肌肉免疫DC-EBV-LMP2诱导免疫应答的研究

目的探讨肌肉免疫DC-EBV-LMP2诱导的免疫效果。方法从BALB/C小鼠分离骨髓细胞,诱导培养获得小鼠DC,以100 MOI的rAd-LMP2感染获得DC-EBV-LMP2,继续培养48h,诱导DC-EBV-LMP2成熟。用免疫酶法确定LMP2在DC中表达。0,2,4周,以2×105个DC-EBV-LMP2/只免疫BALB/C小鼠,于第5,8周分别LMP2特异性水平和T细胞亚群的变化。结果结果显示,肌肉免疫DC-EBV-LMP2可诱导BALB/C鼠LMP2特异性免疫应答,且第5周强于第8周。CD8+T/CD3+T细胞亚群的比值在第5周高于对照组,而第8周低于对照组。结论 DC-EBV-LMP2肌肉免疫BALB/C鼠可诱导LMP2特异性CTL。

不同时间EBV-LMP2重组腺病毒体内细胞免疫效果研究

目的观察携带EB病毒(EBV)潜伏膜抗原2基因(LMP2)的重组5型腺病毒(Ad-LMP2)免疫Balb/C小鼠后,不同时间点的免疫反应。方法每只小鼠通过肌内注射的方式免疫2×109VP的Ad-LMP2重组病毒颗粒,使用γ干扰素酶联免疫斑点检测方法(IFN-γELISPOT),分别于免疫后1、2、3、4、5周检测小鼠脾淋巴细胞中,LMP2特异性释放IFN-γ的细胞数。观察不同时间点特异性CTL反应强度的变化。结果 Ad-LMP2免疫小鼠1周时,就已经产生明显针对LMP2的特异性CTL,1×106个小鼠脾淋巴细胞中,可以检测到约800个特异性释放IFN-γ的细胞。随着时间的延长,与1周时的结果相比CTL水平2、3、4周均没有明显改变,5周时稍有下降(P<0.05)。结论 Ad-LMP2免疫Balb/C小鼠,1周内就能够诱导出LMP2特异性CTL,产生的CTL能够稳定存在。

一起O10:K4型副溶血弧菌食物中毒的病原学特征分析

目的 对北京市丰台区一起O10:K4型副溶血弧菌食物中毒进行病原学特征分析。方法 2021年10月10日北京市丰台区辖区哨点医院上送的食物中毒病例粪便标本共4件,标本编号为FTSY1~4。疾控中心现场处置共采集标本30件,其中食品标本13件、环境标本15件、餐厅用水2件。采用实时荧光PCR法和传统细菌分离鉴定法相结合的方式进行病原学鉴定。副溶血弧菌分离株采用玻片凝集法进行血清分型、PCR法检测毒力基因、微量肉汤稀释法进行药敏试验,选用SfiI酶进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)实验,BioNumerics v6.0软件进行分子分型和聚类分析。采用全基因组测序(WGS)技术及CSIPhylogeny软件进行全基因组单核苷酸多态性分析(wgSNP)。结果 34件标本共分离出4株O10:K4型副溶血弧菌,均为临床分离株。4株菌均为产毒株,携带毒力基因tdh、T3SS1和T3SS2,不携带trh。4株菌对17种抗生素(氨苄西林、氨苄西林-舒巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢他啶/阿维巴坦、厄他培南、美罗培南、阿奇霉素、链霉素、阿米卡星、四环素、替加环素、氯霉素、萘啶酸、环丙沙星、复方新诺明、多粘菌素E)敏感,均携带bla_(CARB-22)基因。PFGE结果显示,4株菌带型完全一致,同源性为100%。WGS分析结果显示,4株菌属ST3序列型、CC3克隆群,为同一克隆。4株菌均携带大流行株标志基因tdh+、trh-、toxRS/new和orf8。结论 O10:K4型副溶血弧菌可引起食物中毒暴发,其致病性强,有产生耐药性和成为大流行株的可能。应进一步加强监测和分析,加强预防宣传和规范临床用药。

混合结构超高层建筑的施工过程模拟分析

混合结构超高层建筑由于结构形式复杂,施工周期普遍较长,所以在施工安装过程中施工方案的不同以及实际施工荷载的施加顺序对结构的内力和变形影响较大。结合科威特中央银行总部大楼(Central Bank of Kuwait New Headquarters Building,简称CBK)这一混合结构超高层建筑的施工安装工程实例,应用有限元分析软件按照实际的施工顺序对施工过程进行模拟分析,对比不同方案得出的分析结果,可以了解不同施工方案中结构构件的应力变形在施工全过程中的发展情况,进而通过比较选择较为合理的施工方案,以确保复杂超高层建筑结构在施工过程中的安全。

2019-2021年北京市丰台区手足口病及疱疹性咽峡炎病原学监测结果分析

目的 探讨北京市丰台区手足口病和疱疹性咽峡炎病例中肠道病毒的感染情况,对其流行病学及病原学特征进行分析,为疾病的预防控制及临床治疗提供科学依据及相关指导。方法 收集2019-2021年北京市丰台区哨点医院常规监测及聚集疫情相关的手足口病及疱疹性咽峡炎病例样本,采用实时荧光PCR方法进行肠道病毒检测,使用SPSS 22.0软件进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 共收集病例样本1 206份,其中手足口病样本814份,检出肠道病毒阳性563件,阳性率为69.16%,其中优势毒株为Cox A6(51.33%);疱疹性咽峡炎样本392份,阳性样本228件,阳性率为58.16%。手足口病和疱疹性咽峡炎的发病高峰期主要为夏秋季;发病年龄均以1~5岁儿童为主,占比分别为77.15%和81.38%;男性发病均高于女性,比例分别为1.46∶1和1.02∶1。结论 近年来手足口病及疱疹性咽峡炎的流行血清型发生改变,以Cox A6为主;夏秋季应加强对托幼儿童手足口病及疱疹性咽峡炎的监测及防控;进一步加强对手足口病及疱疹性咽峡炎的关联性研究。

携带EBV-LMP1Δ基因的DNA疫苗和腺病毒疫苗联合免疫效果研究

目的构建携带EBV-LMP1Δ基因的DNA疫苗,并与携带LMP1Δ基因的重组非复制5型腺病毒疫苗联合免疫,观察在小鼠体内诱导LMP1Δ特异性细胞免疫应答的效果。方法用PCR方法获得去除癌基因的LMP1Δ基因,插入到pcDNA3.1(+)-His质粒载体中,构建携带LMP1Δ基因的DNA疫苗pcDNA-LMP1Δ。使用pcDNA-LMP1Δ单独或与携带LMP1Δ基因的非复制5型重组腺病毒疫苗Ad-LMP1Δ联合免疫Balb/C小鼠,末次免疫1周后应用IFN-γELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中LMP1Δ特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)水平。结果构建成pcDNA-LMP1ΔDNA疫苗,酶切及测序证实LMP1Δ基因插入正确,在细胞中能有效表达LMP1Δ蛋白。pcDNA-LMP1Δ单独免疫Balb/C小鼠能够诱导产生LMP1Δ特异性的CTL应答;与Ad-LMP1Δ联合使用后,能够提高特异性细胞应答水平。结论构建的重组DNA疫苗pcDNA-LMP1Δ能够有效表达LMP1Δ蛋白,并能够在小鼠体内诱导出LMP1Δ特异性的CTL反应;与重组腺病毒疫苗联合应用,可以提高特异性CTL应答水平。

2016-2017年北京市丰台区手足口病流行病学和病原学特征分析

目的了解北京市丰台区手足口病的流行现况,为手足口病防治提供依据。方法对2016-2017年北京市丰台区手足口病病例资料进行描述性流行病学分析;对采集的病例标本进行肠道病毒检测并进行病原学特征分析。结果2016-2017年北京市丰台区累计报告病例5 171例,年均发病率为111.21/10万。手足口病高发于6岁以下儿童,占病例总数的86.04%,发病患者男女性别比为1.53∶1。散居儿童和幼托儿童是发病的主要人群,共占病例总数的88.84%。2016年和2017年均有两个发病高峰,2016年为6-7月,10-11月;2017年为7-8月,10-11月。地区间发病水平差异明显,卢沟桥街道病例总数(763例,190.65/10万)和花乡年均发病率(700例,222.14/10万)高于全区其他地区。实验室阳性病例611例,EV71占21.60%,Cox A16占26.84%,Cox A 6占27.17%,其他肠道病毒24.39%。结论北京市丰台区手足口病流行有明显的人群分布和地区分布差异,呈多病原共流行态势,应加强手足口病病原学监测工作。

北京市丰台区2012年污水中埃可病毒6型分离株VP1区的基因特征分析

目的了解北京市丰台区污水中埃可病毒6型（echovirus 6,ECHO6）的基因特征。方法选择吴家村污水处理厂为监测点,2012年1~12月,每月采集监测点污水进行肠道病毒（enterovirus,EV）分离和鉴定,并对分离到的ECHO6进行VP1编码区核苷酸序列测定和分析。结果在吴家村污水处理厂监测点,共分离到64株病毒,其中ECHO6病毒12株,在非脊髓灰质炎（脊灰）肠道病毒（non-poliomyelitis entero-viruses,NPEV）分离株中比例最高。选择10株ECHO6进行VP1编码区核苷酸序列分析,结果表明10株病毒的VP1区核苷酸同源性为92.9%~100.0%,与D5基因型代表株的VP1区核苷酸同源性最高,为88.7%~94.2%。进化树分析结果显示,北京市丰台区ECHO6分离株与D5基因型代表株处于同一分支,并在D5进化分支的不同簇中。结论北京市丰台区污水中ECHO6分离株为D5基因型并在D5进化分支的不同簇中,并为丰台区人群肠道病毒的监测提供重要的补充信息。

一起聚集性发热疫情中柯萨奇病毒A组2型的鉴定及基因特征分析

肠道病毒(Enterovirus,EV)可以引起包括手足口病的全身各系统的病症,柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)在世界范围广泛流行。我们对2018年北京市丰台区一起聚集性发热疫情进行病原学鉴定和基因特征分析,为该类疫情的防控提供实验室支持。采集6例病例的咽拭子标本,进行EV实时荧光RTPCR检测,结果显示5份为EV阳性。使用人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,分离到4株EV,通过EV分支分型方法,确定这4株EV为CV-A2。4株CV-A2分离株的VP1区核苷酸序列和VP4区核苷酸序列相似性高达99.5%~100%,基因进化树图分析显示,4株CV-A2与D基因型代表株处于同一分支,与2017年中国天津分离株MG926808核苷酸同源性最高,为99.1%~99.3%。根据以上结果,确定此次聚集性发热疫情是由CV-A2感染引起,且属于在我国流行的D基因型,提示我们在以后的工作应结合流行病学资料,加强对CV-A2的监测。

2012年北京市丰台区环境污水中肠道病毒监测分析

目的监测北京市丰台区环境污水中的肠道病毒的血清型分布及流行情况，为北京市丰台区肠道病毒相关的传染病预防和控制提供实验室支持。方法选择吴家村污水处理厂为监测点，2012年每月采集污水（共12份），用阴离子膜一碱洗脱法进行病毒浓缩，然后进行病毒分离，并对阳性分离物进行肠道病毒血清型鉴定。结果北京市丰台区环境监测污水标本中共分离到60株肠道病毒、6株腺病毒；病毒分离以B组肠道病毒为主；夏季（5—9月）的病毒分离率较高；部分环境中分离的肠道病毒与手足口患者体内标本有同源性。结论环境监测可以为北京市丰台区肠道病毒病例监测系统提供重要的补充信息。本研究可以为丰台区乃至北京市的EV研究提供背景信息。

北京市丰台区手足口病患者肠道病毒A组71型基因特征分析

目的研究北京市丰台区手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease,HFMD）患者肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）分离株的基因特征。方法使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Real-time Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction,r RT-PCR）方法对北京市丰台区2013年3-9月采集于HFMD患者的咽拭子标本进行EVA71核酸检测,对检测结果为EVA71阳性的标本,用人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,对分离到的EVA71毒株进行VP1编码区基因扩增,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。结果在81份咽拭子标本中,有26份经r RT-PCR方法检测为EVA71核酸阳性,分离到6株EVA71,VP1编码区有6个散在位点（43、58、164、184、240、249）存在共变异,氨基酸组合模式为赖氨酸-丙氨酸（Alanine,Ala）-天冬氨酸-丝氨酸-苏氨酸-缬氨酸,在170位氨基酸均为Ala,在145位氨基酸均为谷氨酸。核苷酸序列分析结果表明,6株EVA71的VP1编码区核苷酸同源性为94.3%-100.0%,与C4a亚型代表株的VP1编码区核苷酸同源性最高（90.0%-97.6%）。进化树图分析结果显示,北京市丰台区EVA71分离株与C4亚型代表株处于同一分支,并在C4a进化分支的不同簇中。结论北京市丰台区EVA71分离株为C4亚型C4a进化分支。

EB病毒潜伏膜蛋白1诱导细胞免疫的研究进展

Epstein-Barr Virus（EBV）是1964年Epstein等发现的。研究证实EB病毒与许多人类肿瘤相关。潜伏膜蛋白1（Latent membrane protein1，LMP1）是EBV编码的潜伏感染过程中表达的病毒膜蛋白，是较早被确认的病毒癌基因之一。近期研究发现LMP1的氨基酸序列中存在诱导细胞免疫应答的多肽表位。可以诱导LMP1特异性细胞免疫反应。本文就LMP1在细胞免疫应答方面的研究做一介绍：

2010-2012年北京市丰台区感染性腹泻病原菌分布及耐药性分析

目的了解北京市丰台区感染性腹泻致病菌的病原构成、流行特征及病原菌耐药情况,监测病原谱变迁趋势,为本地区细菌性腹泻防治提供依据。方法收集2010-2012年4-10月丰台区4家哨点医院肠道门诊腹泻患者的粪便标本,按照中华人民共和国卫生行业标准WS 287-2008、WS 271-2007和WS 289-2008进行沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、致泻性大肠埃希菌等常见肠道致病菌检测,并对病原菌的时间分布、人群分布、血清型别构成进行统计学分析,按美国CLSI(临床实验室标准化协会)推荐的纸片扩散法对近期分离的140株致病菌做了药敏测定。结果从收集到的1108份标本中共分离到357株致病菌,阳性率为32.22%。阳性菌中居首位的是副溶血性弧菌,占50.98%,其次为沙门菌,占18.49%。病原菌的检出具有明显的季节性,7-9月是高峰。不同年龄组之间检出率的差异有统计学意义(P<0.05),副溶血性弧菌在不同性别间检出率差异有统计学意义(P<0.01)。检出的副溶血性弧菌、志贺菌和沙门菌的优势血清型分别为O3K6型副溶血性弧菌、宋内志贺菌、山夫登堡沙门菌和肠炎沙门菌。各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同,多数检出菌对头孢西丁、阿莫西林-克拉维酸、氨曲南敏感性较高。结论丰台区细菌性腹泻病原菌主要以副溶血性弧菌和沙门菌为主,病原谱已发生变迁,各种病原菌耐药性不同,应加强主动监测。

丰台区急性感染性腹泻病原菌分布及耐药性分析

目的了解丰台区急性感染性腹泻病原菌的分布及对常用抗菌药物的耐药情况,为本地区细菌性腹泻防治提供依据。方法收集2012年4-10月丰台区2家哨点医院肠道门诊腹泻患者的粪便标本,按照中华人民共和国卫生行业标准WS 287-2008、WS 271-2007和WS 289-2008进行沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、致泻性大肠杆菌等常见肠道致病菌检测,按美国CLSI(临床实验室标准化协会)推荐的纸片扩散法进行药敏测定。结果 444份腹泻粪便标本中共分离到140株致病菌,阳性率为31.53%。病原菌中副溶血性弧菌居首位,占55.71%,其次为沙门菌,占21.43%。检出的副溶血性弧菌、志贺菌和沙门菌的优势血清型分别为O3K6型副溶血性弧菌、宋内志贺菌、山夫登堡沙门菌和肠炎沙门菌。不同病原菌对抗菌药物的敏感性不同,多数检出菌对头孢西丁、阿莫西林-克拉维酸、氨曲南敏感性较高,志贺菌多重耐药情况严重。结论丰台区细菌性腹泻病原菌主要以副溶血性弧菌和沙门菌为主,各种病原菌耐药性不同,应加强主动监测。

EB病毒LMP2-LMP1Δ融合基因免疫效果的初步研究

目的构建EBV LMP2-LMP1Δ融合基因,初步观察融合基因体内诱导EBV特异性细胞免疫应答的效果。方法 (1)应用PCR方法构建包含EBV-LMP2全长和去除致癌基因的EBV-LMP1Δ融合基因,并将融合基因插入到pcDNA3.1(+)-his真核表达载体中,构建重组表达质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ,Western blot和免疫荧光方法检测融合蛋白的表达。(2)使用pcDNA-LMP2-LMP1Δ及携带LMP1Δ和LMP2基因的重组腺病毒单独或联合免疫Balb/c小鼠,末次免疫1周后应用IFN-γELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中EBV特异性CTL水平。结果 (1)真核表达质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ能够在293细胞中表达LMP2-LMP1Δ融合蛋白,融合蛋白分子量大小正确,具有免疫原性。(2)重组质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ免疫小鼠能够诱导出EBV特异性的CTL,但诱导的CTL水平很低,1×106小鼠脾淋巴细胞中平均斑点数只有12个,远远低于LMP1Δ、LMP2重组腺病毒平均495个斑点数的免疫结果。但使用pcDNA-LMP2-LMP1Δ和重组腺病毒联合免疫,与只使用重组腺病毒相比,诱导的EBV特异性CTL水平能够显著提高,1×106小鼠脾淋巴细胞中平均斑点数可达1 001个(P<0.01)。结论构建的EBV LMP2-LMP1Δ融合基因能够有效表达LMP2-LMP1Δ融合蛋白,并能够在小鼠体内诱导出EBV特异性的CTL反应,与重组腺病毒联合使用,可以提高特异性CTL应答水平。

北京市丰台区2011～2012年急性弛缓性麻痹病例监测及环境污水中脊髓灰质炎病毒监测

目的评估北京市丰台区急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例监测系统的质量,分析环境污水中脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Poliovirus,PV)的生物学特征。方法选择吴家村污水处理厂作为监测点,2011年5月～2012年9月,每月采集监测点污水进行肠道病毒(Enterovirus,EV)分离和鉴定,并对分离到的PV进行VP1编码区核苷酸序列测定和分析。结果北京市丰台区AFP病例监测系统保持很高的敏感性,2011、2012年<15岁儿童AFP病例报告发病率均为1.62/10万。从环境污水中共分离到107株EV和12株腺病毒,包括28株疫苗株PV,其中I型5株,II型7株,III型16株。序列分析结果表明,与赛宾(Sabin)疫苗株相比,环境监测分离到的疫苗株PV VP1编码区核苷酸变异0～5个。结论AFP病例监测和环境监测均未发现脊灰野病毒或疫苗衍生脊灰病毒。环境监测为北京市丰台区AFP病例监测系统提供了重要的补充信息,显示北京市丰台区口服脊灰减毒活疫苗接种质量较高,疫苗病毒并未在人群中形成较长时间的循环。同时分离到的非脊灰肠道病毒,为北京市丰台区外环境中的EV研究提供了重要的背景信息。

环境水中嗜肺军团菌的分离培养法和巢式PCR法比较

目的应用传统分离培养法和巢式PCR法检测环境水中嗜肺军团菌污染状况,并比较两种方法的检测效果。方法于2012年7-10月,采集北京市丰台区商场和超市、宾馆和饭店、综合性医院三类场所的中央空调冷却水、自来水、淋浴水、景观水,分别使用培养法及巢式PCR法检测嗜肺军团菌。结果共检测187件水样,传统分离培养法对嗜肺军团菌的检出率为2.67%（5/187）,低于巢式PCR法[19.79%（37/187）],差异有统计学意义（χ-2=27.465,P〈0.01）。结论北京丰台区多种环境水体存在嗜肺军团菌污染;巢式PCR法对环境水中嗜肺军团菌的灵敏度优于传统分离培养法。

牡蛎中GⅡ型诺如病毒快速检测方法研究

目的建立牡蛎中GⅡ型诺如病毒快速有效的检测方法,为食源性疾患疫情暴发的溯源提供可靠的实验室依据。方法梯度稀释含有GⅡ型诺如病毒的便悬液分别加入牡蛎消化道组织匀浆中,用蛋白酶K消化-PEG6000沉淀方法富集后,实时荧光RT-PCR进行终端检测,评估灵敏度及回收率。结果该方法的灵敏度为3.91×103copies/g,病毒平均回收率为6.64%。结论蛋白酶K消化-PEG沉淀法操作简单、快速,有望进一步优化后应用于不同贝类中病毒的检测。

北京市丰台区腹泻患者中致泻大肠埃希氏菌感染状况及病原学分析

目的 了解北京市丰台区腹泻患者致泻大肠埃希氏菌感染状况、分子分型及耐药情况,为该菌的防治及预测预警提供依据及技术支持。方法 对2017年北京市丰台区515份腹泻患者粪便标本进行分离培养、生化鉴定、荧光定量PCR检测、脉冲场凝胶电泳(PulsedFieldGelElectrophoresis,PFGE)分子分型及药敏试验。结果 515份粪便标本共检出64株致泻大肠埃希氏菌,其中产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)35株(54.69%)、致病性大肠埃希氏菌(EPEC)17株(26.56%)、黏附性大肠埃希氏菌(EAEC)12株(18.75%)。PFGE结果说明,64株致泻大肠埃希氏菌有不同带型,EPEC聚类分析结果有4组菌株具有100.00%相似带型,EPEC、EAEC聚类分析没有完全一致带型,且带型间相似度较低。药敏试验结果:64株致泻大肠埃希氏菌对氨苄西林耐药率最高,达65.63%;对1种以上抗生素耐药的菌株有48株,占75.00%,最高耐药达7耐。结论 2017年北京市丰台区致泻大肠埃希菌以ETEC为主;菌株分子分型带型成多态性,亲缘关系较远,但也有100.00%相似带型;菌株耐药情况严重,且多重耐药谱广。

DC—LMP2与rAd—LMP2所诱导的细胞免疫应答效果研究

目的比较DC-LMP2与rAd—LMP2在BALB／c小鼠中的免疫效果。方法从BALB／c小鼠中分离骨髓细胞，在细胞因子作用下体外诱导培养获得小鼠树突状细胞（mDC），再以100MOI的含EB病潜伏膜蛋白2的重组腺病毒（rAd—LNP2）感染，获得DE—LNP2，免疫酶法确定LMP2在DC中表达。于0，2，4周，分别以PBS、DC-LMP2和rAd-LMP2肌肉免疫BALB／c小鼠，第5和8周检测小鼠体内LMP2特异性细胞应答水平。结果骨髓细胞体外成功诱导获得DC，LMP2在DC中表达。DC—LMP2和rAd—LMP2均可诱导LMP2特异性细胞免疫应答，随时间推移而减弱。rAd—LMP2诱导特异性细胞免疫应答水平高于DC—LMP2。结论肌肉免疫rAd—LMP2能够在BALB／c小鼠中诱导较强的LMP2特异性细胞免疫应答。