加味塔布森-2提取工艺优化及其对破骨细胞分化的抑制作用

目的优化蒙药加味塔布森-2(MT-2)的提取工艺,并考察按最优工艺所制提取物对破骨细胞分化的抑制作用。方法采用网络药理学方法筛选MT-2工艺优化的指标性成分;以上述指标性成分的度值和含量计算综合评分,在单因素实验的基础上,使用Box-Behnken设计-响应面法优化MT-2的提取工艺并验证。以核因子κB受体激活蛋白配体(100 ng/mL)诱导RAW264.7细胞以制备破骨细胞分化模型,考察按最优工艺所制MT-2提取物(18.6、37.2、74.4 ng/mL)对破骨细胞分化的抑制作用。结果网络药理学筛选所得指标性成分包括绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、异绿原酸A、1,5-二咖啡酰奎宁酸、羟基红花黄色素A、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)。MT-2最优提取工艺为乙醇体积分数60%,料液比1∶14(g/mL),提取时间94 min,提取2次;3次验证实验所得平均综合评分为95.50,与预测值(95.75)的相对误差为-0.26%。与破骨分化模型细胞比较,经最优工艺所制MT-2提取物处理后的细胞多为单核圆形细胞,破骨细胞数量均显著减少(P<0.05),且这种抑制作用有随药物质量浓度增加而增强的趋势。结论优化的MT-2提取工艺稳定、可行;所得提取物可抑制破骨细胞分化。

基于HPLC-Q-Exactive-MS/MS整合网络药理学研究加味塔布森-2有效成分及其抗骨质疏松机制

目的鉴定加味塔布森-2入血成分,并结合网络药理学阐述其治疗骨质疏松的作用机制。方法采用HPLC-Q-Exactive-MS/MS对加味塔布森-2入血成分进行鉴定;在此基础上结合SwissTarget Prediction与SuperPred数据库进行入血成分的靶点预测,同时在DisGeNET数据库中搜索骨质疏松相关的疾病靶点,利用Cytoscape软件构建“入血成分-靶点-疾病”网络模型,运用String数据分析平台进行蛋白互作网络分析,并且利用David数据库对核心靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析,最后使用分子对接对网络药理学内容进行初步验证。结果最终确定入血成分21个,通过网络药理分析得到加味塔布森-2抗骨质疏松的核心靶点11个。对11个核心靶点进行GO功能注释和KEGG通路分析后,发现加味塔布森-2抗骨质疏松的信号通路主要包括HIF-1、雌激素、MAPK、甲状腺素、TNF、mTOR、PI3K/AKT等。结论该方法初步明确了加味塔布森-2的入血成分及潜在作用机制,为加味塔布森-2药理作用机制的进一步研究提供科学依据。

基于“移行-靶点-网络”策略探究红花心脑轴协同起效的物质基础及作用机制

目的:以红花在血、脑中移行成分为基础,结合网络药理学筛选红花干预心脑轴的靶点、网络,进而明确红花在心脑轴协同起效的物质基础及作用机制。方法:采用HPLC-Q-Exactive-MS/MS对红花血、脑中移行成分进行鉴定;利用Swiss Target Prediction与SuperPred数据库实现对血和脑中移行成分的靶点预测。在疾病数据库中搜索心脑轴相关的疾病靶点,利用Cytoscape软件构建“血、脑中移行成分-靶点-疾病”网络模型,借助String数据分析平台进行蛋白互作(Protein-protein interaction, PPI)网络分析,运用DAVID数据库对核心靶点开展GO(Gene Ontology)富集分析和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析。对度值分别位居前十位的血、脑移行成分和靶点进行分子对接,探究红花心脑轴协同起效的物质基础及作用机制。结果:确定入血且入脑成分30个,通过网络药理分析得到红花心脑轴协同起效的核心靶点48个。对以上核心靶点进行GO和KEGG分析,红花心脑轴协同起效的信号通路主要包括磷酸肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)等信号通路。分子对接结果显示,活性成分与核心靶点结合效果良好。结论:红花中的羟基红花黄色素A、醌式红花苷、野黄芩素、芹菜素、绿原酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷等活性成分可能为红花心脑轴协同起效的物质基础,以上活性成分可能通过干预AKT1、TP-53、TNF等靶点,对PI3K-Akt、HIF-1、AGE-RAGE等信号通路在一定程度上起到调节作用,从而发挥心脑轴协同治疗作用。