基于沙门氏菌PagN外膜蛋白的广谱单克隆抗体的制备与鉴定

为制备针对沙门氏菌特异性外膜蛋白PagN的单克隆抗体(MAb),研究通过构建重组质粒pColdⅠ-pagN和pGEX-6P-1-pagN,利用大肠杆菌系统表达并纯化了肠炎沙门氏菌His-PagN和GST-PagN重组蛋白,免疫6~8周龄BALB/c小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术筛选获得2株能稳定分泌PagN蛋白MAb的杂交瘤细胞株3B3和3F10。结果显示:3B3和3F10的亚型均为IgG2b,ELISA效价分别为1.14×10^(9)和1.32×10^(8),Westernblot分析显示其均能特异性结合His-PagN蛋白;进一步分析显示3B3和3F10可特异性识别9种不同血清型沙门氏菌,而不与9种非沙门氏菌菌株反应;全菌包板间接ELISA结果显示3F10能特异性识别不同血清型沙门氏菌,显示出用于沙门氏菌检测的潜能。研究表明制备的单克隆抗体3B3和3F10可特异性识别不同血清型沙门氏菌PagN蛋白,为沙门氏菌检测提供了重要生物材料。

针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定

目的研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础。方法利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后利用间接ELISA法测定单抗的效价、亚型和亲和力;通过Western blot、间接免疫荧光试验分析其与原核、真核表达SARS-CoV-2重组N蛋白的特异性结合能力;通过间接ELISA法评价其在不同冠状病毒N蛋白检测中的应用潜力。结果成功地表达和纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,筛选获得1株特异性识别重组N蛋白的单克隆抗体并命名为11F4,其亚型为IgG1,腹水效价为2.0×10^(7)以上,亲和力为4.44×10^(8)M^(-1);Western Blot分析表明其能与SARS-CoV-2重组N蛋白特异性反应,间接免疫荧光试验显示其能特异性识别HEK-293T细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,表明该蛋白免疫反应性良好;间接ELISA法结果表明其可特异性识别真核细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,而与MERS-CoV和HCoV-229E的N蛋白无交叉反应。结论成功获得可特异性识别细胞表达及体外制备的SARS-CoV-2 N蛋白的单克隆抗体,具备特异性检测SARS-CoV-2的潜能,为下一步研究提供了重要生物材料。

沙门菌H:t抗原表位单克隆抗体的制备及初步应用

山夫顿堡沙门菌、加利福尼亚沙门菌、奥拉宁堡沙门菌等含有H:t表位的血清型沙门菌具有较广泛的流行性和致病性,研制特异性识别H:t表位的单克隆抗体可为这些血清型沙门菌的快速、高效检测提供重要生物材料。本研究选用奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白作为免疫原,通过经典B细胞杂交瘤技术筛选制备特异性识别沙门菌H:t抗原表位单克隆抗体,利用间接ELISA、Western blot方法对其亚型、效价、亲和力、特异性等生物学特性进行分析。结果显示,筛选获得2株单抗并命名为4H4和5G10,其亚型均为IgG1,其中4H4单抗的细胞培养上清效价达2.0×10^(5),腹水效价达1.0×10^(7),亲和力为2.04×10^(10)mol/L。Western blot分析显示4H4单抗与含H:t抗原表位的奥拉宁堡沙门菌、山夫顿堡沙门菌、加利福尼亚沙门菌特异性反应,而与不含H:t抗原表位的沙门菌和非沙门菌不反应。将该单抗用于鸡肉模拟污染样品中沙门菌的ELISA检测,能够检测出含H:t表位的血清型沙门菌,而不含H:t表位的沙门菌和非沙门菌均为阴性。本研究制备了沙门菌H:t抗原表位特异性单抗,可应用于ELISA检测含H:t表位的沙门菌造成的食品污染,为建立特定血清型沙门菌相关免疫学检测方法提供了重要材料基础。