温度对产虫茶昆虫紫斑谷螟生长发育的影响

为探明温度对贵州主要产虫茶昆虫紫斑谷螟Pyralis farinalis(Linnaeus)生长发育的影响,本研究以白茶Litsea coreana为寄主植物,分别设置5个恒温(19,22,25,28和31℃)条件,研究温度对紫斑谷螟卵、幼虫、蛹和未成熟期平均发育历期、发育速率和存活率的影响,计算各虫态发育起点温度和有效积温。结果表明:温度对紫斑谷螟各虫态发育历期、发育速率和存活率影响显著。在19～31℃范围内,各虫态的平均发育历期均随温度的升高而缩短,卵期、幼虫期、蛹期及未成熟期均在31℃达到最小值,分别为4.56±0.24,43.33±1.50,7.89±0.20和55.78±1.69d。紫斑谷螟各虫态发育速率与温度呈二次回归关系,且极显著相关。此外,温度显著影响各虫态存活率,卵的存活率在28℃时最高,为93%;幼虫和蛹的存活率则在25℃最高,分别为88%和93%;温度过高或过低均不利于其生长发育。由直接最优法计算得到紫斑谷螟卵期、幼虫期、蛹期及未成熟期的发育起点温度分别为13.30,15.48,13.19和14.82℃,有效积温依次为88.36,679.51,159.73和952.04日·度。这些结果为紫斑谷螟的繁殖提供了基础参考数据,对指导虫茶生产有实用参考价值。

米缟螟-白茶虫茶的营养成分分析与评价

首次对贵州主要虫茶品种米缟螟-白茶虫茶的营养价值进行综合评价,对其营养成分进行了分析测定。利用白茶饲喂米缟螟幼虫获得米缟螟-白茶虫茶,分析其一般营养成分、茶特征物质、氨基酸、脂肪酸、矿物质和重金属组成,并以三叶虫茶和常规茶为参照,对米缟螟-白茶虫茶的营养价值进行评价。结果表明,米缟螟-白茶虫茶的氨基酸总量较高,其8种必需氨基酸约占氨基酸总量的39.56%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为75.46%,4种呈味氨基酸占氨基酸总量的36.39%,必需氨基酸评价显示米缟螟-白茶虫茶的氨基酸模式接近大豆且远优于常规茶,其Mg、Ca、Fe含量,重金属含量无超标。由此可见,米缟螟-白茶虫茶氨基酸和矿物质含量丰富、种类齐全,氨基酸模式较合理,是优质蛋白和安全的氨基酸补给佳品,具较高营养价值。

马尾松人工林火烧迹地不同恢复阶段中小型土壤节肢动物多样性

为探明喀斯特地区马尾松人工林火烧迹地不同恢复阶段中小型土壤节肢动物多样性,2011年10月(秋季)和2012年2月(冬季)对火烧后恢复1.5个月(RS1)、1.5年(RS2)的马尾松人工林迹地和马尾松人工林(CK)各进行了两次调查。共获得中小型土壤节肢动物15704只,隶属7纲13目89科134类。研究结果表明,马尾松人工林迹地中小型土壤节肢动物类群数、个体密度、多样性和相似性均随恢复时间的增加而增加;类群数和个体密度与全钾显著相关;在季节变化上,RS1个体密度冬季显著高于秋季,RS2和CK类群数、个体密度和多样性冬季显著高于秋季。结果说明,随着恢复时间的增加,喀斯特马尾松人工林火烧迹地中小型土壤节肢动物群落结构发生明显改变,趋于复杂,稳定性提高,季节敏感性增加。

红托竹荪菌盖多糖的提取及抗氧化能力的研究

研究了不同因素对竹荪菌盖多糖提取效果的影响,并对菌盖多糖的抗氧化能力进行了评价,通过正交试验设计方法对水提竹荪菌盖多糖的工艺条件进行了优化。结果表明,菌盖多糖的最佳提取条件为:提取温度85℃,料液比1∶25(g∶mL),浸提时间2.5 h。在此最佳工艺条件下,竹荪菌盖多糖得率为8.25%。菌盖多糖主要由葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成,其中葡萄糖质量分数最高(58.19%)。菌盖多糖具有较强的还原能力和抑制羟基自由基能力。随着菌盖多糖质量浓度的升高,还原能力和抑制羟基自由基能力相应提高。但是,菌盖多糖对超氧阴离子的抑制能力较弱。

贵州虫茶资源及其利用的现状调查

为给贵州虫茶资源的开发利用提供依据,采用走访调查和室内饲养鉴定相结合的方法对贵州产虫茶昆虫种类及分布、生产虫茶的寄主植物、虫茶品种以及虫茶资源利用情况进行研究。结果表明:贵州产虫茶昆虫为鳞翅目螟蛾科米缟螟、紫斑谷螟、灰直纹螟、黄环纹丛螟和织蛾科米仓织蛾等5种。其中,米仓织蛾为新发现的产虫茶昆虫种类。寄主植物为豹皮樟、红果黄肉楠、化香树和三叶海棠等4种。贵州虫茶品种主要有米缟螟豹皮樟虫茶、米缟螟红果黄肉楠虫茶、紫斑谷螟豹皮樟虫茶、紫斑谷螟红果黄肉楠虫茶、米仓织蛾豹皮樟虫茶、灰直纹螟化香虫茶、灰直纹螟三叶海棠虫茶和黄环纹丛螟化香虫茶等8种。黔北地区工厂化生产虫茶的昆虫主要是米缟螟和紫斑谷螟,寄主植物是豹皮樟和红果黄肉楠;黔东南地区生产虫茶的昆虫主要是灰直纹螟和黄环纹丛螟,寄主植物是化香树和三叶海棠。

球孢白僵菌YS03菌株对稻水象甲成虫取食的影响

为了解不同浓度的球孢白僵菌孢子悬浮液对稻水象甲成虫取食的影响,室内测定了球孢白僵菌(Beauveria bassiana)YS03菌株在1.0×106、1.0×107、1.0×108个孢子/mL 3个浓度梯度感染稻水象甲成虫后1～14 d的每天取食斑数量和长度。结果表明,在处理后到实验结束的14 d内,单头稻水象甲成虫取食斑数量和长度随着孢子浓度的增加而减少,与对照组有显著差异。单头成虫取食斑长度最小和取食斑数量最少时仅为对照组的30.98%和42.71%。不同孢子浓度处理下单头稻水象甲成虫的取食斑数量与长度间存在显著的回归关系,回归系数的大小顺序为:CK>1.0×106>1.0×107>1.0×108个孢子/mL处理。试验结果为全面评价球孢白僵菌YS03菌株防治稻水象甲的作用提供了依据,同时也为球孢白僵菌的田间防治试验中采用稻水象甲成虫取食斑总数和总长度来测算其虫口数提供了参考。

家蝇β-葡萄糖苷酶基因的克隆及重组表达

克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因并建立原核表达体系,检测其表达产物的活性,了解家蝇内源性BG酶特点,为进一步解释家蝇极强环境适应能力和发现新的种群控制措施提供分子生物学基础。以草地贪夜蛾等结构信息相对完整且研究较为透彻的6种代表性昆虫的BG酶基因序列为参照对象,利用同源克隆结合RACE-PCR的方法,从家蝇cDNA中克隆得到BG酶基因的全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析。分别采用原核表达载体pET-28a(+)构建原核表达体系并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达BG酶基因的融合蛋白。采用七叶苷平板显色法和DNS法检测表达体系融合蛋白的酶活性,并对其性质进行初步的分析。家蝇体内克隆得到了长度为1933 bp的家蝇BG酶基因全长cDNA序列,推导其为562个氨基酸残基组成的蛋白多肽。重组原核质粒经诱导表达后,在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,证实重组质粒成功表达。重组表达的家蝇BG酶兼具内切β-1,4-葡聚糖酶、外切β-1,4-葡聚糖酶和BG的酶活性。家蝇BG酶是一种新的多功能纤维素酶,是昆虫纤维素酶研究的重要补充。

黔南喀斯特不同火烧迹地土壤动物群落特征比较

为探明喀斯特不同火烧迹地土壤动物的多样性,2011年10月对贵州南部喀斯特地区火烧2年的废弃矿场迹地和马尾松林迹地进行了土壤动物调查。结果表明,共有土壤动物1909只,隶属3门6纲17目69科109类,废弃矿场迹地和马尾松林迹地的土壤动物群落类群数和个体密度表聚性明显,而不同火烧迹地优势类群有不同;在植被和凋落物的影响下,废弃矿场迹地和马尾松林迹地土壤动物类群数、个体密度和多样性均未表现出明显的差异(P>0.05),但群落组成差异明显。

家蝇Thymosin(THY)基因的克隆及原核表达

采用EST测序技术从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫c DNA质粒文库中筛选到胸腺肽(Thymosin,THY)基因,以该基因的c DNA文库质粒为模板,设计引物,通过PCR扩增,测序鉴定,获得THY基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽和亚细胞定位等方面进行预测和分析。构建p ET-28a(+)-THY重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。研究结果表明,THY基因ORF全长384 bp,编码127个氨基酸,理论分子量14.3 k D,等电点为5.22,具有THY家族的蛋白保守结构域。构建重组原核质粒p ET-28a(+)-THY,经IPTG诱导,蛋白在大肠杆菌中获得表达,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,Western blot检测发现纯化的目的蛋白大小正确。

红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)菌托中营养品质的研究

红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)是竹荪中的珍品,已成为云南、四川、贵州、福建等地主要经济菌种之一。红托竹荪中菌托约占全株鲜重的40%,被摘除废弃,造成极大的资源浪费。为充分开发和利用该资源,测定了红托竹荪菌托的基本营养成分,分析了其氨基酸组成和蛋白质组分,从而评价了其营养品质。结果表明:红托竹荪菌托中粗蛋白含量占干重的26.74%,真蛋白质占粗蛋白质的91.14%,蛋白功效比为2.8,必需氨基酸含量较高,氨基酸评分为105,含硫氨基酸是其限制性氨基酸。另外,蛋白质组分分析显示菌托中清蛋白含量较高,约占粗蛋白的69.52%,显著高于其它常见食用菌。结果表明,红托竹荪菌托是优质蛋白质资源。

家蝇GNBP3基因克隆及感染白色念珠菌后的表达

对家蝇GNBP3基因进行克隆及生物信息学分析,并对该基因在感染白色念珠菌Candida albicans后的表达情况进行研究。从构建的家蝇Musca domestica幼虫c DNA质粒文库中筛选到GNBP3基因,克隆并运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。白色念珠菌注射感染家蝇幼虫并收集标本,逆转录,通过荧光定量PCR检测感染样本中GNBP3基因的表达情况,结果进行统计学分析。研究结果表明,GNBP3基因ORF全长1473 bp,编码490个氨基酸,理论分子量为55.8 k Da,等电点为6.85;感染后不同时间点,感染组与对照组比较,在3 h、12 h、36 h、48 h GNBP3 mRNA的表达明显增高,两组比较有显著性差异(P<0.05),而24 h表达差异性最小;感染后不同组织中感染组与对照组比较,3 h和12 h时,在体壁、血淋巴、脂肪体中的表达量升高,具有显著性差异(P<0.05);24 h时,在血淋巴中的表达量较对照组高,而在唾液腺和脂肪体中的表达量呈下降趋势,均具有显著性差异(P<0.05);48 h,在血淋巴和脂肪体中表达量较对照组高,在中肠的表达量较对照组低,均具有显著性差异(P<0.01)。成功克隆GNBP3基因且在家蝇感染白色念珠菌后GNBP3的表达水平随时间的推移呈现先升高后降低再升高的趋势,在各组织中以在免疫组织(血淋巴、脂肪体)中的表达显著增高,推测其在真菌识别过程中发挥潜在作用。

不同载体表达的家蝇β-葡萄糖苷酶生物学活性比较

克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因,建立两种原核表达体系和一种真核表达体系,分别检测表达产物的活性,比较不同表达体系对其表达水平及重组蛋白酶学性质的影响,为进一步研究和利用家蝇BG酶奠定基础。本研究根据BG酶基因的cDNA序列设计引物扩增BG酶基因成熟肽的基因片段,分别采用表达载体pET-28a(+)和pEGX-4T-1构建原核表达体系并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,进行Western Blotting鉴定证实重组质粒在其宿主菌E.coli BL21(DE3)中成功表达,命名为MDBG-1蛋白和MDBG-2蛋白。同时选用真核表达载体pPICZa A构建酵母分泌型表达体系在酵母细胞GS115中获得稳定的表达,将其命名为MDBG-3蛋白。采用七叶苷平板法和DNS法对三种表达体系所重组表达的蛋白进行酶活性鉴定和检测,显示3种表达体系所表达的融合蛋白均具有BG酶活性,其酶活力有所不同,且真核表达体系所表达的蛋白酶活性最高。本研究对家蝇β-葡萄糖苷酶基因表达的重组蛋白特性进行初步研究,为发现新的有效纤维素酶体系提供基础数据。

家蝇(Musca domestica)羧肽酶基因克隆及原核表达

从构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到羧肽酶(Carboxypeptidase,CP)基因,以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR扩增,获得CP基因完整编码序列(登录号:KF939629.1)。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽和亚细胞定位等进行预测和分析。构建PEASY-E1-CP重组质粒,转化到大肠杆菌OrigamiB(DE3)中进行诱导表达。研究结果表明,CP基因ORF全长1 284 bp,编码428个氨基酸,理论分子量47.8ku,等电点为6.10,具有CP家族的蛋白保守结构域;重组原核质粒pEASY-E1-CP经IPTG诱导,蛋白在大肠杆菌中获得表达。

产虫茶昆虫灰直纹螟及其虫茶形态特征记述

灰直纹螟是一种主要的产虫茶昆虫。对以化香为寄主的灰直纹螟及其虫茶形态学进行了系统研究。详细观察了灰直纹螟各虫态的形态特征,其中幼虫和蛹的形态记述为首次报道。灰直纹螟虫茶颗粒形状为长圆柱状;虫茶颗粒颜色主要有两种,其潘通U卡色号分别为黑7U和465U,黑7U占主导;虫茶颗粒大小分为5种规格,自规格一至规格五,虫茶颗粒长径、短径均逐渐增加;虫茶香气为清香型,汤色为红褐色,明亮,滋味醇和、鲜爽。研究结果为灰直纹螟——化香虫茶品种的准确鉴定提供了科学资料。

湘黔地区三种主要虫茶品种形态学记述

虫茶是我国特有的林业资源昆虫产品,其营养成分丰富且具有多种保健作用。本文对湘黔地区常见的3种虫茶品种即米白虫茶、三叶虫茶和紫白虫茶的形态学进行了系统研究。结果表明:3种虫茶颗粒基本形状均为圆柱状;米白虫茶颗粒颜色与紫白虫茶相近,但深于三叶虫茶;三叶虫茶长短径、体积和重量均较大,紫白虫茶其次,米白虫茶最小;三叶虫茶汤色为红暗,紫白虫茶为棕红,米白虫茶为橙色;寄主植物三叶海棠香气为清香,白茶香气为鲜甜,而3种虫茶香气均为陈香;三叶虫茶滋味苦涩、回甘,米白虫茶醇和,紫白虫茶醇厚、回甘。

家蝇溶菌酶MDLZM2基因的克隆、序列分析及原核表达

对家蝇溶菌酶(Musca domestica lysozyme,MDLZM2)基因进行克隆、序列分析,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达。从Gen Bank家蝇基因组中筛选获得MDLZM2基因。以该基因的序列设计引物,进行PCR扩增,测序分析获得该基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、二级结构、三级结构和保守结构域等方面进行预测和分析。构建p EASY-E1-MDLZM2重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S Chemically Competent Cell中进行诱导表达及纯化。结果表明MDLZM2基因ORF全长552 bp,编码183个氨基酸,理论分子量21.2 k Da;等电点为6.13,具有Lysozyme家族的蛋白保守结构域。成功构建重组原核表达p EASY-E1-MDLZM2并诱导表达、纯化重组蛋白,为进一步研究该蛋白的生物学及免疫学活性奠定了基础。

家蝇抗真菌肽-溶菌酶基因的克隆、表达及序列分析

旨在对家蝇抗真菌肽MAF-1-溶菌酶(LZM)基因进行生物信息学分析,并进行融合基因MAF-1-LMZ的克隆和表达分析。从Gen Bank获得家蝇抗真菌肽MAF-1和溶菌酶LZM的编码序列,分析和预测这两种蛋白质的结构和功能。PCR扩增融合蛋白质抗真菌肽-溶菌酶的基因MAF-1-LMZ,将其克隆到原核表达载体p ET-28a中,重组质粒p ET-28a-MAF-1-LMZ在大肠杆菌Origmi B/DE3中经用IPTG诱导表达,表达产物MAF-1-LMZ通过SDS-PAGE电泳进行鉴定,采用小试管法倍比稀释法进行活性验证。结果显示,融合蛋白质MAF-1-LMZ序列的ORF为969 bp,编码322个氨基酸残基,理论分子量为35 468.6 Da,等电点为8.31,在大肠杆菌Origmi B/DE3中得到成功表达。其纯化后的目的蛋白具有抗真菌活性。

CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的临床效果评价

目的:探讨CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的临床效果。方法:收集双颌多数牙缺失、仅余留2-6颗天然牙的患者20例,随访6-24个月,询问患者对义齿的主观感受、咀嚼效率、义齿固位和稳定性,摄X线全景片,了解义齿、基牙和牙周情况。结果:患者普遍认为义齿易适应、美观、固位稳定性好、咀嚼有力。15例曾使用过传统可摘局部义齿的患者对比两种义齿,明显感觉CM球帽附着体义齿更加舒适、美观、稳定。复查X线片示CM球帽附着体义齿修复后各基牙牙周膜正常,牙槽骨无明显吸收。结论:CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的牙列缺损临床效果良好。

金属修复剂Bel—1111的组成分析

采用灼烧法和萃取法分别对国外金属修复剂Bel—1111的基料和固化剂组成进行分离,并利用红外光谱法和X衍射光谱法进行分析和鉴定.结果表明,Bel—1111的基料由环氧树脂与无机耐磨材料组成,固化剂由二乙烯三胺与各种无机填料组成.

Rhodosporidiobolus odoratus菌株GZ2017中真菌病毒的分离和鉴定

为Rhodosporidiobolus odoratus菌株中病毒的鉴定提供参考,从Rhodosporidiobolus odoratus菌株GZ2017中,分离真菌病毒Rhodosporidiobolus odoratus Totivirus 1(RoTV1);获取并解析真菌病毒RoTV1的全长基因组序列;明确真菌病毒RoTV1的病毒学分类学地位。采用随机引物法扩增病毒的全长序列;使用接头引物扩增法获取病毒末端序列;获取的病毒片段通过DNAMAN软件进行拼接;序列同源性搜索使用NCBI网站的在线BLAST程序;使用MEGA7.0软件进行系统进化树的构建。结果表明:成功分离新型真菌病毒RoTV1,其携带3条病毒条带,分别为dsRNA1、dsRNA2和dsRNA3。获得RoTV1的全长基因组序列,其中,dsRNA1序列分析显示具有2个不连续的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),即ORF1和ORF2。ORF1和ORF2分别跟全病毒科(Totiviridae)全病毒属(Totivirus)真菌病毒编码的外壳蛋白(Coat Protein,CP)和RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RdRp)具有较高的相似性。ORF1和ORF2之间间隔92个碱基。ORF2有可能通过1个由移码序列(GGAUUUU)启动的-1核糖体移码机制跟ORF1融合成1个大的融合蛋白。对dsRNA2和dsRNA3序列进行分析,未发现编码有意义的大ORF,无已知的蛋白质与dsRNA2和dsRNA3具有序列相似性。此外,dsRNA1、dsRNA2、dsRNA3在菌株GZ2017中非常稳定和相互依赖,推测dsRNA2和dsRNA3可能是dsRNA1的卫星RNA(SatRNA)。另外,基于RoTV1的RdRp和CP序列进行的系统发育分析表明,RoTV1属于Totiviridae科Totivirus属的新成员。