小鼠实验性孢子丝菌病病理学研究——正常和免疫损害小鼠白细胞功能观察

通过小鼠模型研究机体对申克孢子丝菌的防御机理。正常小鼠在接种申克孢子丝菌后 ,伴随着 PMNs的浸润 ,真菌发生裂解并逐渐消失 ;而裸鼠接种菌体后 ,在早期防御过程中因 PMNs杀伤活性的缺乏导致真菌繁殖扩散 ,直至动物死亡。

申克孢子丝菌接种的无毛小鼠皮损处蛋白酶抑制剂的作用

Chymostatin和 Pepstatin能分别抑制申克孢子丝菌产生的蛋白酶 和 ,为了证明在孢子丝菌病中 Chymostatin和 Pepstatin能通过抑制这些酶的活性而抑制真菌的生长 ,我们研究了在小鼠的皮损上外用蛋白酶抑制剂的效应 ,用 0 .1% Chymostatin,0 .1% pepstatin和 0 .1% chymostatin+0 .1%pepstatin软膏涂于无毛小鼠的申克孢子丝菌接种部位与对照组相比 ,单用一种成分时 ,皮损处结节大小的变化曲线表现分轻度抑制 ,而用含 chymostatin和 pepstatin的软膏 ,则强烈地抑制了结节的形成。本研究不仅证明了两种蛋白酶对申克孢子丝菌在体内生长的作用 。

无毛小鼠接种申克孢子丝菌检测抗申克孢子丝菌细胞外蛋白酶抗体研究

通过申克孢子丝菌接种无毛小鼠（Ｈａｉｒｌｅｓｍｉｃｅ）来检测两种细胞外蛋白酶的血清抗体。在小鼠皮内注射申克孢子丝菌并形成结节，镜下示真菌消失，并在每周通过酶联免疫吸附试验（ＥＩＡ）检测蛋白酶Ⅰ和Ⅱ的血清抗体。结果显示抗体滴度与实验小鼠孢子丝菌病肉眼和镜下观察的变化趋势相一致。本试验证明了申克孢子丝菌在体内能产生蛋白酶Ⅰ和Ⅱ，而且蛋白酶的抗体可用于孢子丝菌病的血清学诊断。

花斑癣患者皮屑中马拉色菌的巢式PCR法分析

目的 用巢式 PCR法检测马拉色菌特异的 DNA从而快速准确的检测并鉴定马拉色菌的各菌种 ,并应用于花斑癣 (Pityriasis Versicolor,PV)患者皮屑中马拉色菌携带情况中的研究。方法 从 PV患者的皮屑中提取马拉色菌的 DNA,以马拉色菌属 r RNA内转录间隔区设计属的引物和各个种的特异性引物分别进行巢式多聚酶链反应 (nest-PCR) ,检测 10 5例 PV患者皮屑中的马拉色菌的目的 DNA片断。结果 10 5例 PV患者共检测到 5例种的共 32 1株马拉色菌的 DNA。每例患者平均检测到约 3种马拉色菌的 DNA。各种马拉色菌的检出率依次为 :球形马拉色菌 80 .0 % ,限制马拉色菌 81.9% ,合轴马拉色菌 77.1% ,糠秕马拉色菌 4 1.9% ,钝形马拉色菌 15 .2 %。未检测到厚皮马拉色菌和斯洛菲马拉色菌。结论 PV皮屑中存在多种马拉色菌 ,球形马拉色菌、合轴马拉色菌和限制马拉色菌是

糠秕孢子菌与培养人角朊细胞的相互作用

为了探讨糠秕孢子菌与角朊细胞的相互作用，建立了菌体与人角朊细胞共同培养系统，将形态和机能研究紧密结合：①定时将培养物作扫描和透射电镜观察；②用Ａｌａｍａｒｂｌｕｅ荧光分析法观测条件培养液对角朊细胞生长的影响；③用ＥＬＩＳＡ法定量检测条件培养液中ＩＬ１α和ｂＦＧＦ。结果发现：①随时间经过角朊细胞将菌体粘附、吞噬，有明显的形态变化特点；②条件培养液可促进角朊细胞的生长，从中检出高水平的ＩＬ１α和ｂＦＧＦ；③升高的ＩＬ１α和ｂＦＧＦ来源于被菌体活化的角朊细胞而非来源于菌体自身。

聚维酮碘溶液抗白念珠菌的实验研究

研究聚维酮碘溶液对白念珠菌代谢活性及经聚维酮碘溶液处理的白念珠菌对培养人角朊细胞的影响。采用 alamar Blue 荧光分析法测得聚维酮碘溶液浓度依赖性抑制白念珠菌代谢活性,LD_(50)为0.075%。经2%聚维酮碘溶液/PBS(一)处理30分钟的白念珠菌几乎失去对培养角朊细胞的粘附和侵袭作用;孢子表面凹凸不平,明显皱缩,细胞内结构紊乱,不能发育成菌丝。经2%聚维酮碘溶液/PBS(一)处理30分钟和10%聚维酮碘溶液/沙堡液体培养基处理33小时后的白念珠菌转种到沙堡葡萄糖琼脂上不能长出菌落,提示在不同溶剂条件下聚维酮碘溶液的杀白念珠菌效果有差异。

白念珠菌与培养人角质形成细胞的相互作用及其分子机理

目的研究白念珠菌与培养人角质形成细胞直接作用的形态学、生物学反应及其分子机理。方法①将白念珠菌孢子(或煮沸灭活的白念珠菌孢子、直径3.2μm的乳胶颗粒)加入角质形成细胞培养系统中定时用扫描和透射电镜观察;②用荧光法和计数法测定白念珠菌等与角质形成细胞共同培养上清液对角质形成细胞生长的影响;③用ELISA法测定白念珠菌或乳胶颗粒与角质形成细胞共同培养上清液和角质形成细胞内液中细胞因子的含量。结果①发现与角质形成细胞粘附的白念珠菌随时间经过而增加,灭活的白念珠菌几乎不发生粘附,乳胶颗粒与角质形成细胞粘附后被吞噬。角质形成细胞伸出很多纤维样结构与菌体或乳胶颗粒粘附;②白念珠菌与角质形成细胞共同培养液在50%浓度下可显著促进角质形成细胞增殖,灭活的白念珠菌或乳胶颗粒与角质形成细胞共同培养液对角质形成细胞增殖有一定的促进作用;③白介素1α在白念珠菌与角质形成细胞共同培养上清液中增高,但细胞内液中下降,转化生长因子-α和碱性成纤维细胞生长因子在上清液及细胞内液中水平均增高。结论角质形成细胞具有非特异性吞噬功能。白念珠菌与角质形成细胞作用可刺激角质形成细胞释放细胞因子,引起炎症反应和细胞生长。

白念珠菌蛋白酶对中性粒细胞和淋巴细胞的趋化性研究

采用改良 Boyden 室法测定了白念珠菌蛋白酶(Candida albicans proteinase,CAP)对人末梢血白细胞的趋化活性。发现 CAP 对中性粒细胞的趋化活性随浓度增高而增强,在500nmol/L 时达到最大值(P<0.001)。100℃处理 CAP 10分钟后趋化活性显著降低。棋盘法分析发现 CAP 对中性粒细胞不仅有趋化活性,而且有化学激活性。CAP 仅引起淋巴细胞轻微趋化。在3只豚鼠真皮内注射 CAP,3小时后的活检标本中发现真皮血管周围的中性粒细胞平均浸润数为29个/视野,显著多于注射磷酸盐缓冲液的平均3个/视野(P<0.05)。此结果提示,作为蛋白水解酶的 CAP 不仅与菌体侵入机体和增殖有关,同时可诱导末梢血中性粒细胞向感染局部移动。