氨和乳酸对悬浮培养的BHK-21细胞生长和胞内酶活性的影响

为了研究氨和乳酸对悬浮培养的BHK-21细胞生长和细胞内酶活性的影响,用添加了不同浓度氨和乳酸的培养基悬浮培养BHK-21细胞,间隔12h取样,比较细胞的生长状况,检测细胞代谢过程中营养物质的消耗和细胞内琥珀酸脱氢酶的活性。结果显示,当氨和乳酸的添加浓度分别为2.5和10mmol/L时,对细胞的生长产生弱抑制作用;随着氨和乳酸添加浓度的增加,细胞生长缓慢,营养物质消耗量降低,琥珀酸脱氢酶活性降低;在氨和乳酸添加浓度分别达到5和20mmol/L时,细胞生长代谢受到严重的抑制,琥珀酸脱氢酶活性在整个培养过程中显著低于对照组。因此,培养液中氨和乳酸积累到一定浓度会抑制BHK-21细胞生长,影响细胞内琥珀酸脱氢酶的活性。

BHK21细胞的悬浮驯化及其悬浮培养参数研究

[目的]探讨各种悬浮培养条件对BHK-21细胞悬浮培养的影响,尤其是细胞生长过程中出现的细胞结团现象对细胞生长状态的影响,从而摸索出稳定的培养条件。[方法]将BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养,通过对悬浮培养的培养液、pH、溶解氧、罐压、搅拌等各种细胞相关生长条件进行研究。[结果]细胞的结团严重影响了细胞的生长代谢。最佳培养条件为最佳接种浓度0.2×106个/ml,牛血清的最佳含量为5%,BHK21细胞培养液理想pH为7.0~7.2,采用2孔通气的100 r/min有利于BHK21细胞的生长。[结论]为体外规模化细胞培养平台奠定理论基础。

新城疫疫苗的研究进展

文章介绍了新城疫疫苗的应用现状,概述了灭活疫苗、活疫苗及基因工程苗等主要的新城疫疫苗研究现状及发展动态。旨在为研制广谱、多价、浓缩、高效、价廉的新城疫疫苗提供科学的参考依据,从而进一步控制当前新城疫疫病的蔓延。

氨对悬浮培养幼仓鼠肾细胞(BHK-21)生长代谢的影响

【目的】研究在幼仓鼠肾细胞（BHK-21）悬浮培养过程中,不同浓度氨对其生长代谢的影响。【方法】用添加0,1.8,2.5,5.5,8.0和15.0 mmol/L氨的培养基培养BHK-21细胞,每隔12 h取样1次,用细胞计数仪进行细胞计数,测定细胞活力,采用AO/EB双染色法和Annexin V-FITC/PI流式细胞仪2种方法检测细胞的凋亡情况,同时测定细胞培养过程中葡萄糖、氨和乳酸浓度的变化。【结果】在BHK-21细胞连续培养过程中,当氨的添加浓度低于1.8 mmol/L时,其对细胞的生长几乎不产生抑制作用,细胞活性、细胞总数与对照组差异不显著,未出现细胞聚集成团现象;当氨添加浓度达到15.0 mmol/L时,BHK-21细胞直接进入死亡期;当氨的添加浓度为2.5~8.0 mmol/L时,氨对细胞生长的抑制作用由弱变强,这种抑制作用在细胞培养至24 h开始出现。另外,随着氨添加浓度的增加,葡萄糖的消耗量减少,细胞代谢产生的乳酸和氨降低。【结论】氨对悬浮培养的BHK-21细胞的生长和代谢有显著影响。

不同浓度葡萄糖和谷氨酰胺对BHK-21细胞凋亡的影响

研究葡萄糖和谷氨酰胺两种重要营养物质对BHK-21细胞凋亡的影响,在BHK-21细胞体外培养过程中,加入不同浓度的葡萄糖和谷氨酰胺,每隔24 h取样细胞计数,活性分析和细胞凋亡率的测定。结果发现,当葡萄糖浓度降至0 mmol/L^4 mmol/L,谷氨酰胺浓度降至0 mmol/L^1 mmol/L时,细胞生长速率降低,细胞培养至48 h就开始大量凋亡,细胞活性也随之下降。可见,葡萄糖和谷氨酰胺的浓度对BHK-21细胞的活性和细胞凋亡有着显著性的影响。

动物细胞大规模培养中细胞凋亡检测方法的研究

为了探讨动物细胞大规模培养中细胞凋亡的检测方法,以不同浓度氯化铵诱导BHK-21细胞凋亡,每隔12 h收集细胞,采用台盼兰形态学排染法、吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法、FITC-Annexin V/PI双染色荧光显微镜观察法、原位缺口末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳、流式细胞术(FCM)法进行细胞凋亡的检测。通过比较发现,不同方法检测结果都存在着显著性差异,但吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法是一种简单、易行、准确、全面定性细胞凋亡的较为可靠的方法,而FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞仪能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞,是较为理想的凋亡定量检测方法。这2种方法的联合运用更适应于动物细胞大规模培养过程中细胞凋亡的检测。

三株BHK-21悬浮细胞培养特性比较

为了筛选出适应于口蹄疫疫苗生产的最佳细胞株,用自制的GMEM培养基,以30mL/L血清浓度,在同等条件下比较了3种不同来源的BHK-21悬浮细胞培养特性。结果显示,这3种细胞在形态上无明显的差异,在显微镜下不易区分;在培养过程中,BHK-21-L细胞株在最短时间内可达到最大培养密度,细胞生长速度快,细胞活性较高,DNA合成旺盛;BHK-21C13-2P细胞株最大密度较低,在72h^96h被完全阻止在G0/G1,放大比例较小,为1∶1.5~1∶2;BHK-21-B细胞在72h^96h停止增殖,可放大较大比例,但易出现细胞结团、易贴壁的现象,影响细胞的增殖。可见,BHK-21-L细胞是生产口蹄疫疫苗可供选择的最佳细胞株。

重离子辐照诱变阿佛曼链霉菌的实验观察

目的:对阿佛曼链霉菌采用新的诱变手段,以获得稳定高产的优良菌株。方法:采用重离子束辐照阿佛曼链霉菌,研究了0.25Gy、0.5Gy、3Gy、5Gy、10Gy和15Gy剂量的12C+粒子束辐照阿佛曼链霉菌菌株后,菌落特性的变化及对菌株产素能力的影响。结果:重离子辐照阿佛曼链霉菌后,在其各个辐照剂量区都存在变异菌株,诱变后阿佛曼链霉菌的菌落形态多样,小山状,火山口状、彗星尾状、车轮状、边缘放射状等;菌落大小不一,有的直径达4～5mm,有的小如针尖状。效价提高到7298μg/mL,获得了高产菌株。结论:重离子束辐照阿佛曼链霉菌菌株后,阿佛曼链霉菌的产素能力显著提高,可得到高产的菌株。