IL-2和IL-12的单/联合基因治疗对肝癌大鼠体内IL基因表达和T细胞亚群的影响

目的:探讨大鼠诱发性肝癌模型中脾内直接注射IL-2和(或)IL-12基因对血清IL-2和IL-12,以及T细胞活性的影响。方法:全部肝癌大鼠(以二乙基亚硝胺诱发制备)48只分为4组(空载对照组I、L-2单基因治疗组I、L-12单基因治疗组、IL-2/IL-12联合基因治疗组),构建携带IL-2和(或)IL-12基因的逆转录病毒载体及其包装细胞,含IL-2和(或)IL-12基因的包装细胞于不同时间对诱发性肝癌大鼠进行脾内注射转染细胞,比较大鼠血清IL-2和IL-12浓度、T细胞活性和毒性反应。结果:IL单基因治疗后血清IL-2或IL-12明显增高,IL-2/IL-12基因联合治疗组中血清IL较单基因组显著增高(P<0.01),病理示肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多。IL单基因治疗组T细胞活性较对照组显著增高,IL-2/IL-12基因联合组T细胞功能较IL单基因组增强,且持续时间长。结论:脾内直接注射IL-2和(或)IL-12基因可增强T细胞活性,IL基因联合治疗优于IL单基因治疗。

术中B超联合术后纤维胆道镜治疗肝内胆管结石初步观察

肝内胆管结石因彻底取石手术难度大、残石率高以及再手术率高而成为胆道外科难题之一.术中B超(IOUS)技术操作简便,可降低残石率.胆道镜技术的发展,开辟了治疗肝内胆管结石的较理想的方法.我院从2000年8月至2002年9月对26例肝内胆管结石患者进行了IOUS引导、监测取石,术后3个月常规胆道镜取石、清洗胆管,取得了较满意的效果.

奋乃静在人胆汁中的代谢物分析

建立了超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)检测并表征奋乃静在人胆汁中代谢物的方法。T管收集一名精神病患者服用奋乃静后的胆汁样品,经乙腈沉淀蛋白预处理后,采用UPLC/Q-TOF MS进行分析。根据高分辨质谱给出的准确分子质量信息推测可能的分子式,结合MSE功能采集的前体离子和产物离子信息,利用质量缺损过滤(MDF)和generic dealkylation等代谢物鉴定软件筛选代谢物。通过对比原形药物和代谢物的质谱裂解途径,推测可能的代谢物结构。在服药(4mg,b.i.d)后的人胆汁中,共检测到29种奋乃静代谢物,包括I相代谢物16种,II相代谢物13种,其中16种为首次报道的新颖代谢物。奋乃静在人体内的主要代谢途径包括羟基化、脱氢、N-去烷基化、甲基化、硫酸及葡萄糖醛酸结合等,该结果进一步完善了奋乃静在人体内的代谢途径。

活体肝移植供体伦理学思考

器官移植,特别是活体供体器官移植,面临着许多伦理、道德和社会方面的难题。一方面要鼓励人们为挽救他人生命贡献自己的器官,另一方面社会又要求医学技术保证“健康人”的绝对安全。作为活体供体,既冒着生命危险和承受健康损害,又特别关注自身器官是否能有效挽救指定患者的生命。根据我们开展临床活体肝移植的体会,从供体的知情同意权、自愿原则、风险和利益对等、优先考虑供体利益、供体的健康和经济风险、保护精神病人和青少年利益以及捐献者的骄傲感和光荣感等方面探讨伦理学的基本原则。

大鼠肝癌模型脾内转染IL-2和(或)IL-12基因对NK细胞的激活作用

目的 :研究脾内直接注射携带 IL- 2和 (或 ) IL- 1 2基因的逆转录病毒包装细胞株对血 IL- 2和 IL- 1 2以及 NK细胞活性的影响。方法 :构建携带 h IL- 2和 (或 ) m IL- 1 2基因的逆转录病毒载体。将肝癌细胞 CBRH3注入大鼠腹腔 ,形成肿瘤 ,断颈处死 ,剖腹取出肿瘤组织 ,剪碎后接种于 5 0只 Wistar大鼠肝脏一叶 ,制备肝癌模型。模型大鼠随机分为生理盐水对照组、空载体对照组、IL- 1 2基因治疗组、IL- 2基因治疗组及 IL- 2 / IL- 1 2联合基因治疗组 ,每组 1 0只。含 IL- 2和 (或 ) IL- 1 2基因的包装细胞于肝癌接种后 1、3、5、7d进行脾内注射转染脾细胞。 EL ISA法检测大鼠血 IL- 2和 IL- 1 2浓度 ,放射性活度测定法检测 NK细胞活性 ,并进行病理学和免疫组化检查。结果 :IL基因治疗后 3d,IL - 2 / IL - 1 2联合基因组血清 h IL - 2与单基因治疗组相比无显著差异。病理示治疗后肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多。 IL治疗组 NK细胞活性较对照组显著增高 (P<0 .0 1 )。治疗后 3d血清 IL达高峰 ,以后逐步下降。 IL - 2 / IL - 1 2联合基因组较 IL单基因组增高 (P<0 .0 5 )。 结论 :脾内直接注射携带 IL -2和 (或 ) IL - 1 2基因的逆转录包装细胞株可明显增强 NK细胞活性 ,IL联合基因治疗优于

体外鼠肝灌注时胆酸对胆汁、谷氨酸脱氢酶和线粒体膜稳定性的影响(英)

目的 :探讨熊脱氧胆酸 (U DCA)和鹅脱氧胆酸 (CDCA)对胆汁分泌、谷氨酸脱氢酶 (GL DH)和线粒体膜结构的作用 ,以及 U DCA 的线粒体膜保护作用。 方法 :应用离体大鼠肝灌注技术 ,0 .1～ 0 .5 mm ol/ L 胆酸灌注鼠肝 ,测定胆汁分泌及GL DH释放。分离鼠肝线粒体 ,自旋标记物插入线粒体膜 ,研究膜结构变化。结果 :CDCA(0 .1、0 .3、0 .5 m mol/ L)可使胆汁分泌分别减少 12 %、77.2 5 %和 78.98% ,明显增加 GL DH释放达 3、9和 12倍 ,并增加线粒体膜的流动性 ;UDCA在 0 .3、0 .5mm ol/ L 时可增加胆汁分泌达 1.8倍和 1.9倍 ,不影响 GL DH和线粒体膜结构。预灌注 UDCA可部分缓解 CDCA引起的GL DH释放和胆汁分泌减少 ,稳定线粒体膜结构。结论 :CDCA破坏线粒体膜和引起肝功能减退。U DCA可改善胆汁分泌 ,部分阻止 CDCA对线粒体的损害。低浓度 CDCA不损害肝功能。

原发性肝癌细针活检端粒酶活性检测的临床意义

目的:探讨原发性肝癌(HCC)经皮肝穿刺细针活检端粒酶活性检测的临床意义。方法:25例直径1.2～3cm的HCC进行了无水酒精注射治疗(PEIT)。PEIT治疗前及PEIT治疗后1周在B超引导下经皮肝穿刺细针活检,所得微量肝癌组织采用非放射性同位素银染端粒重复序列扩增法(TRAP)行端粒酶活性检测及病理学检查。3例正常肝脏组织及5例肝硬变组织作为对照研究。结果:PEIT治疗前,病理学检查诊断率为80%(20/25),端粒酶活性阳性率为84%(21/25);PEIT治疗后1周,病理学检查未发现肿瘤细胞,3例端粒酶活性阳性(12%),其中1例经手术治疗后临床治愈,2例未手术治疗者1年内复发。其余22例端粒酶转阴的患者1年内未复发。3例正常肝脏组织及5例肝硬变组织端粒酶活性检测均阴性。结论:经皮肝穿刺活检微量肝脏组织端粒酶活性检测可应用于小肝癌的辅助诊断,在原发性肝癌PEIT治疗的疗效评价及预后判断方面具有一定的应用价值。

端粒酶活性及hTERT mRNA表达在鉴别肝脏良恶性病变中的意义

目的:研究端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达在鉴别肝脏良、恶性病变中的意义。方法:采用ELISA-TRAP法检测了130份外科切除肝脏样本及58个肝脏可疑结节的端粒酶活性,RT-PCR法检测hTERTmRNA表达。所有样本均经病理学证实。结果:外科切除的肝细胞癌、肝硬变及慢性肝炎组织端粒酶阳性率分别为85.9%(55/64)、25.0%(8/32)及8.3%(2/24),hTERTmRNA阳性率分别为89.1%(57/64)、25.0%(8/32)及8.3%(2/24),10份正常肝脏组织端粒酶及hTERTmRNA表达阴性。经皮肝穿刺活检的肝细胞癌、胆管细胞癌、局灶性结节性增生、炎性假瘤及腺瘤样增生组织的端粒酶阳性率分别为85.7%(30/35)、100%(4/4)、33.3%(4/12)、25.0%(1/4)及33.3%(1/3),hTERTmRNA阳性率分别为88.6%(31/35)、100%(4/4)、33.3%(4/12)、25.0%(1/4)及33.3%(1/3)。肝脏恶性肿瘤端粒酶及hTERTmRNA阳性率明显高于肝脏良性病变(P<0.01)。结论:经皮肝穿刺活检端粒酶活性及hTERTmRNA检测有助于肝脏良、恶性病变的鉴别诊断。

二氢杨梅素通过抑制ADAM 17影响乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的研究

目的探究二氢杨梅素(DHM)通过抑制ADAM 17对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其发生机制。方法采用DHM对人乳腺癌MCF-7细胞进行干预,MTS分析细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞的凋亡率,Western blot检测干预后细胞内ADAM17、JAK2和STAT3的表达。结果 40 nmol·L^(-1) DHM可显著抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.05),干预24 h、48 h、72 h后,细胞增殖抑制率分别为(19.72±2.23)%、(69.35±2.41)%、(87.29±2.92)%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。40 nmol·L^(-1) DHM可显著促进MCF-7细胞凋亡(P<0.05),干预24 h、48 h、72 h后,细胞凋亡率分别为(5.02±0.13)%、(9.37±0.21)%、(13.25±0.33)%,组间差异有统计学意义(P<0.05);40 nmol·L^(-1) DHM干预后,细胞内ADAM17、JAK2和STAT3表达水平显著降低(P<0.05)。结论 DHM可有效抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖并促进其凋亡,其机制与下调ADAM17、JAK2和STAT3的表达相关。

糖尿病合并肝脓肿的外科诊治

目的 糖尿病患者肝脓肿的诊治经验。方法 对 14例糖尿病合并肝脓肿患者临床资料回顾性分析。结果 糖尿病合并肝脓肿占同期收治肝脓肿的 36 .84 % ,血糖控制不理想、临床表现不典型、脓肿液化不明显是本病的主要特点。本组 3例行 B超引导下穿刺引流 +抗生素冲洗治愈 ,平均住院 31± 1.7d,11例厚壁脓肿行手术脓肿局部切除 ,平均住院 2 0± 1.7d两者比较差异有显著意义 (P<0 .0 1)。结论 糖尿病患者肝脓肿临床不少见 ,多为厚壁脓肿 ,脓肿局部切除术是治疗本病的重要方法且安全有效 。

肝癌合并门脉高压的手术治疗

目的 探讨肝癌合并门静脉高压症施行联合手术的可行性 ,手术方式及手术适应症。方法 筛选 33例施行联合手术治疗的该类病人作回顾性临床分析。结果 术后并发中等量腹水 5例 ,胸腔积液 4例 ,膈下脓肿 1例 ,1例术后 2周死于肝肾衰竭 ,15例出院后均死于肝癌复发 ,无食管胃底曲张静脉破裂出血死亡 ,此死亡的 17例病人平均生存 2 0 .2 9月。另 16例术后至今仍然存活 ,生活均能自理 ,其中 2例术后 4 2月余仍带瘤生存。结论 合理掌握手术适应症和手术方式 ,对肝癌合并门静脉高压症施行联合手术治疗是安全可行的。

白细胞介素12及白细胞介素2对大鼠肝癌的联合基因治疗研究

目的:研究利用小鼠白细胞介素12(mIL-12)和人白细胞介素2(hIL-2)基因对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。方法:构建携带mIL-12和hIL-2基因的逆转录病毒载体,转染包装细胞后对实验性肝癌大鼠进行肝癌局部注射,观察对肝癌细胞的生长抑制作用及其对大鼠的免疫功能变化、毒性反应。结果:携带mIL-12/hIL-2基因的重组逆转录病毒在肿瘤内局部注射明显抑制了肝肿瘤的生长。肝癌接种后第1,3,5,7天治疗组大鼠35d生存率分别为100％,100％,30％,10％。IL-12+IL-2治疗组平均生存时间明显高于生理盐水对照组(P<0.01)、逆转录病毒空载体对照组(P<0.01)、IL-2治疗组(P<0.01)和IL-12治疗组(P<0.05)。治疗后肝癌组织中浸润的淋巴细胞明显增多。结论:肝癌局部注射携带mIL-12和hIL-2基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长,早期治疗优于晚期治疗。

逆转录病毒介导白细胞介素12及白细胞介素2基因联合治疗大鼠肝癌

目的 :研究携带小鼠白细胞介素 12 (m IL- 12 )和人白细胞介素 2 (h IL- 2 )基因的逆转录病毒包装细胞株对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。 方法 :构建携带 m IL- 12基因、h IL- 2基因及 m IL- 12 +h IL- 2基因的逆转录病毒包装细胞PA317- GCIL12 EXPN、PA317- GCXEIL2 PN和 PA317- GCIL12 EIL2 PN,分别与肝癌细胞 CBRH3以 1∶ 1混合接种于大鼠腹腔。观察其生存时间。 结果 :生理盐水对照组、空载体对照组 (PA317- GCXEXPN)和 h IL - 2治疗组的平均生存时间分别为(8.5± 1.2 ) d、(8.3± 0 .9) d和 (16 .7± 1.7) d;m IL - 12治疗组和 m IL - 12 +h IL - 2治疗组均长期存活。逆转录病毒包装细胞与CBRH3的比例为 1∶ 10 0混合时 ,m IL - 12 +h IL - 2治疗组仍能长期存活 ,而 m IL - 12治疗组平均生存时间为 (15 .7± 1.8) d。腹腔接种 CBRH3后 1、3、5、7d,采用 m IL- 12 +h IL- 2治疗后 35 d生存率分别为 10 0 %、10 0 %、30 %、15 %。 结论 :携带 m IL- 12和 h IL - 2基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长 ,早期治疗优于晚期治疗 。

HMGA2基因沉默对结肠癌LS 174T细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨利用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein AT-hook 2,HMGA2)基因,观察对结肠癌LS 174T细胞增殖和侵袭的影响。方法构建HMGA2基因特异性shRNA慢病毒载体,干扰结肠癌LS 174T细胞,设立空白对照组(MOCK)、阴性对照组(Scramble shRNA)和HMGA2 shRNA三组,利用Real-time PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白水平检测shRNA对HMGA2基因的干扰效果;MTT法检测抑制HMGA2基因表达后LS 174T细胞增殖情况;Transwell侵袭实验检测HMGA2基因沉默后LS 174T细胞侵袭能力的变化。结果转染shHMGA2慢病毒后,结肠癌LS 174T细胞中HMGA2 mRNA和蛋白表达均明显受到抑制(P<0.01);MTT法检测各组细胞的增殖能力,shHMGA2组细胞增殖水平明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);敲除HMGA2基因可明显降低LS 174T细胞的侵袭能力,空白对照组和阴性对照组平均穿膜细胞数分别为(124.28±65)/视野和(118.52±15)/视野,shHMGA2组平均穿膜细胞数为(53.35±8.45)/视野(P<0.05)。结论 shHMGA2慢病毒能明显下调HMGA2基因的表达,在体外可有效抑制结肠癌LS 174T细胞的增殖和侵袭。

肝移植的伦理学问题

肝脏移植和其它器官移植一起实现了人类长期以来渴望生命再生的梦想,并成为终末期肝病的有效治疗方法。器官移植也面对许多伦理道德方面的难题。供体,特别是活体器官的摘取,受体的选择等,都受到社会道德观的制约。从伦理道德角度来分析如何制定相关的法律法规,成为当前社会关注的热点。从受体的利益、人体科研的道德规范以及相关制度的伦理学要求等方面,较为详细的阐述肝移植伦理学的基本原则。

老年人肝门部胆管癌的外科治疗(附91例临床回顾分析)

目的报道老年肝门胆管癌病人的手术治疗结果。方法对1996年1月至2010年12月15年间收治老年肝门胆管癌病人91例(年龄65~83岁)的资料并进行分析。按照Bismuth分型:I型17例,Ⅱ型24例,Ⅲa型19例,Ⅲb型22例,Ⅳ型9例。其中外科手术治疗75例;胆道引流16例。根据治疗情况及手术类型分为三组:第1组:根治性切除术(R0切除组)44例;第2组:姑息切除(R1切除组)31例;第3组:胆道引流组(开腹经胆总管胆道内支架置入7例,行经皮肝穿刺引流9例)16例。围手术期死亡3例。死亡原因:肝衰竭2例,肺部感染1例。结果术后1年、2年、3年、5年生存率:R0切除组分别为68.18%、40.90%、31.81%、15.91%,中位生存期为(20±3)个月;R1切除组分别为64.52%、35.48%、22.58%、6.45%,中位生存期为(18±2)个月;胆道引流组分别为56.25%、6.25%、0%、0%,中位生存期为(13±1)个月。R0组与R1组术后生存率相仿(x^2=7.39,P=0.0582);R0组术后生存率优于胆道引流组(x^2=34.45,P=0.0016);R1组术后生存率也优于胆道引流组(x^2=26.18,P=0.0037)。结论认真、仔细、严格的术前准备,合理手术方式,积极处理合并症,老年肝门胆管癌病人可获得良好的手术疗效;手术治疗是老年肝门胆管癌病人的首选方法。本组R0切除组与R1切除组治疗效果明显优于胆道引流组。即便是R1切除,也能获得与R0切除相似的疗效。

肝动脉化疗栓塞术后并发上消化道出血23例临床分析

目的 探讨肝动脉化疗栓塞 (TACE)后并发上消化道出血原因及治疗方法 ,并为预防出血提供依据。方法 回顾总结分析 2 3例TACE后短期内并发上消化道出血患者的临床资料。结果 出血患者多有肝功能严重损害 ;出血以食道胃底静脉曲张破裂为主 ,其次胃、十二指肠粘膜病变及胆道出血。 73 9%出血发生在TACE术后 15d之内 ,2 6 1%出血发生在术后 16～ 30d ;因出血死亡患者占 13 0 %。结论 及时预防及正确治疗对延长肝癌患者生命和提高生存质量有着重要意义。

脾内转染人IL-2与鼠IL-12融合基因对大鼠诱发肝癌的治疗作用

目的研究脾内注射携带人白细胞介素2(hIL-2)与鼠白细胞介素12(mIL1-2)融合基因的逆转录病毒包装细胞株对大鼠诱发肝细胞癌的生长抑制作用。方法构建携带hIL-2和mIL-12融合基因的逆转录病毒载体GCIL1-2EIL-2PN,转染包装细胞PA317后,分别在大鼠肝癌诱发后90天(早期治疗组)及105天(晚期治疗组)进行脾内注射治疗,观察大鼠生存时间及毒性反应。ELISA法检测大鼠血清IL-12和IL-2浓度,放射性活度测定法检测脾脏NK细胞活性。结果IL-12+IL-2联合基因治疗组中,早期治疗及晚期治疗的生存时间分别为188.1±14.2天及168.5±13.6天;IL-12基因治疗组分别为168.2±13.4天及149.1±13.8天(与联合基因治疗组相比,P<0.01);IL-2基因治疗组分别为145.9±11.3天及131.1±10.5天(P<0.01)。3个治疗组中,早期治疗的平均生存时间均长于晚期治疗(P<0.01)。IL-12+IL-2联合基因治疗组中,早期治疗后长期存活率(≥240天)为25%(5/20),治疗后5天肝癌组织中浸润的淋巴细胞明显增多,治疗后2个月血清hIL-2及mIL-12仍维持在较高水平。各基因治疗组NK细胞活性较对照组显著增高(P<0.01)。IL-12+IL-2联合基因组NK细胞活性明显高于单基因治疗组(P<0.01)。结论脾内直接注射携带hIL-2和(或)mIL-12基因的逆转录包装细胞株可显著提高NK细胞的活性,抑制?

冠心病误诊为胆囊炎一例

病人：男性，58岁。2012年5月26日因中上腹隐痛1周，加重1d入院。疼痛主要位于剑突下，不向它处放射。无恶心、呕吐等消化道症状。无发热、黄疸。既往有吸烟、饮酒史多年。体检：中上腹压痛，余无其他阳性体征。行胃镜、心脏超声、24h动态心电图、心肌酶谱、淀粉酶等检查均无异常发现。腹部B超及MRCP提示“胆囊炎”，“肝内外胆管扩张”，诊为“急性胆囊炎”，给予抑酸、解痉、抗感染等治疗后病人病情好转出院。