清洁级SD大鼠血液生理生化指标的测定

目的建立清洁级SD大鼠血液生理生化正常值。方法应用动物芯片血球计数仪测试常规血细胞计数;采用全自动生化测定仪对清洁级SD大鼠的血液28项生化指标进行测定,并进行统计分析雌雄差异显著性检验。结果建立了清洁级SD大鼠血液生理和28项血液生化参考值,ALB、AST/ALT、AG雌雄之间差异显著;血液血球计数雌雄差异不显著。结论比较详细的建立了清洁级SD大鼠的血液生理生化指标参考值,为其应用提供基础数据。

不同日龄SPF级KM小鼠血液生理生化正常指标的探讨

目的探讨不同日龄SPF级KM小鼠血液生理生化正常值,为评价封闭群动物的遗传标准提供数据基础。方法采用Beckman全自动生化测定仪和日本光电血球计数仪对20、30、40、50日龄及不同性别SPF级小鼠的血液生理生化值进行了测定。结果SPF级KM小鼠血液的WBC、MCH、MCHC、PLT在不同日龄间差异显著,RBC、HGB、HCT、Glu、ALT、CHOL、TP、Alb、Glb、A/G、BUN、PO4、Na、K、CI、Ca、AG在日龄、性别间均差异极显著。结论SPF级KM小鼠血液生理生化指标雌雄、日龄之间存在差异,研究结果可为KM小鼠建立正常检测指标提供参考。

封闭群长爪沙鼠遗传标准的建立

目的建立封闭群长爪沙鼠遗传质量标准和遗传质量检测方法。方法根据群体遗传学理论,参照实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制(GB14923-2001),在查阅大量文献资料的基础上,建立封闭群长爪沙鼠遗传标准。检测方法采用微卫星标记分析技术。从GeneBank中挑选出的536个小鼠微卫星位点对长爪沙鼠基因组DNA进行PCR扩增得到135个长爪沙鼠微卫星,并优化PCR扩增条件,通过琼脂糖电泳和STR扫描二级筛选,根据位点在染色体分布情况、等位基因数目和多态性等优化出适于封闭群长爪沙鼠遗传检测的微卫星位点组合,建立检测方法。结果初步建立了封闭群长爪沙鼠遗传质量标准和检测方法。

CB6F1小鼠急性粒单核细胞白血病M4(AML-M4)模型的建立及鉴定

目的建立CB6F1小鼠急性粒单核细胞白血病M4(AML-M4)模型并进行鉴定。方法取CB6F1小鼠,经静脉注射小鼠粒单核细胞白血病WEHI-3细胞,观察不同数量(1×106、2×106、5×106、1×107个)细胞接种与小鼠生存时间的相关性。取接种1×106个细胞的小鼠为研究对象,动态观察其发病情况并在接种后每周行血常规检测。选择接种后4周因白血病发病濒死小鼠,取外周血行细胞涂片形态学观察、免疫表型检测及白血病细胞主要组织相容性复合体(MHC)检测,分离骨髓组织行细胞形态学、免疫化学和染色体核型分析,同时取肝、脾、肾、肺、心脏和脑组织行病理学观察,综合上述检测指标判断白血病模型建立的有效性。经腹腔分别注射阿糖胞苷(Ara-C)50、100mg/kg,观察小鼠发病情况及生存期,判断该模型对化疗药物的敏感性。所有实验均取正常小鼠作对照。结果接种不同数量WEHI-3细胞的小鼠均在17～33d发生白血病而死亡,接种细胞数量与生存期呈负相关(r=-0.936,P<0.01)。接种1×106个细胞的小鼠生存期为25～33(28.50±1.87)d,接种后4周因白血病发病濒死的小鼠表现如下:外周血白细胞数目显著增加,最高可达81×109/L,与正常小鼠比较差异显著(P<0.05)。外周血涂片可见胞体较大、形态不规则的白血病细胞。骨髓细胞涂片可见大量原始和幼稚细胞,过氧化酶(POX)、特异性酯酶(SE)、非特异性酯酶(NSE)及氟化钠(NaF)抑制实验均阳性,符合AML-M4的特征;各器官病理切片中均可见大量白血病细胞弥漫性浸润;骨髓细胞内染色体为超二倍体;外周血CD4+/CD8+比值下降,表达C-KIT和MAC-3的细胞均较正常小鼠增多(P<0.05);MHC表型为H2Kb-H2Kd+的细胞比例升高,濒死时表型以H2Kb-H2Kd+为主。Ara-C可延长该白血病模型型小鼠的生存期,且100mg/kg剂量效优低于50mg/kg(P<0.05)。结论静脉接种WEHI-3白血病细胞可在CB6F1小鼠中成功构建AML-M4白血病模型。

遗传性大鼠脐疝模型的选育

目的近交繁殖先天性脐疝大鼠获得能稳定遗传的大鼠脐疝模型,大鼠脐疝结构观察及治疗。方法每代大鼠全同胞交配,记录产子数及脐疝情况,分析大鼠脐疝率;取F2代6月龄脐疝雌雄大鼠各6只,其中雌雄各2只进行解剖观察,雌雄大鼠各4只进行外科手术缝合。结果随近交系数增大,大鼠脐疝率升高,F12、F13代大鼠均为脐疝;F1代至F13代雌性大鼠总体脐疝率显著高于雄性大鼠（x2=11.1,P=0.001）;雌雄大鼠脐疝结构一致,手术后3~4周痊愈无复发。结论经连续13代全同胞交配获得了遗传性状稳定的大鼠脐疝模型。

不同日龄SPF级Wistar大鼠血液生化参考值的建立

目的建立不同日龄SPF级Wistar大鼠血液生化参考值。方法采用全自动生化测定仪对20、30、40、50日龄SPF级Wistar大鼠的血液27项生化指标进行测定,并进行统计分析和差异显著性检验。结果建立了203、0、40、50日龄SPF级Wistar大鼠27项生化参考值,20、30日龄SPF级Wistar大鼠雌雄之间部分指标差异显著,40、50日龄SPF级Wistar大鼠雌雄之间差异显著占一半以上,不同日龄之间各项指标存在一定的差异,并且变化规律不同。SPF级Wistar大鼠不同日龄的ALT、ALB、CREA、AG、TP、GLB、ALP、TG、MG随日龄升高而升高;PO4、AST/ALT、BUN、URIC、BUN/CREA、CK、LD、CHOL、CL、OSM随日龄升高而降低,AST、CA差异不显著。结论SPF级Wistar40日龄以上的大鼠血液生化指标易受性别、年龄等的影响,SPF级Wistar大鼠血液生化指标的一致性较好。

SPF级KM小鼠繁殖及生长发育性能测定

目的在屏障环境下，对本中心饲养的SPF级KM小鼠繁殖及生长发育性能进行测定。方法从繁殖鼠中选80对，雌雄1：1长期同居，在生产过程中统计繁殖性能参数；从大群中随机选40窝刚出生0日龄仔鼠，统计其生长发育指标。结果SPF级KM小鼠的平均窝产仔数为12．97±0．47只，平均离乳率均为97．94％，平均胎间隔为22．69±0．47d。离乳后小鼠的体重有一个快速增长期：5周龄后，增长速度放慢；10周龄时基本达到体成熟。结论设施环境对KM小鼠繁殖性能及生长发育有明显影响。

Uncv无毛小鼠无毛基因的分子克隆及序列分析

目的探讨Uncv无毛小鼠的无毛性状与无毛基因(hairless gene,hr)的相关性。方法参照Gen-Bank上公布的小鼠的hr序列,设计5对引物,用RT-PCR方法对本单位培育的Uncv无毛小鼠hr的编码区序列进行了克隆与分析。结果获得了Uncv无毛小鼠及野生型hr的全部编码区序列(3546 bp)。Uncv无毛小鼠hr基因与野生型小鼠hr基因的长度及序列完全一致,同源性为100%。与GenBank上发表的国外小鼠hr基因序列(Z32675)相比,同源性为99.7%,共10个碱基发生了突变,其中2个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;和昆明小鼠的hr(AY547391)相比,同源性为99.6%,共12个碱基发生了突变,其中3个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;但这些突变是由种属差异造成的。结论 Uncv无毛小鼠的无毛性状产生与hr基因无关。

节能型实验动物屏障设施的新型设计及应用

随着国内、外实验动物的发展,屏障设施的建立和应用越来越广泛。因此,许多单位投入大量资金搞硬件建设,但对设施运行后的节能考虑较少。目前,国内屏障设施的设计多采用分区控制、变频风机、换热器等来考虑节能,但在送、回风形式上并未改变传统的顶送风、四角回风形式,该送、回风形式由于受到平板饲养架的限制,设计上房间的换气次数多为15-20次/h,实际上动物饲养笼内的换气次数远远低于房间的换气次数,不能有效的保证笼内换气。本作者根据国内、外实验动物设施发展趋势,创新研制出定向流系统（已获得实用新型专利证书,专利号：ZL200520069682.8）饲养动物,同时采用动物饲养系统和房间送、回系统分开控制进行节能设计,有效的保证动物笼内换气和节能。该设计为国内首创,应用本设计夏季可节电47.4 kW.h,按工业用电0.8元/h计算,每小时节约运行成本近38元。

清洁级BALB/c近交系小鼠常规生物学特性研究

目的建立BALB/c近交系小鼠常规生物学特性指标。方法采用日本光电MEK-5126血球计数仪、荷兰半自动生化仪、流式细胞仪及常规的实验方法检测。结果血液细胞计数、血液生化指标、体重、脏器重量、脏器指数等常规生物学指标结果比较均一;清洁级BALB/c近交系小鼠的血液细胞计数和血液生化指标同普通级BALB/c近交系小鼠比较差异显著;普通级的CD4+/CD8+指标雌雄之间及普通级与清洁级的CD4+/CD8+差异显著。结论清洁级BALB/c近交系小鼠具有比较稳定的生物学特性。

比格犬生长期血液生理生化指标的测定

目的本中心为最早引入比格犬(Beagle)并生产繁殖获得成功的国内大型比格犬生产基地,十余年来未引入外源血。为了获得该群体的基础生物学数据,本实验对4、5、6月龄比格犬雌雄各30只进行生理生化指标测试,以期建立国内首家封闭群比格犬生产群,为比格犬的实际应用提供基本的生物学参考数据。方法用日本光电MEK-5126K血球计数仪及配套试剂盒、显微镜镜检计数以及荷兰半自动生化分析仪-VITALAB检测180只比格犬的血液生理生化值。结果血液生理生化指标同月龄雌雄间比较部分指标差异显著,但并不持续;不同月龄间比较,生理指标56、月龄之间多数差异无显著性,而4月龄的指标于5、6月之间比较,数据的高低不统一;生化指标主要是4月龄与56、月龄之间有一些差异,波动范围并不大,数据略高于文献报道。5月龄与6月龄之间无明显差异。结论该比格犬群除个别血液指标雌雄之间、不同月龄之间存在一定的差异外,绝大部分指标差异不显著,反映该群体血液生理学的特性已处于相对稳定状态。

白化地鼠和金黄地鼠的血清生化指标的测定

目的测定白化地鼠和金黄地鼠的血清生化指标,比较两者间的差异,为医学实验研究提供数据参考。方法用眼球取血的方法采集动物全血,制备血清,全自动生化分析仪进行测定,应用SPSS10.0软件包对结果进行统计分析。结果初步建立了金黄地鼠和白化地鼠的血清生化指标,并且反应出部分指标存在差异。结论金黄地鼠的白化基因对血清生化指标有影响。

金黄地鼠与白化地鼠遗传生化基因位点概貌

目的建立金黄地鼠和白化地鼠遗传生化基因位点。方法选用小鼠和大鼠的遗传生化基因位点,采用蛋白质和同工酶醋酸纤维电泳的方法,对金黄地鼠和白化地鼠进行生化基因位点检测。结果建立了金黄地鼠和白化地鼠25个生化基因位点,分析金黄地鼠和白化地鼠遗传生化基因位点的多态性,为进一步研究金黄地鼠白化突变系的遗传机理奠定基础。结论金黄地鼠生化基因位点存在多态性,白化地鼠与金黄地鼠生化基因位点存在差异。

黑线仓鼠白化突变系抑制差减文库的构建及初步分析

目的构建黑线仓鼠白化突变系的抑制差减文库，分离获得黑线仓鼠发生被毛突变的相关基因片段，并进行初步分析。方法以黑线仓鼠作为实验组（tester），以其白化突变系作为驱动组（driver），采用抑制差减杂交技术构建差减文库（SSH）。对阳性克隆进行测序并分析。结果共获得126个有生物学意义的表达序列标签（ESTs），包括21个骨架蛋白，42个转录因子，24个代谢酶基因，25个转运分子及其调节蛋白和4个未知基因。差异基因中没有发现常见的白化疾病相关基因，发现多种与溶酶体的形成及内吞作用相关的基因，推测黑线仓鼠白化突变性状的产生可能与黑色素的运输障碍有关。结论成功构建了黑线仓鼠白化突变的抑制差减文库，获得126个白化突变的相关基因，为进一步寻找白化突变相关基因，揭示其分子机制奠定了基础。

不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠血清酶含量的测定

目的测定p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠纯合型及野生型小鼠的血清酶,探讨各种血清酶在两种纯合型小鼠及野生型小鼠的变化规律。方法采用荷兰半自动生化分析仪Ⅱ对于肝功能相关的7种血清酶进行测定,应用SSPS10统计学软件进行T检验及方差分析比较。结果p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠不同年龄、不同的指标雌雄之间差异显著,并且随着年龄的变化,雌雄之间的变化规律不同。结论p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠的血清酶在不同的年龄具有一定的变化规律,说明p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠的血清酶具有一定的特征,为其功能性研究及临床检验具有重要参考价值。

不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠血清代谢产物的测定

目的测定p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠及野生型小鼠的血清代谢产物，探讨各种血清代谢产物在两种转基因小鼠及野生型小鼠的变化规律。方法对p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠不同月龄4种代谢产物血清总胆红素（TBILI）＼尿酸（UA）、肌酐（CRE）和尿素氮（BUN）进行测定并分析比较。结果p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠不同月龄、不同的指标雌雄之间t检验差异显著，并且随着年龄的变化，雌雄之间的变化规律不同。结论p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠的血清代谢产物在不同的年龄具有一定的变化规律。

人表皮生长因子在烟草中的表达及其重组蛋白的初步鉴定

目的:运用Dot-ELISA方法对转基因烟草中所表达的重组hEGF蛋白进行初步检测,以确定是否表达出具有免疫功能的蛋白质。方法:将所合成的hEGF基因置于CAMV35S启动子的驱动下,用农杆菌介导的方法转入烟草中,经过抗性筛选和PCR鉴定出阳性转化子后,提取转化子的总蛋白。总蛋白提取物经透析后,取适当浓度蛋白质点在尼龙膜上,用Dot-ELISA方法对所提取的蛋白质进行测定。结果:结果表明,转基因烟草中的重组蛋白能与抗体发生特异性结合,Dot-ELISA反应后的膜上显示出清晰的棕色斑点。结论:通过实验证明Dot-ELISA方法是一种简便快捷的检测方法,适用于植物基因工程中大规模重组蛋白生产的初步检测。

成年犬钙磷需要量研究

目的 研究在不同日粮钙磷含量时 ,实验比格犬钙磷的表观吸收、真吸收量及钙磷需要。方法 消化试验及平衡试验。结果 当日粮含钙量从 0 5 2 %提高到 1 0 2 %时 ,粪钙排泻量明显增加 (P <0 0 5 ) ,肠钙吸收量各组差异无显著性 (P >0 0 5 )。当日粮含磷量从 0 39提高到 0 87%时 ,粪磷排泻量明显增加 (P <0 0 5 ) ,除 0 39%低磷组外 ,其余各组肠磷吸收量差异无显著性 (P >0 0 5 )。犬随尿排泄钙、磷量较少 ,因此各组均表现为钙、磷的正平衡。结论 0 5 2 %的日粮钙含量及 0 39%的日粮磷水平可以满足成年比格犬对钙、磷的需要。

成年比格犬血液生理生化指标的测定

目的 探讨成年比格犬(Beagle)的血液细胞计数及血液生化指标的特性。方法 采用日本光电MEK - 5 1 2 6血球计数仪、荷兰半自动生化仪对7月龄及8月龄的比格犬血液细胞计数及血液生化指标进行测定。结果 7月龄比格犬的Hgb、TP、ALP和Ca ,雌性高于雄性;UA、LDH -L、Cl和Mg指标,雄性高于雌性;8月龄比格犬的中性细胞和Cre ,雄性高于雌性;CK、TP、LDH -L、Ca、K、Na ,雌性高于雄性。年龄之间比较:8月龄比格犬的单核细胞、TiBil、TG、GPT、TP、A1b、Ca、Na比7月龄的高,G1u、CK比7月龄的低。其它指标差异不显著。结论 成年比格犬的某些血液生理生化指标在不同性别和年龄段上存在差异。总体指标比较稳定,反映出该群体是一个遗传性比较稳定的封闭群体。

不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠几种血液生化指标测定

目的测p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠及野生型小鼠的血清生化指标，探讨几种血清生化指标在两种转基因小鼠及野生型小鼠的变化规律。方法对p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠不同月龄11种血清生化指标进行测定并分析比较。结果p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠不同月龄、不同的指标雌雄之间t检验差异显著，并且随着月龄的变化，雌雄之间的变化规律不同。结论p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX基因的转入对小鼠的血清生化指标具有一定的影响。