用植株转化法将GUS基因导入桑树幼苗的研究

为探讨简便易行的农杆菌介导的转化方法 ,用工程农杆菌A 110株 (LBA4 4 0 4 /pIG12 1 Hm)对桑幼苗子叶腋隙进行刺伤感染 ,感染部位长出的桑芽表型异常。取其基因组DNA进行分子生物学鉴定 ,结果显示 :以基因组DNA为模板 ,经PCR反应后得到特异性扩增片段用SalⅠ酶解 ,酶切产物与预计大小完全相符 ;用GUS基因作探针进行Southern杂交和用Km基因作探针对基因组DNA进行Southern杂交 ,均获得较强的杂交信号。

根癌农杆菌致病基因及其生物学功能分析

用转座子标签技术克隆了位于农杆菌 (A 2 0 8株 )染色体上的致病基因acvB、abvA、chvA ,简单介绍克隆技术的研究思路和策略。染色体基因是农杆菌吸附到植物细胞表面所必需的基因 ,当某一基因发生突变时 ,就不能完成贴壁反应而失去毒性。由于转座子Tn5的插入 ,导致染色体毒性基因失活 ,最终使农杆菌感染后的受体细胞不能致瘤。用实验证据阐述各基因在T DNA形成、转移、整合、表达等过程中担负的重要作用。对延宕至今的T DNA穿壁问题作了推测 :植物细胞壁表面可能存有T DNA的天然穿壁孔道。

农杆菌感染桑幼苗的研究

农杆菌A-208接种桑幼苗以其致瘤基因作标记,调查接种部位冠瘿瘤的有无和大小,以此为桑苗对农杆菌敏感性的参考指标;用不同菌体对桑幼苗进行接种试验,探明了菌液接种的效果好于菌体;用农杆菌A-110株(LBA4404/pIG121-Hm)菌液对桑幼苗子叶腋隙进行刺伤接种,由接种部位长出的桑芽表型异常。取处理株叶片基因组。DNA进行分子生物学鉴定。结果显示:以处理株基因组DNA为模板,经PCR反应后得到特异性扩增片段,该片段用Sal I酶解,酶切产物与预计大小完全相符;用GUS基因作探针进行South-ern杂交和用Kan基因作探针对基因组。DNA进行Southern杂交,均获得较强的杂交信号;取畸形株扦插后,用组织化学染色法对扦插苗幼根进行显色反应,幼根出现深兰色区段,这一结果表明GUS基因在桑苗中得到部分表达。