1发挥作用。

马蹄内翻足胎大鼠胫骨后肌组织的蛋白质组学分析

目的寻找马蹄内翻足畸形相关蛋白。方法提取全反式维A酸诱导的单纯马蹄内翻足畸形胎大鼠及正常对照胎大鼠胫骨后肌群总蛋白,进行双向电泳,考马斯亮蓝染色;经PDQuest软件分析,选择重复出现的差异点,质谱分析鉴定蛋白。结果获得了分辨率及重复性均好的双向电泳图谱。畸形胎大鼠与正常对照比较,有蛋白质点缺失、额外增加及明显上调或下调。质谱鉴定发现畸形胎大鼠肌组织慢骨骼肌肌钙蛋白T(sTnT)缺失,X连锁凋亡蛋白抑制因子(XIAP)下调,羧酸酯酶AY034877额外表达。结论畸形胎大鼠胫骨后肌组织与正常胎大鼠比较存在蛋白质组差异,畸形胎大鼠sTnT,XIAP及羧酸酯酶AY034877表达改变,可能与马蹄内翻足畸形相关。

IL-8基因在幽门螺杆菌相关性胃疾病中的表达

目的研究白细胞介素8(IL-8)基因与幽门螺杆菌(H.pylor)i相关性胃疾病发生发展的关系。方法采用免疫组化技术检测144例H.pylori相关性胃疾病胃黏膜标本中IL-8蛋白表达,其中浅表性胃炎54例、胃溃疡33例、萎缩性胃炎57例;另外探讨了72例不同胃黏膜标本H.pylori感染及其根除治疗对IL-8蛋白产生的影响。结果胃疾病IL-8蛋白阳性表达率H.pylori阳性组高于H.pylori阴性组(55.4%,40.3%);浅表性胃炎IL-8蛋白阳性表达率H.pylori阳性组高于H.pylori阴性组(P<0.05);胃溃疡和萎缩性胃炎IL-8蛋白阳性表达率H.pylori阳性组高于H.pylori阴性组。H.pylori阳性组和H.pylori阴性组从浅表性胃炎→胃溃疡→萎缩性胃炎中IL-8蛋白阳性表达率逐渐上升(P<0.05)。根除H.pylori治疗后IL-8蛋白阳性表达率低于根除H.pylori治疗前。结论IL-8表达增强可能与HP相关性胃疾病有关。H.pylori感染可能通过IL-8介导促进癌前状态的发生。根除H.pylori治疗可以影响癌前状态。

应用差异显示法对小细胞肺癌转移相关基因的筛选

目的:筛选与人小细胞肺癌转移相关基因,揭示肺癌的转移机制。方法:采用激光俘获显微切割(LCM)及mRNA差异显示技术(DD)对手术切除的小细胞肺癌、癌转移淋巴结进行筛选并克隆与转移相关的基因片段,测定其序列后在基因库(GenBank)中进行BLAST检索分析其同源性。结果:小细胞肺癌原发灶与癌转移淋巴结的基因表达具有明显差异,共获得差异片段(EST,表达序列标签)24个,选择差异明显的3个片段克隆测序后,发现3片段均位于肿瘤高度相关的3q、7q和10q,均为未知序列,未发现同源基因,可能为新的基因片段。用RT-PCR对位于抑癌基因PTEN上游的L1片段进行验证的结果证实了该片段在小细胞肺癌的高表达率,具有统计学意义(P<0.05)。结论:人小细胞肺癌原发灶与癌转移淋巴结的基因表达存在差异,所测序的3个基因片段均为未知基因序列,这些片段可能为小细胞肺癌的转移相关候选基因,其序列和功能值得进一步深入研究。应用DDRT-PCR技术有望找到调控肿瘤转移的基因,为肿瘤的诊断和治疗提供新的线索。

中药对低密度脂蛋白受体基因表达的影响

目的 :探讨中药对低密度脂蛋白受体基因表达的影响。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 30例高脂血症患者外周血淋巴细胞低密度脂蛋白受体 (L DL R)信使核糖核酸 (m RNA)水平在用药前后的变化。结果 :中药组 15例患者用药后的 L DL R m RNA水平 (0 .6 2 5 4± 0 .16 6 9)较用药前 (0 .2 46 5±0 .1316 )明显升高 (P<0 .0 1)。结论 :中药复方颗粒剂可增强高脂血症患者外周血淋巴细胞 L DL R基因表达水平 ,在分子水平上 ,为中药降脂作用的机制研究提供科学依据。

全反式维甲酸诱导大鼠胚胎马蹄内翻足模型

目的 利用全反式维甲酸 (ATRA)诱导Wistar大鼠 ,建立马蹄内翻足动物模型 ,分析ATRA最适诱导剂量。方法 将Wistar孕鼠随机分为 4个用药组及对照组 ,孕 10d分别按 12 0 ,130 ,135 ,14 0mg/(kg·bw)不同剂量经口给予ATRA矿物油混悬液和纯矿物油。孕 2 1d剖检胎鼠 ,并对足踝部切片观察。结果 ATRA可诱导Wistar大鼠胚胎发生马蹄内翻足样畸形及其它畸形 ,发生率随剂量的增加而增高 ;单纯马蹄内翻足样畸形的发生率 135mg/(kg·bw)组为最高 ,达 2 9 2 7%。结论 135mg/(kg·bw)ATRA是诱导马蹄内翻足样畸形的理想剂量。

HLA-B对喉癌Hep2细胞生物学行为的影响

目的探讨人类白细胞组织相容抗原(HLA)-B在喉癌发生、发展中的作用。方法采用RNA干涉技术下调Hep2细胞中HLA-B基因表达。用干涉效应最明显、转染siRNA的细胞作为观察组,转染PBS及无义siRNA的细胞作为对照1组及对照2组。采用流式细胞仪、MTT和细胞体外侵袭力分析方法检测各组细胞凋亡率、增殖情况、细胞周期及局部侵袭能力。结果 RNA干涉7 d观察组细胞凋亡率明显高于两对照组,细胞周期阻滞于S期;细胞增殖能力及局部侵袭能力明显强于两对照组,P均<0.05。结论 HLA-B表达降低或缺失在喉癌的发生、发展中起促进作用。

喉癌组织中Mst1基因表达与喉癌的相关性及其对人Hep2细胞化疗敏感性的影响

目的探讨Mst1基因在喉癌发生、发展中的作用,并指导化疗用药。方法荧光定量PCR法检测74例喉癌及相应癌旁组织中Mst1 mRNA表达;实验分为实验组、空白对照组和阴性对照组,实验组转染真核表达载体pcDNA3.1-Mst1,空白对照组未转染,阴性对照组转染空载体。Western blot法检测三组Mst1蛋白表达。三组细胞培养基中分别加入0、1、3、5μg/ml顺铂(DDP)进行干预,作用12 h,MTT法测定三组细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果喉癌组织中Mst1 mRNA表达明显低于癌旁组织;实验组Mst1蛋白表达、细胞凋亡率明显高于空白对照组及阴性对照组,细胞增殖活力明显低于空白对照组及阴性对照组;DDP干预后,随DDP浓度增加,实验组细胞凋亡率明显升高,增殖活力明显降低。结论喉癌发生与Mst1 mRNA表达降低相关,Mst1蛋白表达增加能抑制Hep2细胞增殖并促进凋亡,并可在一定程度上增强肿瘤细胞对DDP的敏感性,可将Mst1基因作为指导喉癌化疗用药的参考指标。

喉癌中p15、p16基因纯合缺失与EGFR基因扩增相关性研究

研究p15、p16基因缺失和EGFR基因扩增的相关性及其与喉癌发生、发展的关系。提取喉癌新鲜组织中基因组DNA ,采用聚合酶链反应技术 ,分别对 3 0例喉癌进行p15基因第 2外显子 (p15E2 )和p16基因第 2外显子(p16E2 )进行纯合缺失研究 ;应用FISH方法进行喉癌实体瘤EGFR基因扩增研究。p15E2纯合缺失率为 13 3 % (4 3 0 ) ,p16E2纯合缺失率为 16 7% (5 3 0 ) ,p15E2、p16E2共同缺失率为 6 7% (2 3 0 )。在 3 0例喉癌实体瘤EGFR基因扩增频率为 3 0 % (9 3 0 ) ,扩增 2～ 8倍。p15E2和p16E2纯合缺失以及二者共同缺失与EGFR基因扩增相关 ,可能引起细胞周期失控而导致细胞增殖紊乱 。

SH3GL2基因对喉癌细胞增殖、凋亡的影响及在化疗增敏中的作用

目的探讨SH3GL2基因对喉癌细胞凋亡、侵袭能力的影响,及其对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响。方法构建重组载体pcDNA3.1-SH3GL2,转染Hep2细胞;RT-PCR、Westernblot检测转染后SH3GL2基因的表达改变;MTT法测定细胞毒性指数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用DDP后检测细胞的凋亡和增殖情况。结果成功构建重组载体;转染Hep2细胞后SH3GL2基因的表达与对照组比较有明显增强,凋亡明显升高(P<0.05),增殖能力明显下降(P<0.05);与DDP处理组比较,联合处理组细胞的凋亡增加更为明显(P<0.05),对细胞增殖能力的抑制也更为显著(P<0.05)。结论 SH3GL2基因表达增高能够抑制Hep2细胞的增殖,促进细胞凋亡,并能够在一定程度上增强Hep2细胞对化疗药物DDP的敏感性。

nm23-H1基因在喉癌中杂合性丢失和微卫星序列不稳定性分析及表达的研究

目的 探讨nm2 3 H1基因在喉鳞状细胞癌中杂合性丢失 (LOH)及表达情况。方法 选择nm2 3 H1基因内部及附近 5个微卫星多态标记 ,对 72例喉癌标本进行杂合性丢失和微卫星序列不稳定性检测 ,同时以RT PCR方法分析 38例配对喉鳞状细胞癌标本中nm2 3 H1基因表达情况。结果 LOH涉及至少 1个位点的频率高达 76 .39% ,5个位点均有LOH ,以D17S16 6 5处频率最高 ,达 38.10 %。 3个位点出现MI ,最高为 12 .70 %。nm2 3 H1基因杂合性丢失及微卫星不稳定与淋巴结转移、临床分期和肿瘤分化无显著相关性 (P >0 .0 5 ) ,但D17S16 6 5位点高LOH频率与低分化相关 (P <0 .0 5 )。癌、癌旁及转移淋巴结中nm2 3 H1表达不同 ,但差异无统计学意义 ,表达水平与淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。结论 nm2 3 H1基因可能在喉鳞癌发生中起作用 ,杂合性丢失可能是影响基因功能的主要机制。