3株牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了查明陕西牛场犊牛死亡的病因,本试验对3个牛场送检的犊牛肺脏组织进行细菌分离鉴定和分离株的耐药性分析。共分离到3株病原菌,经形态观察、生化鉴定、16S rRNA基因测序、特异性基因及荚膜血清型鉴定,确定3株菌均为A型多杀性巴氏杆菌,都具有致病性。药敏试验和耐药基因检测结果显示,菌株P1、P2对β-酰胺类、磺胺类、多肽类、喹诺酮类耐药,均携带磺胺类(Sul2、Sul3)、β-酰胺类(bla_(TEM)、bla_(OXA-1))和喹诺酮类(qnrS或qnrA)耐药基因,耐药基因型均与耐药表型相符;菌株P3对供试药均敏感。试验结果为当地防治牛巴氏杆菌病提供参考。

多重PCR方法鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌

为建立鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌(DEC)多重PCR检测方法,对陕西关中奶牛场犊牛粪便中分离的大肠埃希菌进行检测。以EAEC(astA、aggR、pic)、EHEC(stx1、stx2)、EPEC(escV、bfpB)、EIEC(invE)和ETEC(lt、stp、sth)5类DEC中11种毒力基因为目标,uidA基因为阳性对照,建立两体系(体系Ⅰ和Ⅱ)多重PCR检测方法,通过改变引物浓度、退火温度等检测条件进行优化,并对其特异性和灵敏度进行检测。结果显示,体系Ⅰ检测EAEC、EHEC,体系Ⅱ检测EPEC、EIEC、ETEC,除astA引物浓度为0.5μmol/L,其余均为0.3~0.4μmol/L;退火温度以59℃最佳;ETEC的检测下限最低(1.09×10^(3)CFU/mL),其余依次为EHEC(1.27×10^(3) CFU/mL)、EIEC(2.43×10^(3) CFU/mL)、EPEC(5.71×10^(3) CFU/mL)、EAEC(7.98×10^(3) CFU/mL);经验证该方法只对DEC毒力基因产生特异性,而对沙门菌、化脓隐秘杆菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、金黄葡萄球菌不产生特异性条带;应用此方法对183株犊牛腹泻源E.coli进行了检测,共检出17株DEC,其中EAEC 6株、ETEC 4株、EPEC 4株、EHEC 2株、EIEC 1株,经单一PCR验证结果一致。本研究建立的检测5类DEC多重PCR方法可对样品采用两体系、同一PCR反应程序进行检测。该方法的建立为牛源DEC中常见毒力基因的检测及分子流行病学调查提供了方法与借鉴。