目的研究骨髓间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from bone mesenchymal stem cells,BMSCs-Exo)对脓毒症相关急性肾损伤体外模型的作用。方法利用超速离心法提取骨髓间充质干细胞分泌的外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析及W...目的研究骨髓间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from bone mesenchymal stem cells,BMSCs-Exo)对脓毒症相关急性肾损伤体外模型的作用。方法利用超速离心法提取骨髓间充质干细胞分泌的外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析及Western印迹法鉴定外泌体。用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理人肾小管上皮细胞(HK-2)建立脓毒症相关急性肾损伤(sepsis-induced acute kidney injury,SAKI)细胞模型,将细胞分为对照组(CON组)、脂多糖组(LPS组)和脂多糖+外泌体组(LPS+EXO组)。CCK-8法检测各组细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、Bax和bcl2水平,采用qRT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平。结果应用LPS处理HK-2细胞成功构建了SAKI细胞模型。LPS组中,HK-2细胞经LPS(100μg/mL)处理后细胞活性和抗凋亡蛋白bcl2表达明显下降(P<0.05),而细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved-Caspase3、Bax表达水平显著上升(P<0.01),同时炎性指标TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达上调(P<0.01)。LPS+EXO组中,BMSCs-Exo逆转了LPS对HK-2细胞的作用,细胞活性升高、凋亡蛋白cleaved-Caspase3以及Bax下降和抗凋亡蛋白bcl2升高(P<0.05),同时还下调了炎性因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)mRNA表达水平(P<0.05)。结论BMSCs-Exo在LPS诱导的SAKI体外模型中发挥抗炎和抗凋亡的保护作用,为未来临床利用BMSCs-Exo治疗SAKI提供理论基础。展开更多
文摘目的研究骨髓间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from bone mesenchymal stem cells,BMSCs-Exo)对脓毒症相关急性肾损伤体外模型的作用。方法利用超速离心法提取骨髓间充质干细胞分泌的外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析及Western印迹法鉴定外泌体。用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理人肾小管上皮细胞(HK-2)建立脓毒症相关急性肾损伤(sepsis-induced acute kidney injury,SAKI)细胞模型,将细胞分为对照组(CON组)、脂多糖组(LPS组)和脂多糖+外泌体组(LPS+EXO组)。CCK-8法检测各组细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、Bax和bcl2水平,采用qRT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平。结果应用LPS处理HK-2细胞成功构建了SAKI细胞模型。LPS组中,HK-2细胞经LPS(100μg/mL)处理后细胞活性和抗凋亡蛋白bcl2表达明显下降(P<0.05),而细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved-Caspase3、Bax表达水平显著上升(P<0.01),同时炎性指标TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达上调(P<0.01)。LPS+EXO组中,BMSCs-Exo逆转了LPS对HK-2细胞的作用,细胞活性升高、凋亡蛋白cleaved-Caspase3以及Bax下降和抗凋亡蛋白bcl2升高(P<0.05),同时还下调了炎性因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)mRNA表达水平(P<0.05)。结论BMSCs-Exo在LPS诱导的SAKI体外模型中发挥抗炎和抗凋亡的保护作用,为未来临床利用BMSCs-Exo治疗SAKI提供理论基础。