反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中的甘草酸铵

目的 :建立反相高效液相色谱法测定甘草甜素粉剂和四君子汤灌胃大鼠血浆中的甘草酸铵。方法 :以联苯为内标 ,甲醇 -水 -醋酸 (80∶19∶1)为流动相 ,采用ODS - 3色谱柱 (15 0mm× 4 6mm ,5 μm) ,检测波长 :2 5 0nm ,流速 :1 0mL·min-1。结果 :最低检测限为 2ng ,最低检测浓度为 0 2 2 8μg·mL-1,日间和日内RSD <10 % ,回收率为 92 46 %～10 3 2 % ,RSD为 3 8%～ 6 0 % ,在 1 2 2 4～ 38 6 μg·mL-1和 40 8～ 146 8 8μg·mL-1范围内均呈良好的线性关系。结论 :本法简便、快速、灵敏而准确 ,适用于大鼠灌胃不同甘草酸铵制剂后血浆中甘草酸铵的测定 ,为“复方效应成分动力学”研究奠定了方法学基础。

脾虚证大鼠甘草甜素药物动力学特征与胃肠动力的关系研究

目的 :探讨脾虚证大鼠甘草甜素 (GL)的药物动力学 (PK)特征 ,并从胃排空、脑 肠肽两方面探讨其机制。方法 :利血平作用于大鼠 14d ,复制实验性脾虚模型 (C组 ) ;用四君子汤 (A组 )和六味地黄汤 (B组 )治疗以反证 ;用高效液相色谱 (HPLC)法测定大鼠体内GL的血药浓度 ;用同位素检测其胃液体排空功能 ;用放射免疫分析法 (RIA)分析下丘脑和血浆中胃动素 (MOT)、胆囊收缩素 (CCK)及生长抑素 (SS)的浓度。结果 :GL在体内为二室房室PK模型。与正常对照组 (D组 )比较 ,C组大鼠药物动力学相关参数降低 ;胃排空率下降 ,MOT和SS在血浆及下丘脑的水平下降 ,而CCK则上升 ;A组上述各值恢复正常 ,与D组比较无统计学差异 (P >0 .0 5) ;B组与A组比较仍有显著差异 (P <0 .0 5,P <0 .0 1)。结论 :脾虚大鼠胃排空、脑 肠肽浓度的异常 。

不同脾虚时期大鼠甘草甜素药物动力学特征及其机制的探讨

目的 :探讨脾虚证甘草甜素 (GL)的药物动力学 (PK)特征及其在胃肠机械运动方面的机制。方法 :利血平作用于大鼠 7天和 14天 ,制成实验性脾虚短期 (A组 )和长期 (B组 )模型 ;用四君子汤和六味地黄汤反证 ;用高效液相色谱 (HPLC)法测定大鼠体内GL的血药浓度 ;用高灵敏度传感器记录胃和十二指肠运动波。结果 :与正常对照组 (E组 )比较 :①A组大鼠GL体内为一室房室PK模型 ,其它组均为二室房室模型 ;A组和B组大鼠AUC(16 346 9.8和 950 5.18vs 2 13540 .53,μg .min .mL- 1)、Cmax(872 .2 2和 16 2 .32vs2 12 2 .0 9,μg/mL)和T1/2 ka(16 .39和 2 .86vs 4 7.4 6 ,min)降低 ,且B组较A组明显 ;B组大鼠K12 (0 .0 4vs 0 .0 0 0 0 4 ,min- 1)增大 ,β(0 .0 0 7vs 0 .0 2 ,min- 1)减小。②A组大鼠十二指肠运动增强 ,B组大鼠则运动功能减弱 ,两组的胃运动均减弱 ,且B组较A组更弱。③经四君子汤预防性治疗的大鼠 (C组 )胃肠运动和GL的PK参数与E组比较无显著差异 ,但经六味地黄汤治疗的大鼠 (D组 )各值与E组比较存在显著差异 ,而与B组大鼠无显著差异。结论 :脾虚大鼠对经口服GL后的吸收、转运和消除均存在异常 ;血药浓度和生物利用度降低 ,且脾虚程度越重 ,GL的有效吸收越低 ;胃运动功能减弱 。

脾虚证大鼠组织和血浆中SS,CCK,Mot含量的变化

目的 探讨胃肠激素在脾虚证发病中的作用。 方法 采用放射免疫分析法测定实验性脾虚证大鼠不同造模时间(7d,14d)胃窦、十二指肠、空肠、下丘脑及血浆中胃动素(Mot)、生长抑素(SS)、缩胆囊素(CCK)含量并与正常对照组和四君子汤预防组比较。 结果 脾虚早期(7d):SS在血浆、下丘脑中含量升高(106.5±13.9和143.1±8.5 vs 85.2±4.3和136.9±40.9)(P<0.01,P<0.05),外周组织中含量下降(27.5±1.6,22.7±1.2和19.5±2.4 vs 91.4±9.6,50.7±5.6和55.5±6.8,P<0.01);CCK(88.1±5.2,59.2±3.5,79.1±8.7,68.5±4.7和6.9±0.2)和Mot(76.4±8.0,51.2±1.9,37.2±7.3,63.2±2.2和99.8±6.5 vs 73.0±2.4,43.1±2.3,63.1±7.1,59.2±6.7,3.8±0.1和53.2±9.3,35.6±3.0,29.5±7.6,46.6±7.0,82.7±9.3)在组织和血浆中含量均升高(P<0.01,P<0.05),脾虚晚期(14d):SS在下丘脑(98.3±28.7)、血浆(68.2±2.6)中含量下降,外周组织中含量(119.3±5.2,98.4±9.2和88.2±2.8)升高(P<0.01);Mot在组织(32.5±5.6,27.9±1.8,21.62±6.2和32.3±5.1,P<0.01)和血浆(64.5±5.4,P<0.05)中含量均下降,CCK在下丘脑(84.1±1.5,P<0.01)及胃窦(54.2±6.4,P<0.01)组织中含量升高,在血浆(2.8±0.4)和肠道组织(43.2±2.3,36.5±3.3,P<0.01)

四君子汤灌胃大鼠甘草甜素血药浓度测定及其药代动力学研究

目的:观察四君子汤灌胃大鼠体内甘草甜素的药代动力学特征,为复方效应成分动力学研究提供实验依据。方法:建立反相HPLC测定大鼠血浆中甘草甜素含量的方法,不同时间点取大鼠四君子汤灌胃后血浆并分别测定其GL浓度,得其药时曲线,经3P87软件处理数据得其药动学参数。结果:大鼠血浆中 GL浓度在1.224 μg/ml至38.655 μg/ml,线性关系良好,四君子汤灌胃甘草甜素在大鼠体内药时过程符合二房室开放模型,吸收和分布较为迅速,排泄缓慢。结论:所建立的反相HPLC法灵敏、可靠、快速,可较好地用于甘草甜素体内的吸收代谢研究以及甘草制剂等的测定,本实验研究为甘草及其复方药动学研究奠定了基础。

脾虚早期与脾虚期大鼠组织和血浆中SS、CCK、MOT含量变化的探讨

目的 探讨胃肠激素在脾虚证大鼠体内的动态变化规律,进一步揭示脾虚证的本质。方法 随机将SD大鼠分为5组,采用利血平[0 .3mg/ (kg .d) ]股四头肌注射,作用于大鼠7d和14d分别造成脾虚早期和脾虚期模型,用四君子汤做反证,六味地黄汤作阳性对照。用放射免疫法(RIA)检测不同脾虚造模组及对照组大鼠血浆,胃窦、十二指肠、空肠及下丘脑组织中生长抑素(SS)、胆囊收缩素(CCK)和胃动素(MOT)的含量变化。结果 与正常对照组比较,脾虚早期( 7d) :SS在血浆、下丘脑中含量升高(P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,外周组织中含量下降(P <0 .0 1) ;CCK和MOT在组织和血浆中含量均升高(P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;脾虚期( 14d) :SS在血浆、下丘脑中含量下降,外周组织中含量升高(P <0 .0 1) ;MOT在组织和血浆中含量均下降;CCK在下丘脑及胃窦组织中含量升高(P <0 .0 1) ,在血浆和肠道组织中含量下降(P <0 .0 1)。四君子汤预防性治疗的大鼠体内胃肠激素含量变化均无显著差异;六味地黄汤组胃肠激素变化有显著差异。结论 脾虚证存在多种胃肠激素的异常,且随不同脾虚时期发展呈动态变化,四君子汤对此有纠正作用。

脾虚大鼠生长抑素、胃动素、胆囊收缩素内分泌细胞的变化

目的 :探讨“脾虚失于健运”在胃肠内分泌细胞方面的物质表现形式。方法 :用SABC法对利血平造模 7天和 1 4天的脾虚大鼠模型的胃和十二指肠粘膜中D细胞、I细胞、Mo细胞进行染色 ,观察细胞形态、数量的变化。结果 :与正常组比较 ,脾虚 6天组D细数升高 ,强阳性细胞率下降 ( 2 1 5.2±1 5.2和 34.6± 2 .5vs 393.2± 2 2 .8和 2 4 .1± 3.5,P <0 .0 1 ) ;Mo细胞数下降 ( 2 6.8± 6.3,P <0 .0 1 ) ,强阳性细胞率升高 ( 4 3.8± 3.5,P <0 .0 5) ;I细胞强阳性细胞率升高 ( 4 1 .4± 4.5,P <0 .0 1 ) ;脾虚 1 4天组D细胞强阳性细胞率升高 ( 4 6.4± 9.0 ,P <0 .0 5) ;Mo细胞强阳性细胞率下降 ( 1 6.8± 1 .6,P <0 .0 1 ) ,I细胞数和强阳性细胞率中高 ( 77.3± 1 1 .1和 40 .0± 3.8,P <0 .0 1 )。四君子汤组大鼠与正常对照组无显著差别。结论 :消化道内分泌细胞的合成、分泌活动在脾虚证病程中呈动态改变。

四君子汤对脾虚证大鼠胃肠电活动的影响

【目的】观察四君子汤对脾虚证大鼠胃肠电活动变化的影响,探讨四君子汤健脾益气作用机制。【方法】大鼠随机分3组:正常对照组、脾虚模型组、四君子汤组,每组各10只,用利血平制作实验性脾虚证大鼠模型14d后,四君子汤组灌胃四君子汤治疗,正常对照组和脾虚模型组予生理盐水灌胃。用双极银丝电极记录胃窦、十二指肠电活动。【结果】脾虚模型组与正常对照组比较,胃电慢波节律、振幅及运动指数均下降(P<0.01,P<0.05)。四君子汤组治疗后上述各值均恢复正常,与正常对照组比较无统计学差异。【结论】四君子汤能调整脾虚大鼠紊乱的胃肠电活动。

NGF对体外培养人血管内皮细胞细胞周期和PCNA表达的影响

目的 研究神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)对人血管内皮细胞的细胞周期和对增殖细胞核抗原(Prolifer-ating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法 将NGF作用于体外培养的HUEVC 304细胞,利用流式细胞仪检测其细胞周期、DNA相对含量的变化,利用免疫组织化学的方法检测对PCNA表达的改变。结果 NGF作用组出现G0～G1期细胞数量明显减少,S期细胞、G2-M期细胞明显增加,DNA相对含量无明显变化,PCNA表达明显增加(P<0.05)。结论 NGF能明显促进HEVC增殖。

脾虚证与MOT的关系研究

胃动素是一种重要的调节胃肠运动功能的脑肠肽,又称运动激素,体内分布广泛,除胃肠粘膜外,还存在于中枢和外周的神经组织中。脾虚证本质研究发现脾虚失健运的诸多病理生理表现均与胃肠功能紊乱有关。因此本文同步地从MOT含量和MOT内分泌细胞两方面观察了脾虚模型大鼠与MOT的关系。目的:探讨“脾虚失健运”与MOT的关系。方法:用RIA法对脾虚造模7天和14天大鼠血浆、下丘脑、十二指肠、空肠中MOT含量进行测定,同时用SABC法对十二指肠粘膜和下丘脑组织中MOT内分泌细胞进行染色。结果:造模7天大鼠模型组织、血浆中MOT含量升高,Mo细胞数下降,强阳性细胞率升高,下丘脑MOT视经元数升高(P<0.01,P<0.05);造模14天组织、血浆中MOT含量下降,Mo强阳性细胞率升高,下丘脑MOT神经元数下降(P<0.01,P<0.05)。结论:MOT含量及其内分泌细胞的形态和数量在脾虚证病程中呈动态改变。

脾虚证大鼠甘草甜素药物动力学特征及其机制的探讨

目的 探讨脾虚证大鼠甘草甜素(Glycyrrhizin,GL)的药物动力学(Pharmacokinetics,PK)特征及其在胃肠机械运动方面的机制。方法 利血平作用于大鼠14 d,制成实验性脾虚证模型,用四君子汤和六味地黄汤反证;用高效液相色谱(HPLC)法测定大鼠体内GL的血药浓度;用高灵敏传感器记录胃和十二指肠运动波。结果 与正常对照组比较(1)脾虚模型组血药—时曲线下面积(AUC),血药最高峰浓度(Cmax);半吸收期(T_(1/2)ka)消除速度常数(β)均减小,转运速度常数(K_(12))增大(P<0.01);(2)脾虚模型组胃、十二指肠运动功能均减弱(P<0.01);(3)经四君子汤预防性治疗的大鼠胃肠运动和GL的PK参数与正常对照组比较差异无显著性意义(P>0.05),但经六味地黄汤治疗组的大鼠各值与正常对照组比较差异有较显著性意义(P<0.05)。结论 脾虚大鼠对经口服GL后的吸收、分布、转运和消除均存在异常;血药浓度和生物利用度降低,GL的有效吸收低;胃肠运动功能减弱,可能是脾虚GL的有效吸收降低的机制之一。