多重耐药大肠埃希菌喹诺酮类外排基因qepA的研究

目的对临床分离的多重耐药大肠埃希菌(E.coli)喹诺酮外排泵基因qepA的携带率、接合传递、基因功能等进行研究。方法临床分离的多重耐药E.coli 136株,经PCR筛选qepA基因,阳性菌株作16S rRNA甲基化酶基因rmtB的检测,PCR产物均经测序确认;阳性菌株进行质粒接合实验;扩增qepA基因全长,与pET-12a质粒连接,构建重组质粒,以研究qepA功能。结果 136株多重耐药E.coli qepA基因的检出率为14.0%(19/136),其中16株携带rmtB基因,二者的共存率高达84.2%(16/19)。接合实验的耐药质粒传递率为63.2%(12/19),9株接合子中检出rmtB基因,占75.0%(9/12)。与E.coli BL21(pET-12a)相比,诺氟沙星、环丙沙星和左氧氟沙星对E.coli BL21(pET-12a-qepA)的MIC分别升高64倍、32倍和4倍;而与羰基氰氯苯腙(CCCP)联合应用时三种药物的MIC值则至少降低为原值的1/4。进一步检测菌体内环丙沙星含量,在不含CCCP时,E.coli BL21(pET-12a-qepA)菌体中环丙沙星低于E.coli BL21(pET-12a)或E.coli BL21(P<0.01);加入CCCP后,菌体内环丙沙星含量明显升高(P<0.01)。结论本组多重耐药E.coli的qepA基因检出率较高(14.0%)。qepA基因和rmtB基因具有较密切的相关性和共存率,且容易在菌际间传播。QepA为质子依赖的外排蛋白,可降低某些喹诺酮类药物在细菌体内的含量,使得对药物的敏感性下降。

一株同时携带质粒介导KPC-2、DHA-1基因对碳青霉烯类药物耐药的产气肠杆菌

目的研究一株临床分离的碳青霉烯类药物耐药产气肠杆菌的耐药机制和耐药基因传播机制。方法采用琼脂稀释法检测菌株对抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),采用质粒接合试验、质粒提取、DNA分子杂交、等电聚焦电泳(IEF)、聚合酶链反应(PCR)、DNA测序和外膜蛋白分析研究菌株的耐药基因及其传递机制。结果 IEF显示临床分离的产气肠杆菌株含有3条β-内酰胺酶条带,等电点(pI)分别为5.4、6.7和7.8。PCR扩增及测序结果表明它们分别为TEM-1(pI 5.4)、KPC-2(pI 6.7)、DHA-1(pI 7.8)β-内酰胺酶。接合菌含有2条β-内酰胺酶条带,pI为6.7和7.8。接合试验、质粒提取和分子杂交试验结果显示KPC-2和DHA-1基因定位于同一个约56 kb大小的质粒上。与临床野生产气肠杆菌株相比,外膜蛋白电泳分析显示耐药分离株缺失41 000外膜蛋白。结论产气肠杆菌分离株对碳青霉烯类抗菌药物耐药可能由A类2f组KPC-2酶介导,DHA-1酶合并外膜蛋白缺失也可能与碳青霉烯类药物耐药机制形成有关。

大肠埃希菌16S rRNA甲基化酶基因的接合传递及其与整合子的相关性

目的对临床分离的多重耐药(MDR)大肠埃希菌株的16SrRNA甲基化酶基因特征与接合传递效率进行研究,探讨其与整合子的相关性。方法 136株MDR大肠埃希菌经PCR筛检16SrRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD;对阳性菌株作整合酶基因intI1、intI2和intI3检测,并扩增Ⅰ类整合子可变区插入片段,对扩增产物进行测序与鉴定所含耐药基因盒;以阳性菌株为供体菌,耐叠氮化钠大肠埃希菌J53为受体菌进行接合试验,并结合质粒图谱对16SrRNA甲基化酶基因进行初步定位。结果在136株多重耐药大肠埃希菌中,共检出16SrRNA甲基化酶阳性菌12株(8.8%),其中,armA阳性3株(2.2%),rmtB阳性10株(7.4%),未检出rmtA、rmtC、rmtD基因。阳性菌株均只含Ⅰ类整合子,对其可变区扩增片段(1000～2300bp)的测序结果显示,该区域含有多种耐药基因盒,但不含16SrRNA甲基化酶基因。接合试验与质粒图谱结果初步表明armA和rmtB编码基因位于约23000bp的质粒上,接合试验的耐药质粒传递率高达83.3%(10/12)。结论在MDR大肠埃希菌中,armA和rmtB编码基因位于约23000bp质粒上,其中,rmtB为优势基因,接合试验和质粒图谱证明该类耐药质粒很容易在同种菌间传播。Ⅰ类整合子与16SrRNA甲基化酶基因虽然存在于同一菌体内和/或同处于一个质粒上,但整合子基因盒对该类基因的捕获率很低或根本不捕获。

血清PCT及CRP联合检测在COPD患者诊疗中的意义探讨

目的：通过检测慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清中血清降钙素原（PCT）及血清C反应蛋白（CRP）水平及治疗前后指标的变化情况,探讨早期检测PCT、CRP在临床诊疗中的应用意义。方法：选取本院2011年9月∽2012年5月84例COPD患者,同时选取70名健康体检正常者为对照组,检测治疗前后和正常对照组的PCT水平、C反应蛋白（CRP）水平及外周血白细胞计数,并作比较分析。结果：两组间年龄、性别、职业、吸烟史及家族史比较差异有统计学意义（P〈0.05）。病例组在入院后各项指标检测率明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。病例组治疗前后PCT、CRP显著下降（P〈0.05）,且与临床症状一致。结论：PCT、CRP作为反映炎症早期指标均参与了COPD的炎症过程,外周血测定血清PCT、CRP在一定程度上反映了COPD患者病情演变及严重程度,有益于早期诊断、早期治疗干预。

胸水γ干扰素特异性效应T细胞检测对结核性胸膜炎诊断的价值评估

目的探讨胸水中γ-干扰素特异性效应T细胞检测(T-SPOT.TB)对结核性胸膜炎的诊断价值。方法实验组:结核性胸膜炎患者35例,对照组:非结核性胸膜炎患者40例,分别检测其外周血及胸水特异性效应T细胞释放的γ干扰素,通过绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),比较其特异度、敏感度。结果胸水T-SPOT.TB试验对于结核性胸膜炎的诊断效果明显高于外周血,特异性,敏感性达90%以上。其ROC曲线下面积大于90%。结论胸水γ-干扰素特异性效应T细胞检测对于结核性胸膜炎的诊断有着较高的敏感性和特异性,有助于结核性胸膜炎的早期诊断和鉴别诊断。

社区学龄前儿童维生素A、E水平测定分析

目的了解社区学龄前儿童维生素A、E水平,为社区儿童保健及临床治疗提供参考。方法选取2018年1月~2019年4月间在无锡市惠山区人民医院就诊的学龄前儿童(≤6周岁)1877例,按年龄分为三组:A组(<1岁),B组(≥1岁,<3岁)及C组(≥3岁),采用高效液相色谱法(HPLC)对血清VA、E水平进行测定。结果可疑VA缺乏、VA缺乏比例分别为40.9%、46.4%,C组儿童VA水平最低(P<0.05)。VE缺乏比例不高(4.9%),但随着年龄增长VE水平逐渐降低(P<0.05)。儿童呼吸道感染中,VA、VE缺乏者比率明显高于正常者,且VA在儿童呼吸道感染具有一定的诊断价值。结论社区学龄前儿童VA缺乏较严重,VA、VE与儿童呼吸道感染存在联系,应加强VA的营养补充,尤其是幼儿园期,同时应注意VE不同年龄段的差异。

阴道分泌物常规检查联合5项检测系统在阴道炎中的临床应用

目的探讨常规镜检法联合阴道分泌物5项检测在阴道炎中的临床作用。方法收集我院2018年7-8月958例受检阴道分泌物标本,用常规镜检法以及分泌物5项分析系统进行清洁度、真菌、滴虫、细菌性阴道炎(BV)以及需氧菌阴道炎(AV)等检测并分析,同时比较分析系统与AT-1600唾液酸苷酶结果。结果958例受检者中,阴道感染者482例(50.3%),其中单一阴道感染者212例(22.2%),混合阴道感染者270例(28.2%),检测系统提示AV感染者32.8%;清洁度Ⅰ-Ⅱ度者651例(67.9%),Ⅲ-Ⅳ度者307例(32.1%),且Ⅲ-Ⅳ度者各类型阴道感染发生率均明显高于Ⅰ-Ⅱ度者(P<0.05);>51岁组5项生化指标明显高于其他各组(P<0.05);检测系统唾液酸苷酶阳性率高于AT-1600以及常规镜检查线索细胞(P<0.01)。结论该分泌物检测系统除可辅助诊断BV外,也能更好地提供AV感染指标,且结果不受主观因素的影响,与常规镜检法联合可为临床更好地诊断阴道炎,对症治疗提供依据。

多重耐药大肠埃希菌临床株质粒介导的喹诺酮类耐药机制研究

喹诺酮类属于化学合成的抗菌药物，既是临床最常用的抗菌治疗剂，也在畜牧业和养殖业中广泛使用。鉴于细菌对喹诺酮类抗菌素的耐药率逐年上升，尤其是某些最常见的条件致病菌如大肠埃希菌对其表现出的较广泛耐药率和多重耐药性，已经引起学术界的关注。

多重耐药大肠杆菌耐药基因与整合子遗传标记基因间的相关性

【目的】对多重耐药大肠埃希菌(Escherichia coli)临床株的β-内酰胺酶类(β-lactamases,BLs)和氨基糖苷钝化酶类(aminoglycoside modifying enzymes,AMEs)耐药基因与Ⅰ-Ⅲ类整合子遗传标记基因之间的相关性进行研究。【方法】采用VITEK-GNS药敏卡测定136株E.coli对14种抗菌素的敏感性;纸片扩散法确认超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamases,ESBLs)产酶株;PCR法检测BLs、AMEs相关耐药基因及Ⅰ-Ⅲ类整合子遗传标记基因;接合传递试验和质粒提取对16S rRNA甲基化酶基因进行初步定位。【结果】136株多重耐药的E.coli ESBLs产生率高达70.59%(96/136),产酶株对氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素、亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦以外的其余9种抗菌素的耐药率显著高于非产酶株(P<0.05)。BLs耐药基因总检出率为96.32%(131/136),1株外膜通道蛋白oprD2基因缺失,AMEs耐药基因总检出率为100%(136/136),Ⅰ类整合子遗传标记基因qacEΔ1-sul1的检出率为94.12%(128/136),未检出Ⅱ类与Ⅲ类整合子基因。BLs基因和AMEs基因与qacEΔ1-sul1遗传标记基因的同时携带率分别为90.44%(123/136)和94.12%(128/136),两类同时携带率之间的差异不具统计学意义(P>0.05),上述两类耐药基因与qacEΔ1-sul1遗传标记基因的三者同时携带率为90.44%(123/136)。此外,还检出16S rRNA甲基化酶基因12株(8.82%),其中,armA与rmtB的检出率分别为2.21%和7.35%,未检出rmtA、rmtC和rmtD。接合试验与质粒图谱结果初步表明:armA和rmtB编码基因位于约23 kb的质粒上,其耐药质粒在同种菌间的传递率高达83.3%(10/12)。【结论】多重耐药E.coli临床株的BLs基因、AMEs基因与qacEΔ1-sul1遗传标记基因三者同时携带率高达90.44%,表明多重耐药的形成在三者间具有密切的相关性;实验结果还显示:E.coli临床株的多重耐药性形成和传播与Ⅱ和Ⅲ类整合子基因无关。另外,16S rRNA甲基化酶基因携带率为8.82%(armA 2.21%和rmtB 7.35%),并初步证明armA和rmtB编码基因位于约23 kb的质粒上,其耐药质粒在同种菌间的传递率高达83.3%(10/12)。

Pro167位点突变型CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶的动力学特征

目的 对Pr0167位点突变型CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的动力学特征进行分析与评价.方法 以携带CTX-M-14基因的大肠埃希菌临床株为模板,克隆目的 基因,重组工程菌,并表达CTX-M-14型ESBL.进而采用基于重叠延伸PCR法的定点突变技术,将CTX-M-14型ESBL的167位点Pro（P）分别突变为Gly（G）、Gln（Q）、Ser（S）和Thr（T）,重组构建P167G、P167Q、P167S和P167T四株突变型的CTX-M-14工程菌.表达与纯化野生型、重组型和突变型CTX-M-14型ESBL,检测其水解β-内酰胺类抗菌素的酶动力学参数（Kcat、Km和Km）.结果 对野生型与重组型CTX-M-14型ESBL的酶动力学参数进行配对t检验,结果显示两者Kcat（t=1.796,P=0.123）、Km（t=0.559,P=0.596）、Kcat/Km（t=0.893,P=0.406）间的差异无统计学意义（P〉0.1）.与重组CTX-M-14型ESBL相比,P167S突变型酶对头孢他啶的Km值大幅降低,为突变前的1/16（8.39/134.85）;Kcat和Km值分别为突变前的2.87倍（1.81/0.63）和43.6倍（0.218/0.005）;且对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松和头孢噻肟的Kcat/Km值都呈现出显著减小的趋势（P〈0.05）.与重组CTX-M-14 ESBL相比,P167Q和P167G突变型酶对头孢他啶的Kcat值亦大幅减小（P〈0.01）,而P167T突变型对头孢他啶的酶动力学参数无明显变化.结论 重组型与野生型CTX-M-14 ESBL之间各项酶动力学参数的差异无统计学意义（P〉0.1）.而P167S位点的突变,不仅增强了CTX-M-14型ESBL对头孢他啶的亲和力,也加快了酶-底物复合物的转换速率.通过对Pr0167位点4种突变型酶的动力学参数比较,初步说明突变型CTX-M ESBL对头孢他啶所具备的高水解活性机制,不能简单地归结于Pro167位点被小侧链氨基酸残基取代而导致酶活性中心空间扩大的解释.

胆囊恶性肿瘤合并消化道艾氏小杆线虫感染一例

患者男，84岁，江苏省无锡市惠山区人。因“间断右上腹隐痛不适2个月余”入院，否认既往特殊慢性病史。病程中患者皮肤瘙痒明显，可见局部散在丘疹。

2型糖尿病合并尿路感染尿培养病原菌分布及耐药率分析

收集2016年1月-2018年8月我院2型糖尿病尿培养结果及药敏资料进行比较与分析。结果:1.多见于女性、中老年、血糖控制较差、病程长、平均体重指数超重,2.尿培养阳性100病例中,革兰氏阴性(G-)菌是尿路感染常见细菌,排名前三位是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌,占比分别为64. 64%,8. 8%,4. 4%。革兰氏阳性(G+)菌占比前三位的是粪肠球菌、无乳链球菌、表皮葡萄酒球菌,占比分别为8. 8%、4. 4%、4. 4%。G-细菌对哌拉西林/他唑巴坦,阿米卡星耐药率低,对亚胺培南耐药率为0。革兰氏阳性(G+)菌对环丙沙星、左氧氟沙星耐药率均为为23. 53%,对利奈唑安耐药率低于10%,对万古霉素、呋喃妥因耐药率为0。结论:T2DM合并尿路感染主要病原菌G-菌,ESBLs+菌耐药率高,尿培养及药敏检查有重要的意义。