抑制miR-34a减少高糖代谢记忆所致视网膜色素上皮细胞SIRT1下调和凋亡

目的探讨mi R-34a在视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞高糖"代谢记忆"中的作用及其机制,为糖尿病视网膜病的防治提供新的策略。方法 RPE细胞用高糖培养4d后换用正常糖浓度培养4d,模拟糖尿病高糖代谢记忆模型,用mi R-34a mimic和mi R-34a inhibitor改变高糖代谢记忆RPE细胞内mi R-34a表达,实时定量PCR检测mi R-34a表达水平,免疫细胞化学和Western blot检测组蛋白去乙酰化酶Sirtuin 1(SIRT1)水平,annexin V-PI法流式细胞术检测细胞凋亡。结果实时定量PCR检测显示,高糖培养和代谢记忆可显著升高RPE细胞内mi R-34a表达水平,mi R-34a mimic可进一步显著上调代谢记忆RPE细胞内mi R-34a表达水平,mi R-34a inhibitor可显著下调代谢记忆RPE细胞内mi R-34a水平;免疫细胞化学染色显示,高糖培养和代谢记忆可使RPE细胞内STRT1免疫反应性显著降低,过表达mi R-34a进一步下调代谢记忆RPE细胞内STRT1免疫反应性,而mi R-34a inhibitor则可抑制代谢记忆对RPE细胞内STRT1免疫反应性的下调作用;流式细胞术检测发现,高糖培养和代谢记忆使RPE细胞凋亡明显增加,过表达mi R-34a进一步增加代谢记忆RPE细胞凋亡,而mi R-34a inhibitor则显著抑制代谢记忆RPE细胞凋亡的增加。结论 mi R-34a抑制剂能通过抑制高糖代谢记忆对RPE细胞SIRT1水平的下调和细胞凋亡的增加,部分逆转高糖代谢记忆效应,防治糖尿病视网膜病变。