长链非编码RNA H19促进人胃癌MGC-803细胞增殖的实验研究

目的探讨长链非编码RNA H19在胃癌组织及细胞株中的表达情况及其对人胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时定量PCR检测30例胃癌组织及其对应癌旁组织,以及胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901和胃黏膜上皮正常GES-1细胞中H19的表达情况;分析胃癌组织H19表达与临床病理特征(年龄、性别、分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期)的关系。将胃癌MGC-803细胞分别转染H19特异性小干扰RNA(si-H19组)和阴性对照序列(si-NC组),分别采用四甲基偶氮唑蓝法和克隆形成实验检测两组细胞的增殖情况。结果与癌旁组织和黏膜上皮正常细胞相比较,胃癌组织和细胞株中H19的表达水平升高。胃癌组织中H19表达与年龄、性别、分化程度均无关(P>0.05),但与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。si-H19组中H19表达水平低于si-NC组,且细胞活力和细胞克隆数均低于si-NC组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌组织及细胞株中H19呈高表达,下调H19表达能显著抑制胃癌细胞的增殖能力,H19可能参与了胃癌的发生、发展。

沉默长链非编码RNA Meg3损伤小鼠胰岛细胞的胰岛素分泌功能

MEG3是一种长链非编码RNA。已有研究证明,鼠源Meg3参与小鼠诱导多能干细胞、神经元和视网膜的分化过程。最新报道,MEG3在人胰岛β细胞中高表达,但其对维持成年胰岛β细胞的功能尚不清楚。本研究旨在探讨Meg3在小鼠胰岛细胞胰岛素分泌功能中的作用。实时定量PCR揭示,与Balb/c小鼠心、肝、脾、肺、肌、肾等组织/器官比较,Meg3在胰腺组织中高表达。在非糖尿病小鼠发生自发性糖尿病的第8、12周,Meg3在胰岛中的表达水平分别下调24%±8%和29%±9%(P<0.01);而当血糖升高20 mmol/L,小鼠胰岛中Meg3表达下调72%±16%(P<0.01)。在MIN6细胞中采用RNA干扰敲减Meg3的表达,在高糖浓度(20 mmol/L)刺激条件下,胰岛素分泌显著减少。小鼠静脉注射si RNA,结合血糖测定或葡萄糖耐受试验(IPGTT)显示,si-Meg3小鼠血清胰岛素水平显著下降。注射葡萄糖前血糖升高,注射葡萄糖后耐受能力降低;免疫组化分析显示,si-Meg3小鼠胰岛素阳性细胞的面积减少。实验结果提示,Meg3通过参与胰岛素的合成和分泌维持成年小鼠胰岛功能。Meg3表达失调可能参与I型糖尿病(T1DM)发病过程。

lncRNA MEG3在人白色脂肪细胞分化过程及肥胖人群脂肪组织中的表达变化研究

目的探讨长链非编码RNA (long noncoding RNA,lncRNA) MEG3在人白色脂肪前体细胞分化过程及肥胖人群脂肪组织中的表达变化,明确MEG3与体质量指数(body mass index,BMI)的相关性,为阐明MEG3在人脂肪细胞分化过程及肥胖中的作用提供线索。方法通过定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测MEG3在人白色脂肪细胞分化第0、1、3、5、9、12天的表达水平;应用qPCR检测MEG3在肥胖和正常人群中的表达变化;采用Pearson相关分析探讨MEG3与人群BMI、血清三酰甘油及胆固醇的相关性。结果 (1) MEG3在脂肪细胞分化第1、3、5、9、12天的表达量均为增高趋势,尤其在分化早期增长趋势更为明显;(2) MEG3在肥胖人群内脏脂肪组织中的表达量显著增加,差异具有统计学意义(P <0. 05);(3) MEG3与人群BMI呈正相关,相关系数为r=0. 5038 (/PPIA)和r=0. 5497 (/18s)。结论 MEG3在白色脂肪细胞分化及肥胖人群脂肪组织中的差异表达趋势提示,其可能作为人脂肪细胞分化重要调控因素及肥胖防治的潜在靶标。

青蛤不同地域群体的遗传结构分析

采集江苏3个不同地域青蛤(Cyclina sinensis)群体样本,运用RAPD分子标记分析群体的遗传结构特征。结果表明,从20条随机引物中筛选出6条引物可用于遗传学分析;启东群体、东台群体和射阳群体的遗传多样性依次递增,且遗传多样性水平相对较高。不同地域群体间遗传分化程度较低,而群体间的遗传距离表现出随地理距离的增加而增大的趋势。

婴幼儿回应性照护与体重管理

随着对儿童肥胖研究的深入,儿童肥胖的危险因素也逐渐明确,在肥胖的发生过程中,自我调节能力不足导致的问题饮食行为发挥了关键作用。回应性照护是儿童早期发展的养育照护体系五大基本框架之一,在养育过程中根据孩子进食、哭闹、睡眠和活动等不同状态实施回应性地照护可以帮助儿童形成健康的生活习惯及良好的自我调节能力,对儿童的体重状况产生持续的有益影响。但在我国家庭养育中存在着对儿童的回应性照护认识不够的问题,在回应性照护的推广过程中,离不开政策的支持、专业人员的指导,以及家庭和托育机构的落实。该文将对养育过程中能够起到预防肥胖发生作用的回应性照护实施策略进行阐述。

维生素A对孤独症模型大鼠行为学的影响

目的:探讨维生素A(vitamin A,VA)对丙戊酸钠(sodium valproate acid,VPA)诱导的孤独症模型大鼠行为学的影响。方法:对孕12.5 d Wistar大鼠进行单次腹腔注射,注射物分别为VPA(600 mg/kg)和等量生理盐水,将出生雄性子鼠分为3组:对照组(VPA组,n=11)、维生素A治疗组(VPA+VA组,n=12)以及生理盐水组(SAL组,n=11)。从生后第7天开始对VPA+VA组大鼠以50000 U/2.5 kg剂量的VA(豆油溶解)灌胃,其余两组予以等量的豆油灌胃,持续7 d。3组大鼠在生后第21天和第49天时进行眶静脉采血,比较3组血清VA浓度变化;3组大鼠生后第35天开始按序进行开场实验、三室实验、埋珠实验和水迷宫实验,比较3组的行为表现。结果:与SAL组相比,VPA组重复刻板行为增加、社会交往能力下降、自发活动水平增强、空间学习记忆能力减弱(P<0.05);②经VA治疗后,VPA+VA组与VPA组相比,社交能力增强、自发活动水平减轻、空间学习记忆能力增强(P<0.05),重复刻板行为无明显改善(P>0.05)。结论:维生素A能够改善VPA诱导的孤独症模型大鼠的行为学表现。

多肽在肥胖研究中的新趋势

多肽是由氨基酸通过肽键相连而成的一类化学活性物质。生物体内已发现的多肽种类达数万种,具有一定生理活性。多肽作为神经-内分泌系统调控的信号分子,在肥胖及相关并发症中的作用得到广泛揭示,如神经肽Y、脑肠肽、胰高血糖素样肽等。近年,多肽组学的快速发展给多肽研究再添新概念,其中非编码基因短开放阅读框编码、功能肽同源区域、大蛋白分子断裂片段等来源的多肽以及脂肪细胞自身产生的内源性多肽也开始引起研究者的重视。本文就多肽在肥胖中的研究进展和趋势展开综述,为肥胖的预防和治疗提供了新的靶点。

新生儿疾病筛查血片微量DNA提取方法的建立及其在甲基化检测中的应用

目的 建立新生儿疾病筛查血片DNA提取的方法,探索其在甲基化检测中的应用.方法 依据性别随机将新生儿出生时的血片样本20例分为2组：传统法组（10例）、改良试剂盒法组（10例）.从DNA浓度、完整性和是否适应于聚合酶链反应（PCR）研究,对抽提的DNA质量进行评估.进一步对DNA做重亚硫酸盐处理,采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测瘦素（Leptin）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因启动子区域甲基化水平变化.结果 改良试剂盒法抽提的DNA浓度为（5.70 ±0.81） mg/L,显著优于传统法[（3.50±0.45）mg/L]（=2.79,P＜0.05）;生化分析仪分析显示DNA片段完整性更好.琼脂糖凝胶电泳显示可以扩增出有效的18S基因PCR片段,说明抽提的DNA可以用于PCR相关实验研究;MSP结果显示不同血片样本甲基化Leptin、TNF-α基因启动子区域甲基化模式不同.结论 改良试剂盒方法可以简便有效地从干血片中提取DNA,而且抽提的DNA可以较好地用于基因甲基化研究;为从DNA甲基化的角度揭示疾病的发生,提供了新的研究方案和技术方法.

LncRNA KCNQ1OT1在人脂肪细胞分化过程及肥胖人群脂肪组织中的表达

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)KCNQ1OT1在脂肪前体细胞分化过程及肥胖者、脂肪组织中的表达变化,阐明KCNQ1OT1与肥胖的相关性,为进一步解读lncRNA参与肥胖发生发展的作用提供线索。方法用PPIA为内参基因,通过定量PCR,检测KCNQ1OT1于人脂肪前体细胞分化第0、1、3、5、9、12天的表达水平;应用定量PCR检测KCNQ1OT1在肥胖和正常人群白色脂肪组织中的表达变化;采用Pearson相关分析探讨KCNQ1OT1与人群体重指数、血清三酰甘油及总胆固醇的相关性。结果KCNQ1OT1在脂肪前体细胞分化第1、3、5、9和12天的相对表达量分别为(25.89±3.10)、(24.78±5.58)、(15.53±2.11)、(6.75±0.71)、(4.81±0.84),与第0天相比,均呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.01),在分化初始增长尤为明显(第1、3天)。KCNQ1OT1在肥胖人群内脏脂肪组织中的相对表达量为0.79±0.05,较正常人显著增加(P<0.01)。KCNQ1OT1与体重指数呈正相关(r=0.569,P<0.01),与三酰甘油含量呈正相关(r=0.489,P<0.05),与总胆固醇含量呈正相关(r=0.591,P<0.01)。结论KCNQ1OT1在人脂肪前体细胞分化过程中呈增高趋势;在肥胖人群脂肪组织中的表达增高,其表达与体重指数、血清三酰甘油等肥胖相关指标呈正相关,提示KCNQ1OT1可能是影响人脂肪细胞分化的重要调控因子及肥胖防治的潜在靶标。