草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)对TGF-β1诱导的HepG2细胞上皮间质转化模型的影响

目的研究草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)对TGF-β1诱导肝癌HepG2细胞上皮间质转化(EMT)的影响作用。方法用10μg/L TGF-β1诱导HepG2肝癌细胞株构建肝癌细胞EMT模型。实验分为对照组、模型组与IGBR组3组,对照组用无血清DMEM处理,模型组用10μg/L TGF-β1处理,IGBR组用10μg/L TGF-β1和500 mg/L IGBR联合处理,培养48 h。利用细胞黏附实验、划痕愈合实验和Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。RT-PCR法和Western Blot法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白的mRNA和蛋白表达,Western Blot法检测Slug、Twist1、ZEB1、p-STAT3、STAT3的蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;两组间比较采用成组t检验。结果TGF-β1诱导后,模型组HepG2细胞呈现长梭形改变;与模型组比较,IGBR组细胞黏附率降低,抑制细胞迁移、侵袭能力(P值均<0.05),E-钙黏蛋白的mRNA表达和蛋白表达均增高(P值均<0.05),N-钙黏蛋白和波形蛋白的mRNA表达和蛋白表达均降低(P值均<0.05),Slug、Twist1、ZEB1蛋白表达和p-STAT3蛋白表达均降低(P值均<0.05)。结论IGBR可抑制TGF-β1诱导的HepG2细胞EMT过程,从而减弱HepG2细胞黏附力和细胞迁移、侵袭能力,上调E-钙黏蛋白,下调N-钙黏蛋白和波形蛋白,上调Slug、Twist1、ZEB1、STAT3的蛋白表达,其作用可能通过抑制STAT3通路下调Slug、Twist1、ZEB1等EMT转录因子来实现。

大豆异黄酮抗家兔动脉粥样硬化作用

研究大豆异黄酮(ISF)对动脉粥样硬化家兔血浆脂蛋白抗脂质过氧化作用的影响。高脂饲料喂养法建立家兔动脉粥样硬化模型,连续给药8周后,处死动物,观察主动脉壁横切面病理变化。分离血浆脂蛋白,观察各血浆脂蛋白过氧化脂质(LPO)含量及低密度脂蛋白(LDL)氧化易感性的变化。结果表明:ISF可减轻高脂饲料诱导的动脉粥样硬化家兔主动脉病理变化;显著降低家兔血浆总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CH)水平(P<0.05);显著降低血浆总LPO和脂蛋白LPO含量(P<0.05);在体外进行氧化修饰时,延长LDL氧化延滞时间。提示,ISF可降低动脉粥样硬化家兔LDL胆固醇水平和脂质过氧化程度,增强LDL抗氧化修饰能力,因此能够起到防治动脉粥样硬化症的积极作用。

草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究草苁蓉乙醇提取物(Boschniakia rossica ethanol extract,BREE)对H2O2诱导的Hep G2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:用H2O2诱导Hep G2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyltetrazolium bromide,MTT)比色法检测BREE对Hep G2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdelyde,MDA)水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的核内转移。结果:BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对Hep G2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论:BREE对H2O2所致Hep G2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。

大豆异黄酮对四氯化碳致小鼠肝脏氧化应激和DNA损伤的干预作用

研究大豆异黄酮对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱发的急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激和DNA损伤的干预作用。将50只小鼠随机分为5组,即正常组、模型组、联苯双脂组及大豆异黄酮高、低剂量组。每日给药1次,连续7 d。实验末期,除正常组外,其余组小鼠腹腔注射CCl4建立急性肝损伤模型。分光光度法检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性、白蛋白含量,肝脏超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性及还原型谷胱甘肽、丙二醛含量,蛋白印迹法检测血红素加氧酶-1蛋白表达,电泳法检测小鼠肝细胞DNA损伤情况。结果表明:大豆异黄酮明显降低CCl4致急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性;降低肝组织丙二醛水平;升高肝组织总超氧化物歧化酶、Mn-超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性和还原型谷胱甘肽水平;升高肝线粒体Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性;上调肝组织血红素加氧酶-1蛋白表达;并减少肝细胞DNA损伤程度。提示,大豆异黄酮对CCl4致急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与其降低肝组织氧化应激和DNA损伤作用有关。

草苁蓉水萃取物对脂多糖与D-氨基半乳糖所致小鼠肝脏氧化应激和细胞凋亡的影响

研究草苁蓉水萃取物(BRAF)对脂多糖(LPS)与D-氨基半乳糖(GalN)联合诱发的小鼠急性肝损伤的保护作用。将小鼠按体质量随机分为5组,即正常组、模型组,BRAF高、低剂量组及水飞蓟素(SIL)组(阳性对照组)。每日给药1次,连续7 d。实验末期,除正常组外,其余组小鼠腹腔注射LPS和GalN建立急性肝损伤模型,苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理学变化,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),比色法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及肝脏过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,电泳法检测小鼠肝细胞DNA损伤情况。结果显示,BRAF明显降低GalN和LPS联合诱导的急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性,减轻肝组织病理损伤,降低血清TNF-α水平,降低肝NO和MDA水平,升高肝组织CAT、GPx、GST活性和GSH水平,并降低肝细胞DNA损伤程度。提示:BRAF对GalN和LPS联合诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化活性和抗肝细胞凋亡作用有关。

草苁蓉多糖对过氧化氢损伤HepG2细胞NF-κB表达的影响

目的探讨草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的Hep G2细胞核转录因子(NF)-κB表达的影响。方法以Hep G2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用蛋白印迹法检测NF-κB、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、血红素氧合酶(HO)-1、环氧化酶(COX)-2以及核因子-E2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达。结果 H_2O_2损伤Hep G2细胞后,NF-κB p65和Nrf2蛋白水平升高,i NOS、HO-1、COX-2蛋白水平升高。BRPS处理可降低Hep G2细胞NF-κB p65水平,对Nrf2蛋白水平无显著影响。BRPS同时降低i NOS、HO-1蛋白水平,但对COX-2蛋白水平无影响。结论 BRPS降低H_2O_2损伤的Hep G2细胞i NOS、HO-1蛋白水平,这可能与降低NF-κB活化有关。

大豆皂醇抗脂质过氧化作用的研究

将大豆皂甙水解成大豆皂醇,研究大豆皂醇的体外抗脂质过氧化作用。用T-AOC方法测定化学模拟体系中的总抗氧化能力,用八木变法测定过氧化脂质(LOOH)含量,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量,用分光光度法测定兔红细胞溶血和肝线粒体膨胀程度。结果表明,大豆皂醇的体外总抗氧化能力较强,可抑制血浆及肝组织脂质过氧化,减少红细胞溶血和减轻肝线粒体膨胀程度,说明大豆皂醇具有体外抗脂质过氧化作用。

草苁蓉提取物对小鼠H_(22)肝癌移植瘤血管生成的抑制作用

探讨富含环烯醚萜苷的草苁蓉提取物(IGBR)对H_(22)小鼠移植瘤血管生成的抑制作用。建立H_(22)肝癌皮下移植瘤模型,并用IGBR干预10 d。利用HE染色法观察肿瘤组织病理学改变,利用免疫组化法检测肿瘤组织内微血管密度(MVD),利用蛋白印迹法检测肿瘤组织缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)-2蛋白的表达。与模型组比较,IGBR组肿瘤细胞生长受抑,细胞数目较少,坏死程度较严重。与模型组比较,IGBR组肿瘤组织MVD显著降低;HIF-1α、VEGF和VEGFR-2蛋白的表达显著降低。提示IGBR对H_(22)小鼠移植瘤新生血管生成具有抑制作用,可能与下调肿瘤组织HIF-1α和VEGF的蛋白表达有关。

大豆异黄酮对过氧化氢诱导的肝细胞损伤的保护作用

为探索大豆异黄酮对过氧化氢(H_2O_2)致肝细胞损伤的保护作用,以H_2O_2损伤Chang Liver细胞建立肝细胞氧化应激损伤模型,并以10,20和40 mg·L^(-1)大豆异黄酮进行干预。采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测肝细胞存活率;以微板法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和肝细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及肝细胞还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量;采用蛋白印迹技术检测肝细胞核因子-E2相关因子2(Nrf2)蛋白含量。在10~40 mg·L^(-1)范围内,大豆异黄酮对Chang Liver细胞不显示细胞毒作用。300μmol·L^(-1)H_2O_2刺激后,模型组肝细胞存活率与正常组比较下降,细胞外液中ALT、AST、LDH水平上升,说明Chang Liver细胞损伤显著;而模型组肝细胞中SOD和GSH水平与正常组比较下降,丙二醛水平上升,说明模型组Chang Liver细胞氧化应激增强。大豆异黄酮可剂量依赖性地提高Chang Liver细胞存活率,降低ALT、AST、LDH向细胞外液的释放;降低细胞MDA水平,升高细胞SOD和GSH水平,增高核中Nrf2蛋白水平。研究结果显示大豆异黄酮对H_2O_2致肝细胞氧化应激损伤具有保护作用。

绿茶提取物对糖尿病大鼠糖耐量的影响及机制研究

目的 研究绿茶提取物对糖尿病大鼠糖耐量的影响及其机制。方法 给糖尿病大鼠口服蔗糖或淀粉和绿茶提取物后 ,观察绿茶提取物对糖尿病大鼠糖耐量的影响 ,并用比色法测定绿茶提取物对α-葡萄糖苷酶 (EC 3.2 .1.2 0 )和α -淀粉酶 (EC 3.2 .1.1)的抑制活性。结果 绿茶提取物可明显改善蔗糖或淀粉负荷糖尿病大鼠的血糖水平。在糖尿病相关酶的抑制试验中 ,绿茶提取物显示有较强的α -葡萄糖苷酶抑制活性 ,其α -葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50 )值为 0 .13g/L ;绿茶提取物对α-淀粉酶的抑制活性则较弱 ,浓度为 1g/L时 ,其对α -淀粉酶的抑制率为 2 1%。结论 绿茶提取物能够降低糖尿病大鼠糖负荷血糖 ,可能由其对α -葡萄糖苷酶和α

大豆异黄酮对长春瑞滨化疗兔鳞癌的干预作用

研究大豆异黄酮(ISF)联合长春瑞滨(NVB)化疗对兔VX2移植瘤的抑瘤作用及其可能机制。建立兔VX2肺移植瘤模型,随机分为模型组、ISF组、NVB组和ISF+NVB组。观察各组荷瘤兔的生存情况,计算生命延长度。另建立兔VX2皮下移植瘤模型,观察各组荷瘤兔的肿瘤生长情况,实验结束后,称瘤质量和计算抑瘤率。比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量以及肿瘤组织Caspase-3和Caspase-8活化情况,以DNA Laddering法检测肿瘤细胞DNA断裂情况。结果表明:与模型组比较,ISF和NVB单独用药或二者联合用药能显著延长VX2肺移植瘤兔生存时间,提高其生命延长度。两药单用或联用对VX2皮下移植瘤生长均有明显的抑制作用,且两药联合应用时表现有协同作用。同时,与模型组比较,NVB虽明显增高血清GSH-Px活性,但SOD活性显著降低,MDA水平明显增高。而ISF组和ISF+NVB组均可明显升高血清GST、GSH-Px活性和TAOC水平,降低MDA水平。ISF单独处理或ISF+NVB联合处理可增高肿瘤组织Caspase-3和Caspase-8活化水平,并增高肿瘤细胞DNA断裂。提示ISF对VX2移植瘤具有明显的抑制作用,且对NVB疗效有明显增强作用,其作用可能与其增高机体抗氧化能力和诱导肿瘤细胞凋亡作用有关。

香蕉的自由基清除作用及对血浆脂蛋白脂质过氧化的影响

体外研究新鲜香蕉对活性氧自由基的清除作用,同时给20名健康受试者空腹食用新鲜香蕉,观察其血浆脂蛋白过氧化脂质水平的变化。结果表明,在体外新鲜香蕉对ROO·、O2-·、·OH、H2O2均有清除作用,清除率分别为81.8％、54.5％、72.1％和68.8％;在体内可明显降低人血浆极低密度脂蛋白（VLDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）中过氧化脂质水平。结果提示,香蕉可增强人血浆抗氧化能力,能够起到预防心血管疾病和延缓衰老的积极作用。

大豆异黄酮和皂甙对D-氨基半乳糖所致肝损伤小鼠肝脏抗氧化活力的影响

为研究大豆异黄酮和皂甙对D-氨基半乳糖(GalN)所致小鼠急性肝损伤的保护作用以及对肝脏抗氧化活力的影响,将试验小鼠随机分为正常组、模型组、大豆异黄酮组、大豆皂甙组及联苯双脂组(阳性对照组)。每日给药1次,连续7 d。试验末期,腹腔注射GalN建立小鼠急性肝损伤模型,比色法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)以及肝脏过氧化脂质(LOOH)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性。结果表明:大豆异黄酮和皂甙降低GalN所致急性肝损伤小鼠血清ALT和AST活性,增高血清ALB水平,减少肝LOOH和MDA含量,升高肝组织GSH水平和SOD、CAT、GPx活性。大豆异黄酮和皂甙对GalN所致小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化作用有关。

绿茶多糖抗血浆脂蛋白脂质过氧化作用的研究

研究绿茶多糖体外清除氧自由基与抗脂蛋白氧化作用。采用化学发光法测定绿茶多糖对ROO·、O2-·及OH·的清除作用,采用比色法测定对H2O2的清除作用。给20名健康受试者空腹食用绿茶多糖前和2h后抽取静脉血,采用序列超速离心法分离血浆极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL),并观察各血浆脂蛋白过氧化程度以及氧化易感性的变化。结果表明,绿茶多糖对ROO·、O2-·、OH·及H2O2均有清除作用;食用绿茶多糖后受试者血浆及VLDL、LDL和HDL过氧化脂质水平明显降低;在体外进行氧化修饰时,LDL氧化延滞时间明显延长,提示LDL氧化易感性下降。研究结果提示,绿茶多糖可增强血浆及脂蛋白抗氧化能力,能够起到预防心血管疾病和延缓衰老的积极作用。

大豆异黄酮和皂甙对扑热息痛诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

研究了大豆异黄酮和皂甙对扑热息痛(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。将实验小鼠随机分为正常组、模型组、大豆异黄酮组、大豆皂甙组及联苯双酯组(阳性对照组)。每日给药1次,连续7 d。实验末期,腹腔注射APAP建立急性肝损伤模型,比色法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)以及肝脏诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)、过氧化脂质(LOOH)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果表明,大豆异黄酮和皂甙显著降低APAP诱发的急性肝损伤小鼠血清ALT、AST和ALP活性,增高血清ALB水平,降低肝iNOS活性和NO水平,减少肝LOOH和MDA含量,升高肝组织CAT、GPx、SOD活性和GSH水平。提示,大豆异黄酮和皂甙对APAP诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与抗炎和抗氧化作用有关。

大豆异黄酮苷元抗血浆脂蛋白脂质过氧化作用

对大豆异黄酮苷元的抗脂蛋白脂质过氧化作用进行了研究。从大豆胚轴提取总糖苷后,采用C18反相柱层析法分离大豆异黄酮糖苷,再将其水解制备成异黄酮苷元。12名健康受试者空腹食用大豆异黄酮苷元前后抽取静脉血制备血浆脂蛋白,观察血浆脂蛋白过氧化程度及氧化易感性的变化。结果表明,大豆异黄酮苷元食用后受试者血浆VLDL、LDL和HDL过氧化脂质水平明显降低;在体外进行氧化修饰时,LDL氧化延滞时间明显延长,LDL氧化易感性下降。大豆异黄酮苷元可增强血浆抗氧化能力,尤其增强LDL抗氧化修饰能力,因此能够起到防治心血管疾病的积极作用。

大豆异黄酮苷元对糖尿病大鼠血小板聚集的抑制作用

目的:研究大豆异黄酮苷元对血小板聚集性的影响。方法:普通饲料中添加20g/kg大豆异黄酮苷元混合物,饲喂糖尿病大鼠20周,测定其血小板聚集率。利用ODS柱层析和高效液相色谱技术分离大豆异黄酮苷元,体外观察大豆异黄酮苷元单体对人血小板聚集率的影响。结果:长期食用大豆异黄酮苷元的糖尿病大鼠血小板聚集率显著降低。在人体外血小板聚集实验中,大豆异黄酮苷元均抑制ADP、胶原蛋白和肾上腺素诱导的血小板聚集,其中金雀异黄素为最强,其半抑制浓度(IC50)值分别为0.38,0.30,0.23mmol/L。结论:大豆异黄酮苷元具有血小板聚集抑制效应,在大豆抗血小板聚集中起着重要作用。

大豆异黄酮和皂苷对糖尿病大鼠脂蛋白氧化修饰的抑制作用

脂质过氧化和低密度脂蛋白的氧化修饰在动脉硬化的发生中起着极其重要的作用。大豆异黄酮和皂甙具有多种药理作用。为研究大豆异黄酮和皂甙对糖尿病大鼠血浆及脂蛋白脂质过氧化水平的影响和低密度脂蛋白氧化易感性的变化,从大豆胚轴提取大豆异黄酮和皂甙,高效液相色谱法(HPLC)分析其有效成分。给糖尿病大鼠饲喂添加100gkg-1大豆异黄酮和皂甙的饲料20周,观察血浆脂蛋白过氧化脂质(LPO)含量及氧化易感性的变化。结果表明,饲喂大豆异黄酮和皂甙后糖尿病大鼠血总LPO、LDL及HDL-LPO明显减少;在体外进行氧化修饰时,LDL氧化延滞时间明显延长。说明大豆异黄酮和皂甙可降低脂蛋白过氧化程度和增强LDL抗氧化修饰能力,因此能够起到防治糖尿病及其并发症的积极作用。

氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞PECAM-1基因转录的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)对人血管内皮细胞血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)mRNA表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用铜离子氧化24 h制备Ox-LDL。取HUVEC以100 m g/L Ox-LDL分别孵育0.5、1、1.5、2 h,另取HUVEC分别用100 m g/L LDL和0、50、100、200m g/L Ox-LDL孵育1.5 h,均采用RT-PCR技术检测细胞中PECAM-1基因的转录水平。结果Ox-LDL除正常LDL所含成分外,还含有胆固醇亚油酸酯的过氧化特异斑点X和甲基脂肪酸。Ox-LDL作用0.5 h时PECAM-1mRNA表达水平最低;随时间延长,表达水平逐渐升高,与0.5 h时比较,P<0.05;至2 h时,PECAM-1表达水平有所回落,但与0.5 h时比较,P<0.05。0、50、100、200 m g/L Ox-LDL作用1.5 h,PECAM-1表达水平逐渐升高,以100 m g/L时表达水平最高。100 m g/L LDL作用1.5 h时,PECAM-1表达水平无明显变化。结论Ox-LDL可在转录水平上调血管内皮细胞PECAM-1基因表达,从而促进血管内皮细胞高水平表达PECAM-1。