广州地区无偿献血者戊型肝炎病毒感染流行病学调查

目的调查广州地区无偿献血者的戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)感染情况。方法 2017年4月-2018年4月间收集了5 552名广州血液中心无偿献血者的血液样本,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测抗-HEV IgG抗体(HEV IgG)、抗-HEV IgM抗体(HEV IgM)和HEV抗原(HEV Ag),采用χ~2检验分析年龄、性别、民族、职业和ALT等因素分别与HEV IgG和IgM抗体阳性的相关性,采用多因素Logistic回归分析判辨HEV感染的独立风险因素。结果 HEV IgG、IgM和HEV Ag的阳性率分别为20.05%(1 113/5 552)、0.76%(42/5 552)和0.04%(2/5 552)。年龄和民族是HEV IgG和HEV IgM阳性率的独立风险因素:HEV阳性率随着年龄增长而增大(IgG OR=1.089, 95%CI:1.080-1.098,P<0.001; IgM OR=1.055,95%CI:1.028-1.084,P<0.001);壮族的HEV IgG和IgM阳性率(32.69%, 7.69%)高于汉族(19.89%, 0.70%),差异有统计学意义(IgG OR=2.052, 95%CI:1.103-3.819,P=0.023; IgM OR=12.029, 95%CI:4.067-35.580,P<0.001)。此外,我们还发现职业是HEV IgG阳性率的独立风险因素,学生是阳性率最低的人群。结论广州地区无偿献血者中HEV抗体阳性率较高,且在不同人群中感染情况不同,为输血传播HEV的风险评估提供基础数据。

HCV 3b亚型全长序列测定及基线耐药相关置换的分析

目的探讨二代测序法(NGS)在HCV 3b全长序列及基线耐药相关置换(RAS)检测中的应用。方法从1例2016年7月在广州血液中心献血的献血者(HCV RNA阳性)血浆中提取核酸,经序列非依赖性扩增后,构建测序文库并采用illumina Hiseq进行深度测序,然后通过生物信息学方法分析HCV全长序列、病毒基因分型以及针对直接抗病毒药物(DAA)的基线RAS。结果NGS获得8.4 Gb原始测序数据,序列数(reads)超过56 M。经生物信息学分析获得HCV全长序列,平均测序深度为488007,基因分型结果为3b亚型。病毒氨基酸序列里含有12个RAS,分别是NS3区域的Y56H、Q80K、Q80R、A156G,NS5A区域的M28G、Q/A30G、Q/A30K、L31F、L31M、Y93H,以及NS5B区域的S282T和V321A,其中位于NS5A区域的Q/A30K和L31M属于高丰度RAS(99.16%和98.37%),其余10个RAS丰度较低(<0.5%)。结论NGS用于HCV 3b亚型的全长序列检测和基因分型,最终鉴定出基线RAS,对于HCV 3b的流行病学研究和DAA治疗方案的制订有重要意义。

中国HCV 2a的分子流行病学研究

目的对我国HCV 2a亚型的分子流行病学进行研究。方法收集全国18个省、直辖市HCV感染患者标本776份,逆转录巢式PCR扩增E1基因,通过比对得出HCV基因分型。从NCBI数据库中下载HCV 2a序列作参考序列,与此次的HCV 2a序列进行分析。在Exponential模型下进行进化树构建以及BSP曲线绘制。结果扩增E1基因664份,有8种亚型及HCV 6新亚型:1a、1b、1c、2a、3a、3b、6a、6n、6new的例数分别为10、392、3、127、28、48、44、6、6份。进化树分析显示HCV 2a于20世纪60年代早期分成了两簇,clusterⅠ全是来自中国的序列,主要是来自西北的序列,clusterⅡ包括了来自全球的序列,clusterⅤ、Ⅵ和Ⅶ显示日本与中国形成各自的传播网络,而clusterⅧ和Ⅸ均可以看出是由日本传到中国。BSP曲线显示1992—1996年增长速率明显较快。结论全国范围内,HCV 1b为最主要亚型,2a次之,HCV 2a尤其在我国北方、东北、西北等省、直辖市分布比较高,还是应该引起足够的重视。进化分析显示HCV 2a一部分序列是由日本传到中国。

外周血髓源性抑制细胞水平与丙型肝炎病毒感染的关联

目的探讨外周血髓源性抑制细胞(MDSC)的水平与丙型肝炎病毒(HCV)感染的相关性。方法以2018年2月~2020年9月间在广州血液中心献血的109名无偿献血者为研究对象,根据抗-HCV和HCV RNA检测结果分为慢性感染者(CHC)组(n=48)、自发清除(SC)组(n=29)和健康献血者对照(Control)组(n=32)。从研究对象的新鲜血样分离出外周血单个核细胞(PBMC),采用荧光标记抗体做MDSC细胞表面标志物染色,通过流式细胞术检测单核系(M-MDSC)和多形核系MDSC(PMN-MDSC)的频率;测定血浆HCV RNA、ALT、AST、GGT、TBIL和DBIL等肝功能指标。通过单因素方差分析比较3组之间外周血M-MDSC和PMN-MDSC频率以及肝功能水平的差异;组间两两比较采用Bonferroni法做多重检验校正(校正后的P值以Pc表示)。结果 CHC组、SC组和Control组的M-MDSC频率(%)分别为1.39±0.86 vs 0.85±0.63 vs 0.57±0.23(P<0.01),CHC组明显高于SC组(Pc<0.01)和Control组(Pc<0.05);PMN-MDSC频率(%)0.81±0.54 vs 0.65±0.40 vs 0.62±0.29(P>0.05)。此外,CHC组与Control组的AST(U/L)34.4±19.2 vs 23.0±7.78(Pc<0.05),GGT(U/L)为40.8±31.4 vs 22.3±7.40(Pc<0.01)。结论 HCV慢性感染者外周血M-MDSC水平明显升高,可能与HCV感染的慢性化发展有关。

基因1型和6型HCV CD4 T细胞抗原表位的初步鉴定

目的 研究基因1型(GT1)和6型(GT6)HCV Core蛋白和NS3蛋白的CD4 T细胞抗原表位。方法 合成覆盖GT1和GT6 HCV Core和NS3全长的重叠肽段(16-mer)298条。通过肽段库刺激17例HCV+献血者和7例健康献血者的外周血单个核细胞(PBMC),IFN-γELISPOT测定T细胞应答,初步筛选出21条阳性肽段。再将这些肽段单独刺激20例HCV+和18例健康献血者PBMC。比较2组之间对阳性肽段的应答频率的差异。结果 综合分析肽段库和单条肽段的试验结果,HCV+组对其中5条肽段(GT1 NS3_(1273-1288)和NS3_(1315-1330);GT6 NS3_(1033-1048)、NS3_(1087-1102)和NS3_(1351-1366))刺激的应答频率较高(18.9%~27.0%),且健康对照组无应答或低应答(0%~4.0%),2组之间应答频率有差异(P<0.05)。经序列比对,免疫表位数据库(IEDB)中没有与这5条肽段序列一致的抗原表位。结论 本研究鉴定出HCV GT1和GT6 HCV NS3蛋白新的CD4 T细胞抗原表位,对HCV疫苗的研发具有潜在的应用价值。

广州地区吸食毒品人员丙型肝炎病毒感染的分子流行病学研究

目的了解广州地区男性吸食毒品人群丙型肝炎病毒(hepatitis c virus,HCV)感染率以及分子流行病学。方法收集2011年1~12月广州地区男性吸食毒品人员共418份外周静脉血标本。采用2种ELISA试剂对标本进行抗-HCV检测,双试剂呈反应性的标本进行HCV RNA检测,RNA阳性者通过HCVE1和NS5B基因片段的序列测定获得HCV基因分型;RNA阴性的标本采用重组免疫印迹试验(recombinant immunoblot assay,RIBA)对抗-HCV进行确证。采用SPSS进行统计分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果 418份标本中,HCV RNA阳性118份,HCV RNA阴性、RIBA确证阳性14份,HCV感染率为31.58%(132/418),HCV感染者中RNA阳性率为89.39%(118/132)。HCV感染率与吸毒开始年份(χ2=36.08,P=2.79×10-7)以及吸毒时间的长短(χ2=17.62,P=0.001)有关。93例标本成功获得6种HCV基因分型:1a(6.45%)、1b(5.38%)、3a(7.53%)、3b(23.66%)、6a(55.91%)和6e(1.07%)。结论广州地区男性吸食毒品人员HCV感染率较高;2001年之后开始吸毒的人的HCV感染率显著低于2001年之前开始吸毒的人群,吸毒时间越长,HCV感染率越高;HCV 6a和3b为该人群主要的流行亚型。