结肠腺瘤息肉蛋白突变经PI3K/AKT信号通路影响犬肾细胞MDCK的细胞粘附(英文)

结肠腺瘤息肉蛋白(APC)是一个肿瘤抑制因子,它不仅参与Wnt信号通路的传导,而且对细胞粘附、细胞骨架的组织和迁移等都有影响.APC突变发生于大多数结肠癌中.为了探讨APC突变对细胞粘附的影响及机制,本研究利用细胞粘附实验分析了MDCK-APC-N1和对照MDCK-GFP稳定表达细胞株系的细胞粘附情况.实验结果显示,在MDCK细胞中过表达APC-N1导致细胞-细胞间的粘附减少,细胞-基质间的粘附增加.荧光定量PCR和Western印迹实验表明,在MDCKAPC-N1细胞中,E-cadherin表达水平降低,CD29、P-FAK(Y397)、β-catenin和P-AKT(T308)表达水平升高.在MDCK-APC-N1细胞中,敲减β-catenin导致E-cadherin表达量升高,而CD29表达没有明显变化.进一步利用PI3K抑制剂LY294002处理MDCK-APC-N1细胞,结果发现,E-cadherin表达量明显升高,CD29表达量明显降低.这些结果揭示,APC-N1可活化PI3K/AKT信号通路,进而改变粘附蛋白E-cadherin和CD29影响细胞粘附.

制备一种由纯化学成分合成的伊红美蓝琼脂培养基

比较评价三种配方的伊红美蓝琼脂培养基(EMB),筛选出一种培养效果优,成本低的纯化学合成培养基,消除现市售伊红美蓝培养基中因蛋白胨营养成分不明确对菌落生长带来的干扰,提高结果准确率。以20种氨基酸为氮源,3个浓度(8.08g、10.0g、20.0g)代替现市售伊红美蓝琼脂培养基中的动植物源性蛋白胨成分,制成纯化学合成伊红美蓝琼脂培养基,比较多种菌株在此培养基上的颜色、菌落形态及生长率。结果表明大肠埃希菌在EMB-1、EMB-2、EMB-3和市售EMB上生长良好,菌落呈黑色,有或无金属光泽,生长率均大于0.7;金黄色葡萄球菌均受到抑制,生长微弱或不生长;沙门氏菌的生长率在自配EMB与市售EMB上相差不大,均为无色菌落。使用全自动生化鉴定仪分析EMB-1和市售EMB上的大肠埃希菌,结果63项生化试验完全一致。综合菌落形态特征、生长率、生化反应、原料成本等因素,选择第1种配方(10.0g)的纯化学合成伊红美蓝琼脂培养基,为纯化学参考物质体系的建立提供一定的数据及实物支撑。