病毒感染与宿主抗感染免疫之间“博弈”——凋亡、坏死和焦亡分子机制

细胞死亡是宿主抗病毒感染免疫的重要组成部分,病毒感染可引起不同形式宿主细胞死亡,包括溶解性和非溶解性两种细胞死亡类型。这两种细胞死亡类型不仅能够消除病毒感染细胞,而且还能够利用炎症因子释放进一步促进宿主先天和适应性免疫进程。反之,病毒也发展出不同规避机制来抑制宿主细胞死亡进而促进自身感染。本文就病毒感染与宿主抗病毒感染免疫之间的“博弈”——凋亡、坏死和焦亡调控机制研究进展进行综述,旨在为深入理解病毒的分子致病机制以及开发新的抗病毒策略提供参考资料。

细菌外膜囊泡结构、分泌特性及致病机制

外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)是革兰阴性菌在生长过程中释放到胞外的囊泡状结构,被认为是细菌的“远程武器”,其功能主要是攻击宿主组织并帮助细菌定植、损害宿主细胞功能、调节宿主的防御,因此OMVs在细菌致病过程中发挥着重要作用。囊泡中的物质通过与细菌释放出的自诱导物化学信号分子结合,可以驱使细菌或者囊泡在内环境中发挥特殊功能,如群体感应、生物膜形成、获取营养、抗生素抗性、应激反应、对抗其它微生物的竞争或防御、微生物群落状态、核酸转移、水平基因转移、毒素和毒力因子的递送等,且在细菌生长周期发挥着不可或缺的作用。本文主要综述OMVs结构、分泌特性及其致病机制的最新研究进展,为深入研究细菌的致病机制以及开发新的抗菌策略提供理论指导。

基于多项式回归的过山车故障诊断模型的研究与实现

过山车是一种大型游乐设施,安全性是重中之重。本文提出了一种基于过山车运行数据的故障分析方法,针对过山车运行过程中关键指标数据进行研究,通过K-means聚类算法和DTW聚类算法对历史运行数据进行聚类处理,基于多项式回归的方法建立过山车故障诊断模型。采用本方法对一台过山车进行实验,实验结果验证了本方法的有效性,有利于提高过山车运维水平,降低故障发生概率。

沙门菌Ⅵ型分泌系统组装、结构特征和分泌调控网络的研究进展

Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system, T6SS)是革兰阴性菌中广泛存在的一种“分泌装置”和“杀伤机器”,其功能是将细菌毒素输送至原核或真核细胞中从而抑制/杀灭它们。T6SS在沙门菌致病过程中发挥着重要作用,能够独立编码5套T6SSs(T6SS-1~T6SS-5),分别由沙门菌毒力岛6(SPI-6)、毒力岛19(SPI-19)、毒力岛20(SPI-20)、毒力岛21(SPI-21)和毒力岛22(SPI-22)编码。T6SS参与沙门菌的种间竞争、生物被膜形成、金属离子摄取运输以及与宿主细胞相互作用,在沙门菌生活周期中发挥不可或缺的作用。本文主要综述沙门菌T6SS组装、基因组结构特征以及分泌调控网络最新研究进展,为深入研究沙门菌致病机制以及开发新的抗菌策略提供理论指导。

猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备

【目的】研究旨在对猫细小病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)洛阳分离株VP2蛋白进行原核表达和鼠源多克隆抗体制备。【方法】根据已公布的FPV VP 2基因序列(GenBank登录号:EU018143.1)设计1对特异性引物,以洛阳地区7例疑似FPV感染猫粪便为样本提取DNA,对VP 2基因进行PCR鉴定及测序,利用Mega 11.0软件对VP 2基因进行遗传进化分析;应用在线软件预测分离株VP2蛋白结构特征并找出优势抗原表位,克隆VP2优势抗原(sVP2)并连接pET-32a(+)载体,构建pET-32a-sVP2重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞后进行诱导表达,对重组蛋白表达条件进行优化,并使用SDS-PAGE与Western blotting方法进行鉴定;将pET-32a-sVP2用镍柱亲和层析蛋白纯化后免疫BABL/c小鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价。【结果】分离得到1株FPV,命名为LY-1。遗传进化分析发现,该毒株属于FPV-G2亚群,与北京株(GenBank登录号:MT270581)亲缘关系最近。生物信息学分析显示,VP2属于稳定膜内蛋白,无信号肽与跨膜区,在N-端具有丰富的B细胞抗原表位(1―800 bp,sVP2)。试验成功构建pET-32a-sVP2重组质粒并表达,SDS-PAGE显示重组蛋白分子质量约50 ku,主要以包涵体形式存在,在30℃、1 mmol/L IPTG诱导6 h蛋白表达量最佳;Western blotting结果表明,重组蛋白能与鼠抗His单克隆抗体发生特异性反应;ELISA结果表明,该重组蛋白抗体效价为1∶128000,能够较好地识别免疫原sVP2和原核表达VP2蛋白并发生特异性反应。【结论】本试验克隆获得FPV sVP2片段,并制备多克隆抗体,为进一步研究VP2在FPV复制和致病过程中的作用及建立诊断FPV方法提供参考。

T6SS在调控细菌竞争性优势过程中的作用及分子机制

细菌为了在宿主体内生存、繁殖和扩散,必须分泌一些毒力因子。革兰氏阳性细菌(G^(+))具有单一胞浆膜,胞浆膜外是一层由肽聚糖组成的细胞壁;革兰阴性细菌(G^(-))则有两层生物膜,分为内膜(胞浆膜)和外膜,内膜和外膜之间为一层肽聚糖层和外周质间隙。毒力蛋白质的分泌需要跨膜,蛋白质跨膜所依赖的分泌通路称为分泌系统[1]。

gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞转录组的影响

旨在探讨gga-miR-155对马立克病病毒转化的肿瘤细胞系MDCC-MSB1细胞转录组水平变化的影响。本研究以MDCC-MSB1细胞为研究对象,首先将gga-miR-155模拟物及其阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,在转染后48 h提取总RNA,用安捷伦2100核酸检测仪分析各组细胞总RNA的完整性,采用RT-qPCR分析gga-miR-155在MDCC-MSB1细胞中的过表达情况;然后利用高通量测序技术,分析gga-miR-155过表达后MDCC-MSB1细胞转录水平的变化,筛选差异表达基因,结合生物信息学分析预测差异表达基因中gga-miR-155靶mRNA。结果显示:制备了gga-miR-155在MDCC-MSB1细胞过表达样本并构建了高通量测序文库;与对照组相比,gga-miR-155过表达组的差异表达基因有87个,其中,上调表达的基因有47个,下调表达的基因有40个;GO与KEGG分析显示,这些差异表达基因显著富集于代谢和蛋白结合过程/信号通路;通过Targetscan和miRada软件预测下调表达基因中鸡BACH1为gga-miR-155的靶mRNA(P<0.05)。综上,过表达gga-miR-155可调控MDCC-MSB1细胞的转录组水平,差异表达基因中BACH1基因可能在gga-miR-155的作用下参与了MDCC-MSB1细胞的代谢过程。

鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因缺失对小鼠盲肠菌群影响的研究

为探究5'-nucleotidase基因对鼠伤寒沙门菌感染小鼠盲肠菌群的影响,本研究将15只6周龄BALB/c雌鼠随机平均分为对照组、野生株SL1344组和缺失株SL1344Δ5'-nucleotidase组,对照组小鼠灌胃200μL无菌PBS,SL1344组和SL1344Δ5'-nucleotidase组分别灌胃200μL含1.0×10^(6) cfu的菌液。灌胃72 h后剖杀各组小鼠,收集盲肠内容物,采用Illumina Hiseq测序技术测定各组小鼠盲肠样品微生物16S rRNA V3-V4区序列,并比较分析其微生物群落结构、多样性和信号通路富集。结果显示,与对照组相比,SL1344和SL1344Δ5'-nucleotidase组操作分类单元(OTU)以及Alpha多样性指数Chao1和Observed species均下降,Beta多样性分析显示SL1344组部分样品分布偏远,表明SL1344和SL1344Δ5'-nucleotidase感染使小鼠盲肠微生物数目减少,且SL1344对盲肠菌群影响较大。门、纲和属水平微生物种群分析结果显示,与SL1344组相比,SL1344Δ5'-nucleotidase组产短链脂肪酸的有益菌增多而条件致病菌减少,且主要富集在细胞过程、环境信息处理和新陈代谢等信号通路。上述结果首次表明5'-nucleotidase作为毒力基因在鼠伤寒沙门菌导致盲肠菌群失调过程中具有重要作用,本研究为开发更加安全有效的基因工程减毒疫苗奠定基础。

柔红霉素产生菌Streptomyces coeruleorubidus SIPI-1482中dnmV基因的克隆及阻断

从柔红霉素产生菌SIPI-1482菌株基因组DNA中PCR扩增得dnmV及其上游dnmU基因片段。利用同源重组对SIPI-1482菌株的dnmV基因进行基因阻断,得到一株遗传稳定的破坏子。验证了在该菌株中进行同源重组所需交换臂长度。

减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(pYA3493)宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究

目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493电转至上述菌株,构建ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。结果:PCR及测序结果共同表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)构建成功。生物学特性检测结果表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的血清型与亲本株ΔcrpΔcya C78-1和疫苗株C500相同,并能够稳定遗传缺失型asd基因片段;其生长速度略慢于ΔcrpΔcya C78-1,且二者均明显慢于疫苗株C500;其生化特性结果也与ΔcrpΔcya C78-1基本相同。小鼠口服攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的毒力与ΔcrpΔcya C78-1基本相当,但其半数致死量约为疫苗株C500的412倍。结论:上述结果表明,减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)有潜力作为高效表达外源基因的口服活疫苗载体。

柔红霉素产生菌SIPI-1482中dnmV基因功能的阻断及恢复

dnmV基因产物为柔红霉素生物合成途径中TDP-15-脱氧已糖C4酮基还原酶,破坏该基因能阻断柔红糖胺的合成,进而阻断柔红霉素的产生。从天蓝淡红链霉菌(S．coeruleorubidus)SIPI- 1482基因组DNA中经PCR扩增出dnmV及其上游dnmU基因片段,并由此构建了用于阻断dnmV基因的同源重组质粒pYG817,转化SIPI-1482菌株后成功地破坏了dnmV基因,发酵结果显示阻断突变株不再代谢产生柔红霉素,为引入新的基因来改变代谢产物的糖基结构打下了基础。通过导入dnmV基因表达质粒可重建该突变株的生物合成途径,恢复产生柔红霉素,但产量比出发菌株要低。

我国按比例安排残疾人就业地区差异及影响因素分析

按比例安排残疾人就业,是现代社会促进残疾人就业的有效途径。文章利用聚类分析方法对我国按比例安排残疾人就业的地区差异进行了深入分析,发现可将我国内地31个省市分为三大类,各类之间存在显著差异。而地区生产总值、按比例安排残疾人就业政策差异以及地区间的残疾人受教育水平不同是影响按比例安排残疾人就业地区差异的重要因素。

脱氧糖组合生物合成的研究进展

天然活性物质的糖基对其发挥生物活性十分重要。目前已从许多抗生素产生菌中分离出各种糖生物合成基因簇以及糖苷转移酶基因,对其生物合成途径的认识也不断深入。近年的研究结果表明抗生素的糖合成酶和糖苷转移酶具有一定的底物宽泛性。本文在总结脱氧糖生物合成基因及糖苷转移酶基因的发展概况基础上,重点综述了运用组合生物合成技术改造脱氧糖分子结构的研究进展。

我国流通领域法律体系研究

本文认为,完善的法律制度体系是流通市场健康运行的核心,是流通现代化建设顺利进行的保证。我国流通法律制度体系应由流通业态法律制度、流通行为法律制度、物流法律制度、流通监管法律制度和信用法律制度等五个方面构成。而流通业态法律制度属于我国市场主体法范畴,是我国流通法律制度体系中首要的法律制度。为完善新型流通业态的法律规范,保证流通业态健康发展,应制定流通业态发展建设纲要和规划;完善流通业态准入和退出法律制度;制定保护中小流通企业的法律制度;完善外资企业或外国企业投资立法,尤其是世界大型跨国零售业态的法律规定。

按比例安排残疾人就业问题分析与思考

本文从统一比例、人数计算方法、处罚程度、激励措施四个方面分析了我国按比例安排残疾人就业制度存在的问题。在此基础上,结合国外相关经验提出了完善我国按比例安排残疾人就业制度的对策建议。

第三方支付平台的反垄断问题:基于经济学与法学的交叉学科分析

近期,随着全球对新技术条件下一些双边市场经济主体反垄断调查的推进,第三方支付平台作为典型双边市场型经济主体的垄断问题再次引起关注。沿用法学的垄断结构理论框架和以往的单边市场思维进行反垄断分析,可以判断支付平台存在严重的垄断结构,但在其是否实施了垄断行为的判断上则存在较大争议。针对这一问题,运用双边市场理论,在常见的双边单归属模型基础上,引入“单归属因子”,构建接近实际状况的双边部分多归属支付平台模型,从平台定价、社会福利函数分解以及部分多归属下消费者转移成本三个维度进行探究。结合相关数据的分析表明,第三方支付平台的垄断行为倾向或许没有其垄断结构那样突出,而可能会趋于某一稳定状态,但需注意不同平台单归属差异带来的提价空间不同等问题。强调支付平台反垄断的关键不在于平台的市场规模,而在于平台的参与者是否实现了参与平台的多样化,尤其要提倡消费者的多平台参与,鼓励平台差异化发展,从而保护平台参与者的合法利益。

日本粮食流通法制化管理及对我国的启示

经过二十多年的粮食流通体制改革,我国粮食流通体制正在逐步向市场化方向迈进,但在改革过程中,粮食的生产、流通与消费的衔接方式没有大的改变;在粮食收购方面,依然采用原有的国有粮食流通体系,价格手段并没有在粮食流通中发挥市场导向功能,按照市场经济调控和管理的经验及能力明显不足。本文借鉴日本粮食流通管理的经验,认为我国要建立市场调节的粮食流通体制,应放开粮食经营主体,形成经营主体多元化的流通格局;做好粮食总量的控制,健全有效的储备调节体系;实现宏观调控与粮食安全;健全法律体系,以法律的手段管理粮食流通。

基于法律规制视角的价格违法行为分析

价格是市场最活跃的因素,也是政府重点监管的市场要素。不同的社会经济条件下所反映出的价格问题有所不同。近年来,我国市场上的价格违法行为日益突出并呈现出几个较为明显的特点:一是价格违法的行为主体较多是在市场上具有较强优势地位的大型企业,具有较大的市场支配力;二是价格违法行为大多系市场上早已存在,且已经为法律明确禁止的一般性不正当价格行为,并未产生新的违法形式;三是违法行为产生的市场影响较大,严重扰乱了市场秩序,社会反响强烈。从法律规制的视角看,价格违法事件的存在,既有法律规制本身存在的强制力不足的原因,也有市场监管中监管交叉与监管真空造成监管不得力的原因。为进一步完善市场价格法制环境,应在不断完善我国现有价格法律法规体系的同时,重视市场监管机制建设,实现监管主体的多元化与监管手段的多样化,完善信息披露制度等市场监管制度建设。

市场经济下商品流通法制的建立与完善

新中国成立以来,国家对商品流通的管制采取了不同的模式,即计划经济体制下的行政管制模式与市场经济体制下的法制模式,实现了国家对商品流通秩序的维护。我国商品流通相关法律制度,从20世纪80年代以市场经济条件下契约自由为基础的合同法律制度的建立,发展到20世纪90年代《反不正当竞争法》、《产品质量法》、《消费者权益保护法》的应运而生,以及21世纪《反垄断法》的出台。这些法律法规的诞生是市场发展以及商品流通领域发展的迫切需要;是在计划经济向市场经济转轨的过程中发展起来的;是在政府干预程度不断减小的过程中发展起来的。任何一种法律现象或法律问题的产生均与其所处的外部条件相关,且与其所处的背景同构,商品流通法律规制的建立和发展与商品流通产业发展背景同构,是市场经济充分发展的结果,是脱胎于现代市场经济的法制现象,并将随着流通产业的发展而逐步完善、丰富。

基于零售业发展的日本流通相关法律解读

日本政府通过立法来规范流通从业者的开店及经营行为,实现对流通市场的干预。在流通领域的立法,首先是以市场准入为基点,从经济发展和社会需要角度出发,制定了调整大型零售商开店及经营活动的立法,如《百货店法》、《大店法》、《大规模店铺选址法》等;其次是基于市场公正交易,维护公平竞争秩序理念,制定了调整流通经营行为的法律,主要以反垄断法为核心,不正当竞争防止法、不正当赠品种类以及不正当表示防止法等为补充的竞争法体系。这些法律对于促进日本流通业、流通秩序的良性发展产生了积极的影响,本文对日本流通相关法律制度变迁和主要内容进行解读,对其产生的背景和社会价值进行分析,展示其法律与政策的演进所呈现的轨迹和鲜明特征,为我国流通的相关立法提供可参考的借鉴。