黑曲霉苹果酸酶基因的敲除及其功能研究

通过敲除黑曲霉(Aspergillus niger)菌株ATCC1015的苹果酸酶(Malic enzyme,ME)基因,研究了ME基因敲除对黑曲霉TCA循环相关代谢的影响。利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的转化方法转化黑曲霉,通过同源重组敲除黑曲霉ME基因,筛选ME基因敲除菌株,获得了遗传性能稳定的ME基因敲除菌株。通过发酵实验,对比了野生菌株和ME基因敲除菌株在代谢产物累积方面的差异,发现ME基因敲除菌株的TCA循环中各种有机酸的产量与野生菌株相比没有明显变化。表明,ME基因的敲除对TCA循环没有产生明显影响。

来源于三孢布拉霉的β-胡萝卜素合成基因在耶罗维解脂酵母中的表达

主要探讨来源于三孢布拉霉(Blakeslea trispora)的β-胡萝卜素(1)合成基因carRA和carB在耶罗维解脂酵母(Yarrowia lipolytica)ATCC20362中的表达。将来源于三孢布拉霉或卷枝毛霉(Mucor circinelloides)的1合成基因carRA(或carRP)和carB分别导入耶罗维解脂酵母(YC202),结果显示插入三孢布拉霉carRA和carB基因的工程菌的1产量较高,为410μg/g DCW(细胞干重),而插入卷枝毛霉carRP和carB基因的工程菌的1产量为373μg/g DCW。在插入carRA和carB基因的工程菌中过表达HMG-CoA还原酶基因,该酶酶活力提高了67%,1产量相应提高60%,为656μg/g DCW。结果表明,耶罗维解脂酵母ATCC20362可作为宿主用于1的合成。