B10细胞在益气升提法治疗EAMG大鼠中的作用

目的观察在实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)中,用益气升提法对其治疗的效果及分析B10细胞的作用和免疫机制。方法将48只Lewis大鼠随机分成6组:阳性药物对照组、益气升提低剂量组、益气升提中剂量组、益气升提高剂量组、佐剂对照组和模型对照组。用Rα97-116免疫大鼠建立EAMG模型。在实验中对大鼠体重,临床表现,低频重复电刺激(RNS)衰减率进行观察。检测血清中乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)、白介素10(IL-10)的含量,其方法是酶联免疫吸附试验(ELISA);检测组织中CD19的表达,其方法用蛋白印迹法(western-blot),以及用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-10和CD19基因的表达。结果给药后,大鼠体重回升,临床症状好转,RNS衰减率显著降低(P <0.05,P <0.01),血清中AchR-Ab含量显著下降(P <0.05,P <0.01),IL-10含量显著上升(P <0.05,P <0.01),组织中CD19蛋白表达下降(P <0.05,P <0.01)。CD19和IL-10基因表达下降(P <0.01,P <0.001)。结论 EAMG大鼠经过益气升提法治疗后,临床症状及体重下降趋势有明显改善作用,其机制可能是升高IL-10含量,下调IL-10和CD19基因表达以及下调CD19蛋白表达,降低血清中AchR-Ab含量,从而减少神经肌肉接头处AchR损害。

加味补阳还五汤对防治动脉粥样硬化的Toll样受体7及其下游信号转导通路的影响

目的:探究加味补阳还五汤对于载脂蛋白E基因敲除小鼠的Toll样受体7(TLR7)及其下游信号转导通路的影响,从而探讨加味补阳还五汤对动脉粥样硬化的防治机制。方法:将40只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、补阳还五汤组、加味补阳还五汤组,每组10只,10只C57BL/6J小鼠作为空白组。空白组正常饮食饮水,其余组给予高脂饲料喂养8周。空白组和模型组每日用0.9%氯化钠溶液灌胃,阿托伐他汀组、补阳还五汤组及加味补阳还五汤组每日以相应药物灌胃。第9周后采用生化检测方法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)。采用苏木素-伊红(HE)染色方法观察,并测量斑块所占管腔面积之比。以实时定量荧光PCR检测TLR7及MyD88、TRAF-6、NF-κB、IRF7 mRNA表达;蛋白质印迹法测定其蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组、补阳还五汤组、加味补阳还五汤组TC、TG、LDL-C水平显著降低,同时HDL-C水平升高(P<0.01);病理学观察,与空白组比较,模型组主动脉内膜增厚、隆起、内皮细胞部分脱落,有大量斑块形成,中膜平滑肌细胞增生;与模型组比较,阿托伐他汀组、补阳还五汤组、加味补阳还五汤组均能有效地改善主动脉细胞的炎性浸润程度和斑块管腔占比(P<0.01)。与空白组比较,模型组TLR7、MyD88、TRAF-6、NF-κB mRNA与蛋白的表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组、补阳还五汤组、加味补阳还五汤组TLR7、MyD88、TRAF-6、NF-κB mRNA与蛋白的表达显著降低(P<0.05,P<0.01),但3组之间的m R NA与蛋白表达差异无统计学意义。结论:加味补阳还五汤对于动脉粥样硬化的发生发展有防治作用,其机制可能与抑制TLR7及其下游信号转导通路有一定相关性。

加味补阳还五汤对防治动脉粥样硬化的ApoE^(-/-)小鼠Toll样受体4及其下游主要元件的影响

目的:探究加味补阳还五汤对于载脂蛋白E基因敲除小鼠的Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(My D88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,讨论加味补阳还五汤对于动脉粥样硬化的防治机制。方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组,阿托伐他汀组,加味补阳还五汤组,每组10只,以10只C57BL/6J小鼠设空白组。除空白组正常饮食饮水外,每组给予高脂饲料喂养8周。空白组及模型组每日给与0.9%Na Cl溶液灌胃,阿托伐他汀组及加为补阳还五汤组每日以相应药物灌胃。第9周后采用生化检测方法检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)。采用苏木素-伊红(HE)染色方法观察,并测量斑块所占管腔面积之比。以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4及My D88,TRAF-6,NF-κB的mRNA表达;蛋白质印迹(Western blot)法测定其蛋白表达的变化。结果:血脂水平方面,与模型组比较加味补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TC,TG,HDL-C,LDL-C水平,同时升高HDL-C水平(P<0.01);镜下观察加味补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能较模型组斑块有所减少,主动脉血管细胞排列较整齐,炎性细胞浸润减轻,小鼠的主动脉斑块在血管的占比均有不同程度地降低(P<0.01)。mRNA与蛋白水平上与模型组比较加味补阳还五汤与阿托伐他汀组均能有效降低TLR4及My D88,TRAF-6,NF-κB mRNA与蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:加味补阳还五汤对于AS的发生发展有预防作用,其机制可能与抑制TLR4及其下游信号转导通路主要元件有关。

补阳还五汤对防治动脉粥样硬化的ApoE-/-小鼠Toll样受体4及其下游主要元件的影响

目的:探究补阳还五汤对于载脂蛋白E基因敲除小鼠的Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)、核因子κB(NF-κB)表达的影响,讨论补阳还五汤对于动脉粥样硬化的防治机制。方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组,阿托伐他汀组,补阳还五汤组,每组10只,以10只C57BL/6J小鼠设空白对照组。除空白对照组正常饮食饮水外,每组给予高脂饲料喂养8周。空白对照组及模型组每日给予0.9%氯化钠溶液灌胃,阿托伐他汀组及加为补阳还五汤组每日以相应药物灌胃。第9周后采用生化检测方法检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDC-C)值。采用苏木素-伊红染色方法观察,并测量斑块所占管腔面积之比。以荧光定量PCR检测TLR4、My D88、TRAF-6、NF-κB的mRNA表达;蛋白质印迹法测定其蛋白表达的变化。结果:血脂水平方面,与模型组相比,补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能降低Apo E-/-小鼠TC、TG、LDL-C水平,同时升高HDL-C水平(P<0.01);镜下观察补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能较模型组斑块有所减少,主动脉血管细胞排列较整齐,炎性细胞浸润减轻,小鼠的主动脉斑块在血管的占比均有不同程度的降低(P<0.01)。mRNA与蛋白水平上与模型组相比,补阳还五汤与阿托伐他汀组均能有效降低TLR4、My D88、TRAF-6、NF-κB的mRNA基因与蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:补阳还五汤对于AS的发生发展有预防作用,其机制可能与抑制TLR4及其下游信号转导通路主要元件有关。