核酸检测在血站血液筛查中的初步应用及特点

目的对酶联免疫检测阴性的样本进行核酸检测,探讨其应用特点。方法将酶联免疫检测阴性的样本按不同试剂厂家的要求进行汇集并进行核酸筛查,不同时段应用不同的核酸检测试剂,并参加卫生部临检中心和澳大利亚国家实验室的核酸检测室间质评。结果在筛查的55 543人份样本中,检出HBsAg阴性而核酸HBVDNA阳性的样本2份,未检出丙型肝炎病毒抗体和艾滋病毒抗体阴性而其相应核酸阳性的样本。卫生部临检中心室间质评结果与预期结果完全相符,国际室间质评结果HIV-1RNA完全相符,HBVDNA和HCVRNA分别有1个和2个未检出。结论我国目前核酸检测试剂的灵敏度还有待进一步提高,核酸检测还需进一步扩大检测规模。核酸检测在血站和医院应用的不同。

全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA

目的寻找一种有效实用的全自动多重检测试剂同时检测HBVDNA,HCVRNA和HIV-1RNA系统MPLC-COBAS。方法笔者采用ACROMETRIX公司的NACTMHBVDNA,HCVRNA及HIV-1RNA核酸对照品,卫生部临床检验中心的HBVDNA,HCVRNA质控对照品,检测该系统的灵敏度;同时采用我中心酶免法(ELISA)初筛检结果阳性,经中和实验确认HBsAg阳性标本10份,经RIBA确认抗-HCV阳性标本3份,经WesternBlot确认抗-HIV阳性标本3份,检测该系统的阳性符合率;检测大量临床ELISA筛检结果为阴性的标本来检测其特异性,并且每次实验设立内对照,阴阳性对照以进行临床标本检测。结果该系统的检测灵敏度(95%可信限)为HBV病毒为24-60IU/mL,HCV病毒为78-125IU/mL,HIV-1RNA病毒为45-67IU/mL,阳性符合率为100%,假阳性率为0.13%。结论全自动多重检测试剂同时检测HBVDNA,HCVRNA和HIV-1RNA系统MPLC-COBAS用于检测临床标本是有效实用的,可进一步加大临床标本检测数量,将该系统更好地用于酶联阴性结果的大规模筛查。

深圳市2001—2004年血液病毒感染残余风险评估

目的血液经筛查后,估算出每百万U血液中"窗口期"血液的可能性。方法对深圳2001—2004年血液筛查数据进行回顾性分析,采用已发表的1种风险评估方法对HIV,HCV,HBV残余风险进行评估,并且计算出采取不同的筛查方式可降低的残余风险。结果残余风险分别为:每17 501 U的血液中可能有1U的血为HBV"窗口期",每59 588 U的血液中可能有1 U的血为HCV"窗口期",每903 498 U的血液中可能有1 U的血为HIV"窗口期"。结论同西方输血服务系统相比,HBV和HCV的流行率和残余风险较高,HIV相对而言不算很高。采取高灵敏度的HBsAg酶联筛查试剂和抗-HCVAg联合检测试剂将大大降低经输血导致病毒感染的残余风险。

两种梅毒检测试剂敏感性及特异性比较

目的 比较ELISA及TRUST 梅毒检测试剂敏感性及特异性。方法 采用ELISA及TRUST法同时筛查献血者标本中的梅毒指标 ,结果阳性采用TPHA法确证。结果 在TPHA法确证的 2 73例阳性标本中 ,TRUST检出 97例 ,敏感性为 35 5 % ;ELISA检出 2 70例 ,敏感性为 98 9%。TRUST检出的 10 3例阳性中 ,有 6例经确证为阴性 ,特异性为 94 2 % ;ELISA检出的 32 4例阳性中 ,有 5 4例经确证为阴性 ,特异性为 83 3%。两种试剂检测结果同时为阳性的标本为 94例 ,经确证均为阳性 ,有 3例经确证为阳性的标本为TRUST法检出而ELISA方法未能检出。结论 ELISA试剂的敏感性远远高于TRUST试剂 ,而特异性稍低于TRUST试剂 ,无论哪种试剂阳性 ,均应进行TPHA确证 ,若两种试剂检测均为阳性 ,在临床上基本可断定为阳性。

应用全自动核酸检测系统MPLC-COBAS筛查献血员HIV-1 RNA

目的建立一套全自动核酸检测系统筛检献血员艾滋病病毒1型(HIV-1)核糖核酸(RNA)。方法应用MagNAPureLC(MPLC)系统提取核酸,COBASAmplicor系统进行基因扩增与检测,再应用国际标准品和临床标本验证MPLC-COBAS系统。结果该系统的检测灵敏度(95%CI)HIV1RNA病毒为45～67IU/ml,5124份标本混样检测结果为阴性,81份HIV抗体(抗HIV)酶联免疫吸附试验(ELISA)假阳性混样检测结果及6份追踪样本核酸检测结果均为阴性。结论该系统具有全自动检测、灵敏度高、特异性好的特点,可进一步扩大临床标本检测量,探索出切实有效的核酸检测系统进行献血员筛查HIV1RNA。

中国深圳地区丙型肝炎病毒RNA阳性与人类白细胞抗原分型的关联研究

目的探讨深圳地区丙型肝炎病毒感染情况,病毒载量,基因分型与人类白细胞抗原分型的关联。方法收集2005年7月至2006年7月深圳市血液中心与深圳市肝病研究所的丙型肝炎病毒RNA阳性的献血者和病人血清152人份,采用特异性引物进行丙型肝炎病毒定量分析后,再设计特异性引物进行基因分型和采用序列特异性引物聚合酶链反应（sequencespecificprimerspolymerasechainreaction,PCR-SSP）技术进行人类白细胞抗原分型。结果丙型肝炎病毒RNA阳性者中,定量水平在4×106^6×10^6copies/ml左右,基因分型以2B为主,HLA-A3相对危险度（RR）为4.3,P〈0.05,HLA-B46（RR=5.2,P〈0.02）和HLA-DRB4（RR=1.61,P〈0.01）与丙型肝炎病毒持续感染有关,HLA-B58（RR=0.37,P〈0.01）,HLA-B＊60（RR=0.37,P〈0.01）,HLA-DRB13（RR=0.28,P〈0.01）和HLA-DRB15（RR=0.02,P〈0.01）似乎具有保护性意义。结论在深圳汉族人群中,HLA等位基因可能会影响丙型肝炎的持续感染与转归。

抗-HCV ELISA室内质控失控原因的回顾性分析

随着现代化实验仪器进入实验室,操作步骤不断标准化,室内质控显得越来越重要.笔者从质控品的微生物污染等方面着手,以S/CO为指示参数,对本室3月份抗-HCV ELISA室内质控失控的原因进行了回顾性分析,说明在现代化仪器广泛使用的今天,室内质控越来越不容忽视.

艾滋病初筛试剂评价

目的 评价 5种艾滋病初筛试剂的灵敏度及特异性。方法 将卫生部临床检验中心发放的标准质控血清做一稀释系列 ,用艾滋病初筛试剂对此系列进行检测 ,从而初步判断该试剂的灵敏度 ;对艾滋病抗体初筛阳性的标本进行免疫印迹法及RIBA确认 ,上述结果均为阴性的标本视为假阳性标本 ,从而计算试剂的灵敏度及特异性。结果 进口试剂灵敏度高于国产试剂 ,特异性则无显著差异 ;检测出现的假阳性与显色剂及包被抗原的纯度有关。结论 根据试剂灵敏度和特异性 。

无症状HBsAg携带者血清HBV DNA定量检测的评估

目的 探讨一种新的高灵敏度血清 HBV DNA水平检测方法以及病毒 DNA检测用于献血员筛选的可行性。方法 采用 Am pli Sensor定量荧光 PCR技术定量检测经 EL ISA法筛选的 32 1名健康志愿者和37名 HBs Ag携带者血清 HBV DNA水平。结果 32 1名志愿者中 2名 HBV DNA阳性 (0 .6 % ) ;37例 HBs Ag携带者 DNA检出率 1 0 0 % ,但 DNA含量相差较大 (7.98± 5 .37)。结论 Ampli Sensor定量荧光 PCR技术灵敏度可达对数值 1拷贝 /毫升 ,该法用于献血员病毒 DNA检测有一定意义 ,但更适合用于临床健康检查 ;同时发现 HBV在无症状 HBs Ag携带者体内病毒复制差异较大 ,可能与不同个体的免疫状况有关。

血液HBV全自动核酸筛查方法的应用研究

目的:探讨在加样仪上实现血液样本汇集,在RocheMPLC上全自动提取样本HBVDNA ,在COBASAM PLICOR上进行扩增和检测的方法,为血液HBV全自动核酸筛查提供应用依据。方法:在酶联免疫吸附实验(ELISA)筛查血液基础上,应用STAR2 0 0 0加样仪自编程序进行全自动血样汇集( 2 4人份) ,在MPLC上全自动方法提了样本核酸,应用PCR方法在COBASAMPLICOR进行扩增和检测分析结果,从检出限量及抗干扰能力方面进行考评。结果:用国际标准核酸质控品考评及深圳应用,表明全自动汇集,全自动核酸提取及扩增和检测HBVDNA 95 %检出限量为3 8.9IU/ml,95 %CI为2 1～3 2 3 ,2 0mg/dl胆红素、Ig/dl血色素及中等程度的脂血对结果无影响。通过对16 5 12个样本共688个汇集池分析,HBVDNA阳性8例,阳性率为0.0 4 9%。

自动化核酸扩增技术(NAT)在血液筛查中的应用研究

目的为了提高血液安全性,探讨自动化核酸扩增技术在血站血液筛查中应用的可行性。方法在酶联免疫试验(ELISA)常规筛查血液的基础上,应用STAR2000加样仪自编程序进行全自动血样汇集(8人份),在KHB-DP1000半自动核酸提取仪上自动化方法提取样本核酸,应用荧光PCR方法在AB I7300上进行扩增和检测分析结果,用临检中心室间质控品和澳大利亚室间质控品进行室间质评,用标准品考评检测限量。结果应用标准品考评检测限量,本法的95%的检出限量HBV DNA、HCV RNA和H IV RNA分别为100.9 IU/m l,155.1拷贝/m l和165拷贝/m l,95%可信限范围分别为(60.1、302.2),(98.9,398.6)和(105.2,425.8)。通过对16 744个样本共2093汇集池检测,初始检测HBV DNA阳性池2个,HCV RNA、H IV RNA未检出阳性池,进一步拆分检测,有2份献血者的血液HBV DNA阳性,HBV DNA阳性率为0.012%。结论随着国内相关技术的不断提高和相关制度的不断完善,可以考虑将国产自动化核酸扩增试剂纳入血站血液常规筛查。

免疫筛查阴性献血者血样病毒核酸检测的研究

目的了解二次酶联免疫筛查献血者血样漏检的原因。方法将二次酶联免疫筛查阴性的献血者血样在加样仪上实现血液样本汇集,用全自动核酸提取仪提取样本核酸,以核酸扩增检测仪做HBV、HCV和HIV自动扩增检测。对HBsAg阴性、HBVDNA阳性献血者用核酸筛查试剂定量检测HBV,并每隔2周对其跟踪采血,做HBV两对半免疫检测和HBsAgV3的确认试验。结果16320份二次酶联免疫筛查阴性的合格献血者血样中,8份HBVDNA阳性(漏检率0.49‰),未发现HCV和HIV1RNA阳性。8份HBVDNA阳性献血者乙肝两对半免疫检测HBsAg、HBsAb和HBeAg均为阴性,HBcAb均为阳性,3份HBeAb为阳性。6例HBsAg阴性HBVDNA阳性献血者血样的病毒滴度在(76～1490)copies/ml,2例病毒滴度过低,未定量检测到病毒。跟踪6名HBVDNA阳性献血者,1例18周时HBsAg确认试验阳性,其余5例仍为阴性。结论现行的二次酶联免疫技术的血液筛查存在HBV漏检,原因可能是隐匿性乙型肝炎病毒感染。应重视血液筛查工作中HBV的漏检及输血传播,并在现有的血液筛查模式中或增加HBcAb检测,或增加病毒核酸筛查。

不同ELISA试剂HBsAg初复检结果的比较

目的探讨ELISA复检试剂在实际血液筛查HBsAg中的问题。方法使用加样仪和FAME全自动酶免分析仪,分别用不同厂家ELISA试剂对血标本作HBsAg筛查,并用临检中心定值质控血清和HBsAg血清盘检测最低检出量和符合率,部分HBsAg阳性标本用乙型肝炎荧光PCR试剂盒检测。结果219 974份标本中共检出HBsAg阳性1 829份,阳性率为0.83%,其中在1 829份阳性中,国产A的HBsAg阳性为1 439份,检出率78.67%,进口B的HBsAg阳性为1702份,检出率93.05%。进口B共检测15批次,最低检出量为(0.25-0.50)ng/ml,血清盘符合率11批次完全相符,其中血清盘阳性符合率15批次均为15/15,阴性符合率11批次为15/15,4批次为14/15。国产A共检测18批次,2000-2002年最低检出量为(0.50-1.00)ng/ml,2003-2004年为(0.25-0.50)ng/ml,血清盘符合率2批次完全相符,其中血清盘阳性符合率7个批次为14/15,阴性符合率8个批次14/15,1个批次12/15。结论2种不同ELISA试剂的HBsAg检出率存在差异,单独使用都有可能漏检,2次ELISA复检HBsAg在血液筛查中仍有实际应用价值,应重视HBsAg血筛试剂的质量标准和质量控制。

对HBsAg阴性无偿献血乙型肝炎感染者的追踪研究

目的了解和分析HBsAg阴性无偿献血者乙型肝炎感染状况。方法应用罗氏聚合酶链反应（PCR）定量检测方法追踪6位HBsAg阴性，DNA阳性感染者的病毒载量，同时对进行基因分型、血清转换及ALT等多项指标的的动态追踪分析观察。结果6例阳性样本经过至少40d追踪发现，3例发生了血清转换现象；DNA定量追踪分析表明，病毒载量在（35～1．8）×10^4拷贝／ml之间，1例为急性乙型肝炎感染，病毒载量峰值为1．8×10^4拷贝／ml，3例呈低水平携带状态，病毒载量在100～500拷贝／ml之间波动；1例病毒载量下降至检不出，而HBsAg转换成阳性；最后1例间或能检出病毒，载量〈100拷贝／ml。结论本实验结果认为有必要进行献血者HBV核酸筛查工作，进一步提高输血安全性。

血液HBV DNA全自动检测及基因分型分析

目的建立血液HBVDNA标本汇集、核酸提取、扩增及检测的全自动筛查模式,对阳性标本进行基因分型和血清学追踪检测,为血液HBVDNA自动化筛查提供科学依据。方法在酶联免疫吸附试验(ELISA)筛查血液基础上,应用STAR2000加样仪自编程序进行全自动血样汇集(24人份),在MPLC仪上全自动提取标本核酸,应用PCR方法在COBASAMPLICOR进行扩增和检测分析结果,用国际标准核酸质控品考评检出限量,对阳性标本进行基因分型并追踪血清转换过程。结果全自动汇集、全自动核酸提取和扩增及检测HBVDNA95%检出限量为38.9IU/ml,95%CI为(21323)。通过对16512个标本共688个汇集池分析,HBVDNA阳性8例,阳性率为0.049%。其中C型3人,B型2人,D型1人,2人未能确定基因型,6例阳性标本追踪发现,3例发生了血清转换现象。结论HBVDNA全自动核酸检测方法可应用于24人份血液混样核酸筛查。

深圳市献血人群HIV感染现状分析

目的为了控制艾滋病病毒(HIV)通过血液传播,提供低危献血员定期献血,提高血源质量,降低输血风险。方法通过分析1995～2003年献血人群检测结果和HIV感染现状,找出易感人群进行防范、教育,防止HIV的传播。结果通过近10年的努力深圳市血液中心共筛出艾滋病病毒抗体(抗HIV)阳性者18例。其中有偿供血者确认抗HIV阳性4例,占有偿供血者总数的2069/10万;无偿献血者确认抗HIV阳性14例,占无偿献血总数的472/10万。18例抗HIV确认阳性者人口学分析结果表明流动人口占8889%,18～40岁的青壮年占8333%,临时工、服务行业占8333%。结论表明不论无偿献血和有偿供血者都要进行严格的血液筛查,加强流动人口的管理,加大宣传防治艾滋病(AIDS)的力度,提高全民的防范意识,预防、控制AIDS的传播。

深圳市无偿献血血液筛查结果分析

目的 :了解深圳无偿献血输血感染性疾病真实感染情况。方法 :采用血清学实验 EL ISA (酶联免疫吸附试验 )、 RIBA (重组免疫印迹试验 )、 WB (免疫印迹试验 )、 TRU ST (甲苯胺红不加热血清试验 )、 TPHA (梅毒螺旋体血凝试验 )和中和实验及分子生物学实验 PCR (聚合酶链反应 )进行血液初筛和对阳性结果进行确证分析。结果 :深圳市无偿献血输血感染性疾病 HBV、抗 - HCV、抗 - HIV和梅毒流行率分别为 0 .79%、 0 .0 92 %、 4 .4 5 / 10万和 0 .6 3%。结论 :应提高目前试剂的特异性和灵敏度 ,进一步确保输血安全。

2006～2008年深圳市无偿捐血人群梅毒抗体阳性率回顾性调查研究

目的了解深圳市无偿捐血者近年来梅毒感染状况,控制梅毒经血液传播,降低输血风险,为捐血者的招募提供参考依据。方法用梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)及酶联免疫吸附试验(ELISA)对捐血者进行梅毒抗体筛查,阳性者用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)确认。对数据进行分析,找出保障安全输血的有效措施。结果 2006～2008年深圳市筛查无偿捐血者共156 652例,经TPPA确证梅毒抗体阳性626例,梅毒抗体阳性率为0.40%。2006年、2007年、2008年阳性率分别为0.43%、0.40%、0.38%,呈逐年下降趋势,在年龄、职业、学历和捐血次数分布上存在显著性差异。结论梅毒抗体阳性率在深圳市捐血人群中呈逐年下降趋势,年龄、职业、学历、捐血次数与梅毒抗体阳性率有关。

HCV核心抗原作为“窗口期”HCV感染标志物的检测

目的 缩短献血者HCV感染检测的“窗口期”。方法 采用HCV核心区抗原ELISA试剂盒检测商业PANEL系列血样和健康无偿献血者标本 ,对初复检均为阳性的标本 ,采用HCV中和试验及HCVRNAPCR定性及定量确认结果。结果 1 74 9份无偿献血者标本中 ,1 8份标本初检阳性 ,复检后仍有 2份阳性 ,经HCV核心区抗原中和试验 ,HCVRNAPCR定性及定量结果均为阴性 ,HCV核心区抗原ELISA试剂的特异性为 99.88%。对PANEL 1 4份系列样本的检测显示 ,HCV核心抗原比第 3代丙肝抗体早 4 6d检出 ,与PANEL生产厂家所提供的数据几乎完全相同。结论 HCV核心抗原的检测可明显缩短献血者HCV感染检测的“窗口期” 。