去甲斑蝥素抑制紫杉醇诱导的UMUC-3人膀胱癌细胞有丝分裂滑脱

目的:探究有丝分裂滑脱在UMUC-3细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用,以及去甲斑蝥素(NCTD)对有丝分裂滑脱的抑制作用.方法:以UMUC-3膀胱癌细胞为研究对象,通过Giemsa染色、流式细胞术观察UMUC-3细胞有丝分裂相;台盼蓝染色测定细胞活力;Western bloting检测Cdc6、p-Cdk1蛋白表达水平变化;通过TCGA数据库,分析Cdc6表达与膀胱癌病人生存及预后关系.结果:PTX作用后出现多倍体细胞,G2/M期比例呈现先上升后下降趋势,表明细胞出现有丝分裂滑脱.滑脱呈时间依赖性增加;第4天滑脱细胞数超过50%,且细胞活力开始升高.PTX处理第3天加入NCTD,可有效地阻止多倍体细胞的出现,阻滞细胞于G2/M期,并逆转PTX耐药.机制研究发现,滑脱细胞中Cdc6蛋白表达明显上调,Cdk1活性受到抑制;NCTD可下调Cdc6,维持Cdk1活性.TCGA数据分析显示,Cdc6在膀胱癌中高表达,并提示预后不良.结论:Cdc6通过促进有丝分裂滑脱可介导PTX耐药,NCTD可以通过降解Cdc6逆转PTX耐药.