烟草内生细菌分离方法的优化研究

用研磨组织稀释分离法与表面消毒有效性评价相结合的方法确定了适宜烟草组织的表面消毒方法以及内生细菌分离培养基。采用1%次氯酸钠浸泡5 min,再用75%酒精浸泡2分钟能够100%去除表面附生菌,并且分离得到更多的内生细菌。研究比较了TSA、NA、PDA、LB四种常用的细菌分离培养基在分离烟草内生细菌中的差异,其中TSA和NA培养基分离得到的内生细菌数量较高,TSA培养基从烟草根、茎、叶中分离出的内生细菌数量分别为5.18 log cfu/g.fw、2.17 log cfu/g.fw、4.69 log cfu/g.fw;NA培养基分别为5.01 log cfu/g.fw、1.81 log cfu/g.fw、4.93 log cfu/g.fw。对分离得到的127株内生细菌进行16S rDNA序列测定表明,TSA和NA培养基分离得到的内生细菌种类最多,其中TSA培养基分别从根、茎、叶中分离到9、7、13种内生细菌;其次是NA培养基,分别从根、茎、叶中分离到8、6、10种内生细菌。结果表明,采用TSA和NA培养基分离烟草内生细菌,可以达到较为理想的分离效果。

烟草内生细菌种群特征分析

为探明烟草内生细菌种群特征及其与烟草的关系,采用研磨组织稀释分离法分离不同品种、不同生长期、不同器官的烟草内生细菌,以各菌群出现与否为指标,用类平均法进行系统聚类分析,对内生细菌的种类组成,分布特征进行了研究。结果表明,烟草内生细菌种类组成存在品种差异、生长期差异和组织部位差异;优势菌群随分离部位和生长时期的不同而变化。Bacillus sp.和Rhizobium sp.是4个品种烟草叶片共有的优势类群,从苗期到团棵期,内生细菌的种类在增加,B.pumilus广泛存在于成熟期烟草的根、茎、叶中,且为主要菌群。部分内生细菌具有组织偏好性,Micrococcus sp.和Staphylococcus sp.对烟草的茎部具有偏好性,B.cereus对烟草叶片具有偏好性。研究结果为烟草有益内生细菌的筛选奠定了基础,并为内生细菌在其它植物中的开发利用提供理论依据。