不同浓度EGCG对山羊卵母细胞成熟受精的影响

将从屠宰场采回的山羊卵巢在3h内带回实验室,从卵泡中抽取卵母细胞,取外观形态正常的卵母细胞分成5组,分别添加0、10、15、20、25μmol/L浓度的EGCG经27h体外成熟培养后受精,探索不同浓度EGCG对山羊卵母细胞成熟和受精的影响。结果表明EGCG添加浓度为15μmol/L时对卵母细胞的成熟和受精都有明显的促进效果。

山羊GDF9基因在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的表达

本研究采用实时荧光定量PCR技术,从mRNA水平探讨了山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟(IVM)过程中(0、6、12、18、24和27h)GDF9基因的相对表达变化,分析其与卵丘细胞扩散之间的关系。结果表明,GDF9 mRNA在山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中均有表达,且在成熟培养初期表达量较低,其表达峰值出现在IVM12h,与卵丘细胞开始扩散的时间一致,之后又有所下降。由此推测,GDF9基因在山羊卵丘扩散和卵母细胞体外成熟过程中起着重要的作用。

促卵泡素(FSH)β亚基基因的单核苷酸多态性及其与兔产仔数的相关性研究

采用PCR-SSCP结合测序的方法检测了兔FSHβ亚基基因第2外显子的多态性,发现了1个SNPs位点,并对该突变位点进行了克隆及序列测定,位于第2外显子的176位点处碱基突变(A→G),导致苏氨酸向丙氨酸的变化。首次证明了FSHβ亚基基因与母兔产仔数的关系。

三种子宫内膜准备方式在冻融胚胎移植中的结局比较

目的:探讨三种不同子宫内膜准备方案在冻融胚胎移植中的妊娠结局。方法:回顾性分析本中心接受体外受精(IVF)或卵泡浆内单精子显微注射(ICSI)新鲜周期移植失败或因多种因素未能行新鲜胚胎移植从而行冻融胚胎移植的患者的临床资料及妊娠结局,据子宫内膜准备方式分三组:自然周期组35例,激素替代周期组18例,促排卵周期组22例,比较三种方案的年龄、移植日内膜厚度、移植胚胎数、胚胎种植率、临床妊娠率是否存在差异。结果:三组患者的年龄、不孕年限、内膜厚度、移植胚胎数,差异均无统计学意义(P>0.05);自然周期组胚胎种植率与临床妊娠率较替代周期组及促排卵周期组高,差异具有统计学意义(P<0.05);年龄对冻融胚胎结局的影响:>35岁患者胚胎种植率及临床妊娠率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);不同子宫内膜厚度对冻融胚胎结局的影响:在胚胎种植率、临床妊娠率上差异无统计学意义(P>0.05)。结论:不孕患者的年龄是影响冻融胚胎移植成功的重要因素,子宫内膜厚度对冻融胚胎移植成功无明显影响,自然周期准备方式其冻融胚胎移植的胚胎种植率及临床妊娠率较高,且经济、方便,但有待于更多的病例积累。

表没食子儿茶素没食子酸酯用于小鼠卵母细胞体外培养的效果观察

本试验以小鼠为动物模型,采用HTF和TCM-199两个基础培养体系,通过添加不同浓度的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),研究其对小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精及其后期胚胎发育的影响。结果表明,在HTF和TCM-199体系中,培养卵丘-卵母细胞复合物(COCs)时EGCG的最佳添加量均为20μmol/L,可以显著提高卵母细胞的成熟率、受精率和胚胎发育率。过量添加EGCG则有负面的效应。综合比较,HTF体系的培养效果优于TCM-199体系。

海门山羊GDF9基因的RFLP分析

采用PCR-RFLP技术,对120只海门山羊生长分化因子9(GDF9)基因的G8位点进行限制性片段长度多态性分析(RFLP),探寻与产羔数相关的遗传标记。结果表明:PCR扩增产物均被切成2个片段,表现出1种基因型,无多态性现象,推测GDF9基因对海门山羊的繁殖性能无显著影响。

EGCG用于小鼠裸卵体外培养的研究

以小鼠裸卵为体外培养对象,以添加不同浓度EGCG的HTF和TCM-199为基础培养体系,研究EGCG对小鼠裸卵体外成熟、体外受精及其后期胚胎发育的影响,并分别测定小鼠裸卵细胞内GSH浓度的变化。结果表明:在基础培养体系中添加EGCG对小鼠裸卵作用不明显,不能提高卵母细胞的成熟率,对受精率和胚胎发育率无显著影响。

MSTN基因突变纯合子兔的繁育和表型分析

肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因是动物骨骼肌生长的负调控基因。本研究在获得MSTN基因双等位突变原代兔的基础上,培育具有“双肌”表型性状和稳定遗传的MSTN^(–/–)纯合突变兔,建立原代MSTN双等位突变兔繁育纯合子后代的方法。应用CRISPR/Cas9基因编辑技术制备MSTN–/–突变原代兔,原代双等位突变兔与野生型兔配种,产生F1代兔。同一突变系的F1代兔半同胞交配或回交繁殖F2代纯合子兔;后代兔利用基因组DNA PCR扩增产物序列分析和T载体克隆测序鉴定用于筛选纯合子兔;14–19周龄MSTN基因突变兔称量体重。MSTN基因突变兔臀大肌组织切片,统计分析肌纤维横截面积。获得5只MSTN基因突变原代兔,其中3只用于纯合子培育,共获得15只(5种突变子)纯合突变兔(M2-a:3只;M2-b:2只;M3-a:2只;M7-a:6只;M7-b:2只)。在14–19周龄,MSTN^(–/–)纯合突变兔体重极显著高于同龄MSTN+/+野生型兔(平均(2718±120)g和(1969±53)g,P<0.01,同龄体重提高38.0%);纯合突变兔的臀大肌纤维平均截面积极显著高于野生型兔((3512.2±439.2)μm^(2)和(1274.8±327.3)μm^(2),P<0.01),也显著高于MSTN^(+/–)半合子兔((3512.2±439.2)μm^(2)和(2610.4±604.4)μm^(2),P<0.05)。本研究成功培育了5种MSTN^(–/–)基因纯合突变兔,且有明显瘦肉表型。研究表明,应用CRISPR/Cas9基因编辑获得的原代双等位突变兔为非嵌合体突变兔,突变性状遗传后代;原代双等位突变兔后代分离为两个不同突变子,并都呈现“双肌”表型;F1代单等位突变兔通过近交或回交可获得MSTN^(–/–)纯合突变兔。该研究在利用基因编辑技术培育优良家畜品种方面取得了实验进展。