双调蛋白对支气管肺发育不良模型小鼠肺泡分化的影响

目的:通过构建高氧暴露所致小鼠支气管肺发育不良(BPD)模型,探讨双调蛋白(AREG)表达变化对肺泡分化的影响,为研究BPD肺泡化障碍的发病机制提供实验依据。方法:采用85%的氧浓度构建高氧暴露所致C57BL/6小鼠BPD模型,以小鼠置于同一室内空气中为对照,将小鼠随机分为7 d空气(N7)组、7 d高氧(H7)组、14 d空气(N14)组和14 d高氧(H14)组;在高氧状态下,通过腹腔注射重组小鼠AREG蛋白(rmAREG)构建AREG过表达模型,以腹腔注射PBS为对照,分为PBS组和rmAREG组,每组各5只;通过小鼠鼻内滴注AREG小干扰RNA(siRNA)慢病毒表达载体溶液构建AREG敲低模型,以滴注阴性对照慢病毒表达载体溶液为对照,分为病毒空载(NC)组和AREG敲低(KD)组,每组各5只。应用Western blot技术检测各组小鼠肺组织中AREG、表皮生长因子受体(EGFR)、Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECII)标志物肺泡表面活性蛋白C(SP-C)及Ⅰ型肺泡上皮细胞(AECI)标志物平足蛋白(T1α)的表达情况;应用免疫荧光技术检测小鼠肺组织中SP-C/T1α的荧光共定位情况。结果:(1)Western blot结果显示,与空气组比较,高氧组小鼠肺组织中AREG、EGFR和T1α蛋白表达水平升高(P<0.01),SP-C蛋白表达水平降低(P<0.05),免疫荧光双标显示高氧组中SP-C与T1α共定位细胞较空气组显著减少(P<0.05);(2)在高氧状态下过表达AREG后,Western blot结果显示,与PBS组相比,rmAREG组中AREG和EGFR蛋白表达升高(P<0.01),SP-C和T1α蛋白表达降低(P<0.01),免疫荧光双标显示rmAREG组SP-C与T1α共定位细胞较PBS组显著减少(P<0.01);(3)在高氧状态下敲低AREG后,Western blot结果显示,与NC组比较,KD组中AREG和EGFR蛋白表达降低(P<0.01),SP-C和T1α蛋白表达升高(P<0.01),免疫荧光双标显示KD组SP-C与T1α共定位细胞较NC组显著增多(P<0.01)。结论:AREG参与了BPD模型小鼠肺泡分化障碍的病理生理过程,其机制可能与AREG抑制AECII向AECI分化有关。

白三烯C4及2型固有淋巴细胞在支气管肺发育不良中的变化及意义

目的探讨白三烯C4(LTC4)、2型固有淋巴细胞(ILC2)及相关细胞因子(IL-4、IL-5及IL-13)在小鼠支气管肺发育不良(BPD)肺组织中的动态变化。方法将C57BL/6小鼠随机分为空气组及高氧组,高氧组暴露于85%的氧气中1、7及14 d,复制BPD模型。HE染色观察小鼠肺组织病理改变;流式细胞测量术检测ILC2及CysLT1R+ILC2百分比;ELISA检测LTC4、IL-4、IL-5及IL-13含量;Western blot检测白三烯C4合酶(LTC4S)蛋白表达;RT-qPCR检测LTC4S及半胱氨酸白三烯1型受体(CysLT1R)mRNA表达。结果与空气组相比,高氧组ILC2及CysLT1R+ILC2百分比增加(P<0.05),且CysLT1R mRNA表达增加(P<0.05);高氧组IL-4、IL-5及IL-13表达水平均增加且高于同时间点空气组(P<0.05);高氧组LTC4含量、LTC4S蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.05)。结论在BPD中,LTC4增加并可能通过CysLT1R诱导ILC2及相关细胞因子(IL-4、IL-5及IL-13)增加。