猫白血病C亚类病毒受体1的反义RNA1靶向抑制微小RNA-515-5p表达对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨猫白血病C亚类病毒受体1的反义RNA1(feline leukemia virus subgroup C virus receptor 1 antisense RNA 1,FLVCR1-AS1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法以人永生化鼻咽上皮细胞NP69(简称NP69细胞)为对照,实时荧光定量PCR(realtime fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测鼻咽癌细胞系(5-8F、C666-1、6-10B)中FLVCR1-AS1和微小RNA(microRNA,miR)-515-5p表达。将C666-1细胞分为si-NC组、si-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、miR-515-5p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组和si-FLVCR1-AS1+anti-miR-515-5p组,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell检测分别检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证FLVCR1-AS1和miR-515-5p调控关系。结果鼻咽癌细胞系(5-8F、C666-1、6-10B)中FLVCR1-AS1表达高于NP69细胞(2.26±0.11、4.19±0.24、3.54±0.18 vs 1.00±0.00,P<0.05),而miR-515-5p表达低于NP69细胞(0.86±0.09、0.20±0.03、0.47±0.05 vs 1.00±0.00,P<0.05)。与si-NC组比较,si-FLVCR1-AS1组C666-1细胞光密度(optical density,OD)值(0.59±0.03 vs 1.34±0.08)、克隆数[(55.67±1.70)个vs(114.67±3.30)个]、迁移距离[(75.34±3.09)μm vs(186.29±9.29)μm]、侵袭数[(69.33±3.68)个vs(149.67±6.80)个]降低(P均<0.05)。与miR-NC组比较,miR-515-5p组C666-1细胞OD值(0.51±0.04 vs 1.36±0.07)、克隆数[(46.67±1.25)个vs(115.67±4.11)个]、迁移距离[(65.89±1.96)μm vs(186.49±8.33)μm]、侵袭数[(58.33±2.05)个vs(150.00±6.98)个]降低(P均<0.05)。FLVCR1-AS1可靶向负调控miR-515-5p。与si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组比较,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-515-5p组C666-1细胞OD值(1.16±0.06 vs 0.59±0.04)、克隆数[(106.00±3.56)个vs(55.33±2.49)个]、迁移距离[(164.06±7.40)μm vs(75.48±2.62)μm]、侵袭数[(134.67±5.31)个vs(69.00±2.94)个]升高(P均<0.05)。结论 FLVCR1-AS1可能靶向下调miR-515-5p促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭。

紫草素下调miR-224表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的探讨紫草素对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及其对miR-224的调控作用。方法选取2019年1月-2020年2月湖北省汉川市人民医院确诊的29例鼻咽癌患者,术中切除鼻咽癌组织和癌旁组织。采用不同浓度的紫草素处理人鼻咽癌细胞SUNE-1,miR-NC、miR-224 mimics分别转染入SUNE-1细胞后加入紫草素处理细胞;采用qRT-PCR法检测鼻咽癌组织、癌旁组织与各组细胞中miR-224的表达量;CCK-8、Transwell小室实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡。结果与对照组比较,紫草素组能够降低细胞活力、迁移及侵袭能力,并可提高凋亡率,差异均有统计学意义(F=136.137、68.723、71.148、61.353,P<0.05);与癌旁组织相比,鼻咽癌组织中miR-224的表达水平升高[(1.01±0.04)vs.(3.11±0.12)],差异有统计学意义(t=17.054,P<0.05)。与对照组比较,紫草素组miR-224的表达水平降低,差异有统计学意义(F=65.922,P<0.05),且不同剂量紫草素间miR-224表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫草素可通过下调miR-224的表达而抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。