单核苷酸多态性核酸试纸快速检测线粒体DNAG11778A位点突变

目的建立一种以单核苷酸多态性核酸试纸快速检测Leber’s遗传性视神经病变(Leber’s hereditary opticneuropathy,LHON)线粒体DNA中G11778A位点突变的新方法。方法与结果32例阳性(突变)和5例阴性(正常)临床血样标本经DNA提取、PCR扩增和单碱基延伸反应处理后,采用单核苷酸多态性核酸试纸条方法对标本的线粒体DNAG11779A位点进行了检测,其符合率为100%。本研究还使用该方法对10例口腔黏膜上皮细胞样本进行了随机检测,结果表明单核苷酸多态性核酸试纸条检测结果和DNA测序结果完全一致。结论该方法简便、快速、准确、经济,适合于各级医院尤其是中小医院LHON的G11778A位点突变的快速筛查,它不仅可以为LHON的临床诊断和鉴别诊断提供有力的依据,而且具有重要的临床推广价值。

CPA恒温扩增技术在口岸蚊媒携带登革病毒检测中的应用

CPA恒温扩增技术为检验检疫基层实验室开展筛选检测和监控提供了有效的技术手段,应用登革病毒核酸快速提纯器和登革病毒RT-恒温扩增-防污染核酸快速诊断试剂盒,对苏州口岸捕获的登革媒介进行核酸提取和病毒检测,结果显示:该试剂盒检测结果与RT-PCR结果完全一致;2种核酸提取方法效率相当,对试验结果无影响;登革病毒核酸快速诊断试剂盒配合核酸快速提纯器完全适用于检疫现场快速检测。

黄瓜绿斑驳花叶病毒核酸试纸条检测技术的建立

以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)阳性样品为研究对象,根据其外壳蛋白基因设计3条引物和2条探针,探针5′端分别用生物素和荧光进行标记;利用这套引物和探针在59℃进行RT-PCR恒温扩增90min,扩增产物用核酸试纸条进行检测。用其它5种同样侵染葫芦科作物的植物病毒作为对照进行试验,以期确定试纸条检测方法的特异性。将梯度稀释后的总RNA作为模板进行检测,以确定该方法的灵敏度。结果表明:该试验建立的核酸试纸条检测方法对CGMMV具有特异性,能够有效区分CGMMV及同样侵染葫芦科作物的黄瓜花叶病毒(CMV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)和小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV);同时该方法也具有较高的灵敏度,可检测低至24.300ng·μL^(-1)的总RNA。因此该试验建立的核酸试纸条法可用于CGMMV的快速检测。

PCR-LDR-核酸试纸条检测法在结核分枝杆菌katG基因315位密码子突变检测中的应用

目的将一项新的分子生物学方法PCR-LDR-核酸检测试纸条法应用于katG基因315位密码子单碱基突变的检测。方法设计与合成用于检测katG基因315位密码子单碱基突变的引物和探针,通过LDR反应,使用核酸检测试纸条检测结果,并与PCR-RFLP法及直接测序法相比较。结果成功区分各突变类型及野生型,与PCR-RFLP法及直接测序法的检测结果呈高度一致性,符合率分别为97.5%和100%。结论将为katG基因315位密码子单碱基突变的检测提供一种快速廉价的分子诊断方法。

我不是一个求安稳的人

一直以来,我都不是一个想过安稳日子的人.青葱岁月 激情燃烧那年,我小学还没毕业,文化大革命就爆发了.我被迫辍学在家,一呆就是三年.16岁,我坐上从老家温州平阳到大兴安岭的火车,来到大东北,跟着铁道兵部队一起修铁路,一年后参与建设佳木斯阿尔木区.后来又去了大庆油田,做采油工.小学都没毕业的我常被人称做“知识分子”,我真的感觉很惭愧.油田的生活,很多人都说苦,可是对于我来说,那段日子却充满了阳光,让我至今念念不忘.大兴安岭中,原始森林一眼望不到边,人烟稀少.

黄瓜细菌性角斑病菌交叉引物恒温扩增检测技术

黄瓜细菌性角斑病是我国黄瓜生产上的重要病害之一,其病原菌为Pseudomonas syringae pv.lachrymans。根据该病原菌甘油醛-3-磷酸脱氢基因保守序列设计引物和探针,建立了交叉引物恒温扩增和核酸试纸条检测技术。菌体DNA检测灵敏度可达0.55 ng,纯菌直接检测灵敏度基本可达到单个细菌。所测试的5株黄瓜细菌性角斑病菌和染病黄瓜叶片均为阳性,其他13株对照菌株均为阴性。该方法灵敏度高,且操作简单,对设备要求低等,适合基层实验室应用。