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胶体金免疫层析检测牛结核γ干扰素方法的建立
被引量:
3
1
作者
钱琨
尹天燕
+3 位作者
赵士学
黄大卢
金文杰
秦爱建
《中国动物传染病学报》
CAS
2010年第1期45-50,共6页
牛结核病是一种重要的人畜共患病,尽管许多国家已经实施了牛群净化,但其仍然威胁人类的公共卫生健康。本研究利用抗牛γ干扰素特异性单克隆抗体,通过免疫金标记技术,建立了胶体金免疫层析试纸条检测牛γ干扰素的方法。研究结果证明,该...
牛结核病是一种重要的人畜共患病,尽管许多国家已经实施了牛群净化,但其仍然威胁人类的公共卫生健康。本研究利用抗牛γ干扰素特异性单克隆抗体,通过免疫金标记技术,建立了胶体金免疫层析试纸条检测牛γ干扰素的方法。研究结果证明,该方法对牛γ干扰素具有高度特异性,与其它动物干扰素没有交叉反应,检测牛γ干扰素的灵敏度与进口ELISA试剂盒相当。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对田间送检的23份全血经结核特异性刺激后进行检测,结果与进口结核ELISA试剂盒符合率为91.3%。研究表明,本研究建立的牛γ干扰素免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于牛结核的快速特异检测。
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关键词
牛结核病
牛γ干扰素
单克隆抗体
胶体金免疫层析
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职称材料
重组人腺病毒表达的MDV-1 VP22蛋白的不同定位模式
2
作者
张晨飞
秦爱建
+5 位作者
陈娟娟
钱琨
杜静
尹天燕
邵红霞
金文杰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期787-790,共4页
目的:研究MDV-1 CVI988 VP22蛋白的转导机制及细胞定位机理,分析该蛋白在表达过程中细胞定位的影响因素。方法:构建表达VP22蛋白的重组人腺病毒,将重组病毒感染的AD-293细胞裂解产物加至正常的MDBK细胞上,通过免疫荧光(IFA)及Western b...
目的:研究MDV-1 CVI988 VP22蛋白的转导机制及细胞定位机理,分析该蛋白在表达过程中细胞定位的影响因素。方法:构建表达VP22蛋白的重组人腺病毒,将重组病毒感染的AD-293细胞裂解产物加至正常的MDBK细胞上,通过免疫荧光(IFA)及Western blot鉴定VP22的蛋白转导功能。观察感染后不同时间VP22在AD-293细胞上的定位,并与瞬时表达的VP22蛋白定位比较。结果:重组人腺病毒表达的VP22在MDBK细胞上能够进入几乎所有的细胞,说明VP22蛋白具有很强的蛋白转导功能。进一步鉴定VP22的细胞定位发现,在重组病毒感染的AD-293细胞中,VP22首先聚集于细胞核周围,随后以特殊的荧光粒子的形式散在于胞质中,而AD-293细胞中瞬时表达的VP22及MDV感染的CEF中VP22均均匀分布于细胞核。结论:重组人腺病毒表达的VP22蛋白具有很强的蛋白转导功能,不同重组病毒表达的VP22在细胞中的定位模式有所差别。
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关键词
重组腺病毒
MDV-1
VP22
转导
定位
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职称材料
一种提取细胞结合性马立克病毒基因组的新方法及其高效转染
3
作者
卢占军
秦爱建
+1 位作者
郅晓
尹天燕
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2009年第4期28-30,共3页
关键词
病毒基因组
宿主细胞
马立克病毒
转染
密度梯度离心法
病毒DNA
提取
VIRUS
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职称材料
马立克氏病病毒Ⅰ型CVI988/Rispens疫苗株UL13激酶结构域分析及其偏嗜密码子片段在大肠杆菌中的表达
被引量:
1
4
作者
张晨飞
秦爱建
+4 位作者
邓绪方
苏钰文
薛敏
尹天燕
王平平
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期161-167,共7页
【目的】寻找MDV-1 UL13激酶催化中心,并体外表达UL13,以便研究UL13蛋白激酶的功能。【方法】用PCR方法从CVI988疫苗株基因组中扩增UL13基因,利用GENEART(www.gcua.de)分析UL13在大肠杆菌中表达时密码子的偏嗜性;通过DNAstar抗原性分析...
【目的】寻找MDV-1 UL13激酶催化中心,并体外表达UL13,以便研究UL13蛋白激酶的功能。【方法】用PCR方法从CVI988疫苗株基因组中扩增UL13基因,利用GENEART(www.gcua.de)分析UL13在大肠杆菌中表达时密码子的偏嗜性;通过DNAstar抗原性分析确定UL13的高抗原性片段,进行原核表达,并以切胶免疫方法免疫小鼠制备多抗血清;通过NCBI的protein blast功能及Cn3D 4.1在线软件分析UL13保守结构域。【结果】PCR扩增出UL13基因,序列分析结果表明,UL13的259~400aa、431~513aa两个片段抗原性强,且稀有密码子较少;保守结构域分析发现UL13催化中心主要位于152~297氨基酸残基间,且在激酶SubdomainⅦ的保守甘氨酸残基被丝氨酸替代,SubdomainⅧ的保守非极性脯氨酸残基被极性半胱氨酸残基替换。利用大肠杆菌表达的UL13第259~400aa片段免疫小鼠制备出多抗血清能与真核表达产物反应。【结论】MDV-1UL13催化中心主要位于152~297氨基酸残基间,体外表达的基因产物诱导机体产生了抗UL13激酶的特异性抗体。
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关键词
MDV-1
CVI988
UL13
序列分析
密码子偏嗜性
表达
原文传递
题名
胶体金免疫层析检测牛结核γ干扰素方法的建立
被引量:
3
1
作者
钱琨
尹天燕
赵士学
黄大卢
金文杰
秦爱建
机构
扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2010年第1期45-50,共6页
基金
江苏省高校自然科学重大基础研究项目(合07KJA23021)
省研究生科研创新计划(CX09B-317Z)
文摘
牛结核病是一种重要的人畜共患病,尽管许多国家已经实施了牛群净化,但其仍然威胁人类的公共卫生健康。本研究利用抗牛γ干扰素特异性单克隆抗体,通过免疫金标记技术,建立了胶体金免疫层析试纸条检测牛γ干扰素的方法。研究结果证明,该方法对牛γ干扰素具有高度特异性,与其它动物干扰素没有交叉反应,检测牛γ干扰素的灵敏度与进口ELISA试剂盒相当。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对田间送检的23份全血经结核特异性刺激后进行检测,结果与进口结核ELISA试剂盒符合率为91.3%。研究表明,本研究建立的牛γ干扰素免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于牛结核的快速特异检测。
关键词
牛结核病
牛γ干扰素
单克隆抗体
胶体金免疫层析
Keywords
Bovine tuberculosis
bovine INF-γ
monoclonal antibody
gold-immunochromatographic strip
分类号
S858.235.2 [农业科学—临床兽医学]
R392 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
重组人腺病毒表达的MDV-1 VP22蛋白的不同定位模式
2
作者
张晨飞
秦爱建
陈娟娟
钱琨
杜静
尹天燕
邵红霞
金文杰
机构
扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期787-790,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30671569)
全国博士学位论文作者专项资金资助(200256)
教育部博士点基金资助(20061117003)
文摘
目的:研究MDV-1 CVI988 VP22蛋白的转导机制及细胞定位机理,分析该蛋白在表达过程中细胞定位的影响因素。方法:构建表达VP22蛋白的重组人腺病毒,将重组病毒感染的AD-293细胞裂解产物加至正常的MDBK细胞上,通过免疫荧光(IFA)及Western blot鉴定VP22的蛋白转导功能。观察感染后不同时间VP22在AD-293细胞上的定位,并与瞬时表达的VP22蛋白定位比较。结果:重组人腺病毒表达的VP22在MDBK细胞上能够进入几乎所有的细胞,说明VP22蛋白具有很强的蛋白转导功能。进一步鉴定VP22的细胞定位发现,在重组病毒感染的AD-293细胞中,VP22首先聚集于细胞核周围,随后以特殊的荧光粒子的形式散在于胞质中,而AD-293细胞中瞬时表达的VP22及MDV感染的CEF中VP22均均匀分布于细胞核。结论:重组人腺病毒表达的VP22蛋白具有很强的蛋白转导功能,不同重组病毒表达的VP22在细胞中的定位模式有所差别。
关键词
重组腺病毒
MDV-1
VP22
转导
定位
Keywords
recombinant adenovirus
MDV-1
VP22
transduction
localization
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
一种提取细胞结合性马立克病毒基因组的新方法及其高效转染
3
作者
卢占军
秦爱建
郅晓
尹天燕
机构
扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2009年第4期28-30,共3页
基金
国家自然科学基金(30671569)
全国博士学位论文作者专项资金资助(200256)
江苏省博士点基金(20061117003)
关键词
病毒基因组
宿主细胞
马立克病毒
转染
密度梯度离心法
病毒DNA
提取
VIRUS
分类号
S858.31 [农业科学—临床兽医学]
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
马立克氏病病毒Ⅰ型CVI988/Rispens疫苗株UL13激酶结构域分析及其偏嗜密码子片段在大肠杆菌中的表达
被引量:
1
4
作者
张晨飞
秦爱建
邓绪方
苏钰文
薛敏
尹天燕
王平平
机构
扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期161-167,共7页
基金
国家自然科学基金(30671569)
全国博士学位论文作者专项资金资助(200256)
博士点基金(20061117003)~~
文摘
【目的】寻找MDV-1 UL13激酶催化中心,并体外表达UL13,以便研究UL13蛋白激酶的功能。【方法】用PCR方法从CVI988疫苗株基因组中扩增UL13基因,利用GENEART(www.gcua.de)分析UL13在大肠杆菌中表达时密码子的偏嗜性;通过DNAstar抗原性分析确定UL13的高抗原性片段,进行原核表达,并以切胶免疫方法免疫小鼠制备多抗血清;通过NCBI的protein blast功能及Cn3D 4.1在线软件分析UL13保守结构域。【结果】PCR扩增出UL13基因,序列分析结果表明,UL13的259~400aa、431~513aa两个片段抗原性强,且稀有密码子较少;保守结构域分析发现UL13催化中心主要位于152~297氨基酸残基间,且在激酶SubdomainⅦ的保守甘氨酸残基被丝氨酸替代,SubdomainⅧ的保守非极性脯氨酸残基被极性半胱氨酸残基替换。利用大肠杆菌表达的UL13第259~400aa片段免疫小鼠制备出多抗血清能与真核表达产物反应。【结论】MDV-1UL13催化中心主要位于152~297氨基酸残基间,体外表达的基因产物诱导机体产生了抗UL13激酶的特异性抗体。
关键词
MDV-1
CVI988
UL13
序列分析
密码子偏嗜性
表达
Keywords
MDV-1
CVI988
UL13
sequence analysis
codon bias
expression
分类号
S852.5 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
胶体金免疫层析检测牛结核γ干扰素方法的建立
钱琨
尹天燕
赵士学
黄大卢
金文杰
秦爱建
《中国动物传染病学报》
CAS
2010
3
下载PDF
职称材料
2
重组人腺病毒表达的MDV-1 VP22蛋白的不同定位模式
张晨飞
秦爱建
陈娟娟
钱琨
杜静
尹天燕
邵红霞
金文杰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
下载PDF
职称材料
3
一种提取细胞结合性马立克病毒基因组的新方法及其高效转染
卢占军
秦爱建
郅晓
尹天燕
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2009
0
下载PDF
职称材料
4
马立克氏病病毒Ⅰ型CVI988/Rispens疫苗株UL13激酶结构域分析及其偏嗜密码子片段在大肠杆菌中的表达
张晨飞
秦爱建
邓绪方
苏钰文
薛敏
尹天燕
王平平
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
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