直接竞争酶联免疫吸附分析法测定氰戊菊酯

采用活性酯法,将氰戊菊酯半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-4-氨基丁酸与载体蛋白共价偶联合成突出氰戊菊酯分子结构特征的人工抗原和包被原。以人工抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,采用(NH4)2SO4分步盐析和DEAE纤维素柱层析法从抗血清中分离纯化对氰戊菊酯具特异性亲和力的抗体,采用活性酯法,以辣根过氧化物酶标记半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-6-氨基己酸。采用固定抗体、氰戊菊酯和酶标半抗原直接竞争结合固相抗体的模式,建立对氰戊菊酯具高特异性的酶联免疫吸附分析方法。在优化条件下,测定氰戊菊酯标样检测的线性浓度范围为0.001～10.0mg/L;检出限0.001mg/L;相对标准偏差(RSD,n=5)为9.19%。小白菜中分别添加0.10和5.0mg/kg氰戊菊酯,直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定,重复6次,回收率分别为83.8%～109%和93.6%～110%;RSD分别为11.7%和7.25%。对实际样品的有效检出限为0.007mg/L。其它常用拟除虫菊酯类杀虫剂(氯氰菊酯、溴氰菊脂、功夫菊酯、醚菊酯、联苯菊酯)不干扰氰戊菊酯的测定。