基于k-means聚类算法的兴义维蚋幼虫龄数的估算

目的探讨基于k-means聚类算法估算兴义维蚋幼虫的龄数,以明确虫龄与日龄及鳃斑发育阶段的关系。方法采集贵州青岩河流中兴义维蚋虫卵,于实验室的蚋类饲养系统中培育至幼虫,每日收集幼虫至大量化蛹,持续20 d;收集到幼虫1112头,于体视显微镜下测量头壳长(HCW)、后颊长(PGL)、上颚基横骨长(MPL)及体长(BL),观察不同虫龄幼虫的破卵器、鳃斑及性腺的形态学特征,并判断其龄期、分析虫龄与日龄和鳃斑发育关系;选取具有明显腮斑发育的兴义维蚋幼虫10头、制作石蜡切片,采用HE染色鉴定精巢和卵巢、辅助确认性别鉴定结果;采用k-means聚类方法划分形态计量学数据、利用Brooks-Dyar定律检测k-means聚类结果,R语言下行聚类与Brooks-Dyar定律检验、t检验等,根据拟合度分析判断兴义维蚋幼虫龄数。结果1112头兴义维蚋幼虫中有破卵器89头,出现鳃斑发育334头,6~7龄幼虫320头,有预蛹特征34头;Brooks-Dyar定律与破卵器、鳃斑形态特征显示7龄幼虫假设符合昆虫幼虫生长规律;组织学观察见幼虫精巢为椭圆形、体积大、外有几丁质层包裹,卵巢为长条形、体积小、后端有色素细胞包裹;鉴定6、7龄幼虫性别结果,仅7龄幼虫雌雄性PGL有差异(P<0.05);幼虫虫龄与日龄、鳃斑发育关系结果显示,约2~3 d对应1个幼虫生长龄期,第17天首见幼虫蛹化,6龄幼虫出现明显的鳃斑。结论兴义维蚋幼虫具7龄,实验室下幼虫发育约需3周,最短17 d;腮斑发育起始于6龄,7龄出现明显形态学特征。

兴义维蚋成熟幼虫消化道组织学研究

应用石蜡连续切片技术对兴义维蚋成熟幼虫(具鳃斑)消化道的组织学结构进行研究。其消化道由前肠、中肠和后肠等3部分组成。前肠分为咽、食道和前胃,口内侧上方内陷形成一对形状不规则的上唇腺,咽前段存在骨化食窦,食道内陷形成套管样前胃。中肠以4个大型胃盲囊为起点,根据肠壁细胞形态差异分为3个区域。后肠由幽门、回肠和直肠组成,回肠与直肠结构差异明显。4条马氏管从中肠与后肠的分界处分出。纺织腺形态特异。

兴义维蚋中枢神经系统的组织学观察

目的研究兴义维蚋成熟幼虫、成熟蛹和新羽化成虫中枢神经系统的组织解剖学结构特点。方法2009年8～11月在贵阳市花溪牛角岛溪流中采集蚋类幼虫，依据鳃斑、后颊裂和直肠鳃等形态学特征筛选出兴义维蚋成熟幼虫：2011年3月在贵阳大凹和青岩古镇旁小溪中采集成熟蛹，依据蛹茧和呼吸丝特征筛选出兴义维蚋成熟蛹，将蛹孵化为新羽化成虫。成熟幼虫、成熟蛹和新羽化成虫各取30只进行石蜡连续切片，经苏木素-伊红（HE）染色后对神经系统进行组织学观察。结果各个发育时期的兴义维蚋的中枢神经系统均由脑、食道下神经节和腹神经索3部分组成．止于第6腹节处。幼虫的脑分为左右2个半球，神经髓较简单，腹神经索包括3对胸神经节和8对腹神经节，第Ⅵ-Ⅷ腹神经节有愈合为复合神经节的倾向。蛹和成虫的脑部明显分化为前脑、中脑和后脑3部分，腹神经索包括3对胸神经节和5对腹神经节，及纵贯各神经节的神经索。脑和各体神经节的组织学结构相似，由外到内依次是神经鞘、神经细胞体层和髓质层。前脑叶的髓质层复杂，包括一对蕈形体、一个中央复合体和一对附叶，每侧蕈形体出现2个不发达的次生性融合的冠；视叶由视内髓、视外髓和视神经节层组成；中脑由中脑叶和触角中枢形成；后脑通过围食道神经与食道下神经节相连。结论兴义维蚋的中枢神经系统组成与其他蚋种相似，但在成熟幼虫腹部神经节数目上存在差异。

生物技术专业学生对细胞生物学设计性实验的评价分析

目的:探索医学生物技术专业细胞生物学设计性实验的教学方法。方法:开设"中药或保健食物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力影响"的设计性实验,采用问卷调查方式,对教学效果进行评价。结果:教学效果良好,学生实验设计、操作和分析能力提高。结论:设计性实验在一定程度上有利于学生综合素质的培养,实施过程需要逐渐完善。

两种鼠蚤成熟过程中组织化学研究Ⅰ糖原和PAS物质

目的 :探讨不等单蚤Monopsyllnsanisus(Rothchild)和缓慢细蚤Leptopsyllasegnis(Sch nherr)吸血消化成熟过程中糖原和PAS物质的变化。方法 :用高碘酸 希夫反应 (periodicacid SchiffreactionPAS)法显示未吸血蚤、吸血后不同消化时间蚤体内糖原和PAS物质。结果 :2种蚤糖原和PAS物质以脂肪体含量最高。吸血后成蚤消化道各部分PAS反应均有增高 ,不同消化时间 (2 4、4 8、72h)不存在显著差异。 2种蚤中雌蚤吸血后卵黄细胞发育过程中PAS反应的变化相似 ,但不等单蚤发育较缓慢细蚤迟缓。结论 :吸血将导致 2种蚤消化道糖原不同程度的增加 。

两种鼠蚤在新羽化和吸血后不同时间三种酶的组织化学研究

采用组织化学技术 ,研究了不等单蚤Monopsyllusanisus (Rothschild)和缓慢细蚤Leptopsyllasegnis (Sch nherr)新羽化和吸血后 2 4h、4 8h和 72h碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和三磷酸腺苷酶的分布和活性。显微摄影及定量图像分析结果显示 :新羽化蚤碱性和酸性磷酸酶主要存在于中肠、神经细胞核、精子束头部、精巢附腺、射精管、输卵管和受精囊附腺中 ;三磷酸腺苷酶各组织中均有分布。吸血消化后 ,两种蚤中肠 3种酶活性均有增强 ;除碱性磷酸酶在消化 72h后酶活性有所下降外 ,其余不同消化时间酶活性增强程度上不存在显著差异。两种蚤卵母细胞发育成熟过程中

两种鼠蚤成熟过程中组织化学研究:Ⅱ蛋白质

目的 了解不等单蚤Monopsyllusanisus (Rothschild)和缓慢细蚤Leptopsyllasegnis (Sch nherr)吸血消化成熟过程中蛋白质分布和含量变化。方法 用Bonbag氏汞—溴酚蓝法显示并进行显微摄影及定量图像分析。结果 显示蛋白质普遍存在于两种蚤体内。雌蚤吸血后整个消化道上皮蛋白质反应较未吸血时有不同程度增强 ,至消化 72h后反应有所减弱。雄蚤以中肠反应增强较为明显 ,消化 72h后反应同样有所减弱。结论 吸血后 ,2种雌蚤卵母细胞发育过程中蛋白质反应变化相似 ,但不等单蚤卵母细胞蛋白质沉积较缓慢细蚤慢。吸血将导致 2种蚤消化。

不等单蚤和缓慢细蚤吸血前后脂肪和非特异性酯酶的组织化学研究

采用组织化学和显微摄影及定量图像分析技术,研究了不等单蚤Monopsyllus anisus(Rothschild)和缓慢细蚤Leptopsyllasegnis(Sch nherr)在新羽化和吸血后发育过程中脂肪和非特异性酯酶的分布及活性。结果显示,两种新羽化蚤脂肪主要存在脂肪体中,非特异性酯酶则主要存在于唾液腺和神经链中。不等单蚤吸血后中肠脂滴增加,非特异性酯酶活性增强,随消化时间的延长脂滴逐渐减少,但不同消化时间非特异性酯酶活性差异不显著;而缓慢细蚤吸血后中肠未见或偶见少量脂滴,非特异性酯酶活性也有增强,但酶活性低于相同消化时间的不等单蚤。卵母细胞发育过程中脂滴增多,非特异性酯酶活性逐渐增强,且不等单蚤酶活性强于缓慢细蚤的。

贵州籍汉族大学生的指纹和白线研究

印泥法采集贵州籍19～24岁汉族青年大学生300例的指纹(男146人,女154人),放大镜下计数并纹型分析,为体质人类学和肤纹学研究提供基础指纹参数。结果显示斗形纹W占48.17%,箕形纹L占49.23%,弓形纹A占2.60%;纹型分布频率L>W>A;同名指各组合频率按由高到低排序为:W/W>L/L>L/W>A/L>A/A>A/W;一手五指组合频率排序为:OLW>同型组合>ALW>ALO>AOW。男性总TFRC为138.24±36.20,女性为128.48±37.07;男女合计白线出现率为24.20%(男:16.99%,女:31.04%),与其它汉族群体比较存在统计学差异。

利用DNA条形码技术发现贵州省蚋类新记录

目的：综合利用DNA条形码序列和形态学特征鉴定蚋种。方法：利用车载式捕虫网于2014年7-9月在贵州省雷山、江口、德江、关岭和开阳5县采集蚋类标本，并进行初步的形态学鉴定；测定雌蚋DNA条形码序列，利用生命数据条形码系统（ BOLD ）及系统发育分析方法鉴定蚋种。结果：初步确定划分蚋属下蚋种的K2P距离阈值为4%，利用该阈值及生命数据条形码系统鉴定153只雌蚋为麻子绳蚋。结论：麻子绳蚋为贵州省蚋类新记录，分布于雷山、江口、德江、关岭和开阳5县。

兴义维蚋气管鳃形态发育过程的初步研究

目的:探究兴义维蚋幼虫期气管鳃形态发育的基本过程。方法:参考文献设计、建造蚋类实验室饲养系统,野外采集蚋卵、幼虫和蛹,用常规形态学和DNA条码技术鉴定蚋种,并在自行设计的饲养系统中饲养,每24 h收集幼虫;在显微成像系统下观察蚋幼虫各龄期气管鳃形态。结果:改进和建立了原代野生蚋类人工饲养系统,鉴定采集的蚋种为兴义维蚋,其1~5龄幼虫期无明显气管鳃分子化形态,6龄幼虫中可见囊状未分支气管鳃,7龄幼虫时气管鳃发生分支化,形成8条呼吸丝,分4对,其中5对呼吸丝透过幼虫表皮可见。结论:成功设计并建立了野生蚋类原代人工饲养系统,兴义维蚋1~5龄幼虫气管鳃呈透明团块状,6龄分支化形态为囊状未分支形态,7龄幼虫出现完全的分支化形态。

利用车载式采集方法研究贵州飞行昆虫多样性

目的:探讨利用车载式采集方法研究贵州飞行昆虫多样性的可行性。方法:选择贵州省7县,采用自制车载式捕虫网分别在日出和日落前后1 h以车速48 km/h沿河采集飞行昆虫,比较日出和日落前后1 h采集的各类飞行昆虫的数量,体视显微镜下进行形态学初步分类。结果:共采集昆虫标本49 622只,日出前后1 h采集数量(7 842只)低于日落前后1 h采集数量(41 780只),差异有统计学意义(P<0.05);所采集除昆虫标本中除1只为双尾纲昆虫外,其余均为昆虫纲昆虫,共8目145科,其中20科(分别属于5个目)此前未见分布于贵州的报道,优势类群鞘翅目、双翅目、鳞翅目、膜翅目的科数分别占总科数的26.2%、25.5%、20.7%和20.0%,半翅目和蜻蜓目各占4.8%和1.4%,襀翅目和脉翅目各占0.7%。结论:利用自制车载式捕虫网采集飞行昆虫研究当地昆虫多样性的方法可行,日落前后采集效果最佳。

构建以自主学习为核心的医学遗传学课程评价体系

线上教学工具"雨课堂"结合医学遗传学课程的评价体系改革,做好终结性评价的同时加强形成性评价。应用课件预习、出勤率、课堂答题、阶段小测、案例学习、课后作业和期末闭卷考试等多种形式,分层次分指标从学习态度和效果上量化评价课堂教学和课下自学。课后问卷调查结果显示满意度较高,多元评价体系能有效促进自主学习。

医学实验技术专业本科生开展细胞生物学开放性实验的探索

在医学实验技术专业本科生中,以日用化学品对蚕豆等植物的根尖细胞有丝分裂的影响为题,进行细胞生物学开放性实验的教学实践。探讨实验选题与课程的相关性,统筹安排实验实施,课程教师和导师双身份带教,科研和教学实验室共开放。细化教学环节,分析教学效果,提出教学反思,为该专业开放性实验教学模式的建立进行有益探索,推动实验教学改革的发展。

医学细胞生物学CPBL+LBL大班教学模式的构建和实践

为研究CPBL+LBL双轨交互教学模式在医学细胞生物学大班中的教学效果,将贵州医科大学2017级临床医学A班(140人)作为教改班,实施CPBL+LBL教学;临床医学B班(139人)和护理甲班(126人)作为对照班,实施传统LBL教学。教学考核显示教改班学生考核平均成绩和及格率均优于对照班。问卷调查反馈,学生更倾向于参与CPBL+LBL双轨交互教学,认为对提出问题、文献查阅、融会贯通知识、临床思维、语言表达和团队合作能力的培养都有一定程度的提高。

医学延伸的有丝分裂混合式教改案例

在医学细胞生物学课程中,建立有丝分裂初级记忆染色体形态、次级理解行为机制和高级延伸医学问题的分层次教学目标,分阶段开展线上+线下混合式教学。依托优慕课、雨课堂和互联网文献检索,形成课前线上预习、课堂线下实操和课后线上拓展的三环节教学体系。在高中生物细胞分裂的知识建构上,将教学从细胞水平延伸到分子水平,从正常有丝分裂延伸到异常有丝分裂,从书本延伸到日常生活和医学问题,保证教学的深度、广度和难度,重塑课堂。

兴义维蚋幼虫扭动摄食方式的神经-肌肉结构基础

蚋类幼虫为河流清洁者,可作为水污染的指标。本文用抗辣根过氧化物酶抗体(anti-HRP)和鬼笔环肽(phalloidin),通过免疫荧光显示兴义维蚋Simulium xingyiense幼虫腹神经索及外周神经与肌肉连接结构。结果表明幼虫腹神经索由11对神经节及连接的神经索组成。每对体神经节由两团神经胞体聚合而成,细胞核分布呈无头无尾的Φ形。在1~5腹神经节两侧,纵神经连接横神经呈现“梯形结构”;虫体腹部肌肉分横肌、纵肌和斜肌3类肌群。神经节中部发出两对侧神经入腹肌,再继续分支,其神经末梢呈链珠状突触结构连接肌肉,增加神经与肌肉的接触面积。这种神经-肌肉的连接方式可能与兴义维蚋幼虫扭动摄食行为有关。本研究初步阐述了兴义维蚋幼虫腹神经索及腹部神经与肌肉连接的细微结构基础。

贵州省青岩地区蚋类自然感染索科线虫的季节性动态变化

目的 了解贵州省青岩镇蚋类自然感染索科线虫状况及其感染率的季节性变化。方法 2013年3月至2014年2月,每月上旬在青岩古镇旁溪流中定点采集蚋类幼虫,调查线虫感染率,并分析季节性变化。结果 青岩地区主要存在兴义维蚋和五指山蚋2个蚋种。除2013年10月外,各月采集的兴义维蚋幼虫数量均高于五指山蚋。2种蚋均可被索科线虫感染,兴义维蚋感染青绿色索科线虫,五指山蚋感染白色索科线虫。全年共获取兴义维蚋幼虫12649条,平均寄生感染率为4.70%（595/12649）,每月寄生感染率为1.26%-21.57%;五指山蚋幼虫3694条,平均寄生感染率为20.84%（770/3694）,每月寄生感染率为1.33%-43.05%。兴义维蚋感染索科线虫高峰主要在秋季,而五指山蚋感染高峰在冬季;五指山蚋的索科线虫寄生率高于兴义维蚋。结论 贵州省青岩镇蚋类感染索科线虫的感染率随季节变化。

兴义维蚋实验室饲养条件探索

【目的】旨在探索兴义维蚋Simulium xingyiense实验室饲养方法,使其能在实验室内连续饲养2代。【方法】设计制作羽化杯、交配管、喂血装置和产卵管,并改造市售小型鱼缸供蚋卵孵化及后续饲养。第1代饲养:将野外采集得到的兴义维蚋蛹置于羽化杯中饲养获得成虫;在交配管中诱导成虫交配(30 min);将雌蚋转移至喂血装置中喂养(90 min);将饱腹雌蚋置于产卵管中产卵;将产出的卵置于改造过的小型鱼缸中孵化,并饲养至幼虫化蛹。第2代饲养:除蛹来源于第1代饲养外,所有步骤同第1代饲养。全部实验在温度20℃、相对湿度70%下进行,但在喂血环节分别测试喂血培养基不同温度和成分对饱腹率和产卵率的影响。【结果】添加ATP的血清培养基更能吸引雌蚋吸血;在喂血培养基温度为34℃时雌蚋饱腹率最高;兴义维蚋雌虫喜食牛血清培养基;喂血培养基内血清含量越高,饱腹雌蚋产卵率越高;在最适喂养条件下雌蚋饱腹率为25.3%,产卵率为29.4%,平均每只雌蚋产163.5个卵,蚋卵孵化率为85.5%。幼虫生长周期为13-15 d,结蛹率为10.7%;蛹经4-6 d可羽化为成虫,羽化率为95.2%。【结论】兴义维蚋可在实验室内连续饲养2代,能够满足后续分子生物学实验要求,但幼虫结蛹率较低,提示改善幼虫饲养、提高结蛹率可能是最终建立兴义维蚋实验室品系的关键所在。