体外大鼠肝卵圆细胞的长期培养方法

背景:肝卵圆细胞是目前公认的成体肝干/祖细胞,但其体外长期培养时会不可避免地丢失干细胞的活性。目的:探索大鼠肝卵圆细胞体外长期培养的方法。方法:构建2-乙酰胺基芴/部分肝切除肝再生大鼠模型,通过酶消化和Percoll梯度离心分离纯化大鼠异质卵圆细胞并进行免疫染色鉴定,用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外长期培养,后撤去表皮生长因子、白血病抑制因子,通过形态学的观察和分子标志物的检测判断其能否保持干/祖细胞活性。结果与结论:采用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外培养卵圆细胞4个月后,大鼠异质卵圆细胞仍能表达肝细胞标志物ALB、胆管上皮细胞标志物CK-19,经不含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养液继续培养后,卵圆细胞胎肝标志AFP表达量迅速下降。该研究结果表明大鼠肝卵圆细胞在表皮生长因子、白血病抑制因子等培养条件下可长期增殖并保持干细胞活性。

GPC3通过活化Wnt/β-catenin通路促进HepG2生长

目的分析GPC3是否活化Wnt/β-catenin信号通路从而促进肝癌细胞HepG2的生长,以期为进一步基于GPC3的肝癌基因免疫治疗提供依据。方法用携带GPC3基因的质粒转染肝癌细胞HepG2,运用Western blotting检测Wnt/β-catenin信号通路中关键分子和靶基因的表达,判定Wnt/β-catenin信号通路的活化情况,并采用MTT实验对比转染前后HepG2的增殖率。结果GPC3转染过表达的HepG2较未转染组其Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin和靶基因c-myc、cyclin D1的表达明显上升,且转染后24、48、72 h MTT实验表明转染组HepG2细胞增殖较未转染组加快(P<0.05)。结论 GPC3促进肝癌细胞HepG2的生长很可能通过过度活化Wnt/β-catenin信号通路实现。

原发性肝癌患者血清miR-146a、miR-202、miR-148b的表达及意义

目的探讨原发性肝癌患者血清miR-146a、miR-202、miR-148b的表达及临床意义。方法选择2018年2月至2019年2月收治并进行根治性切除手术的78例原发性肝癌患者为观察组,同时选择正常体检者58例为对照组。采用RT-qPCR的方法检测各组血清miR-146a、miR-202和miR-148b的表达水平与原发性肝癌患者临床病理参数的关系,比较乙肝组和非乙肝组患者miR-146a、miR-202和miR-148b的表达水平,并分析miR-146a、miR-202和miR-148b的表达水平间的相关性。结果观察组miR-146a显著高于对照组(P<0.05),而miR-202和miR-148b低于对照组(P<0.05)。肝癌患者血清中miR-146a、miR-202和miR-148b表达水平均与患者肿瘤数目有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、分化程度、TNM分期、转移与否、是否发生肝硬化、HBV感染、血清AFP水平、包膜浸润、肿瘤直径和肿瘤部位均无关(P>0.05)。乙肝组miR-146a显著高于非乙肝患者组(P<0.05),而miR-202和miR-148b低于非乙肝患者组(P<0.05)。Pearson相关性分析,miR-146a的表达水平与miR-202和miR-148b的表达水平呈负相关(r=-0.825,P=0.001;r=-0.768,P=0.012),miR-202的表达水平与miR-148b的表达水平呈正相关(r=-0.705,P=0.010)。结论miR-146a、miR-202和miR-148b在肝癌血清中异常表达,并且与肝癌的发生及发展密切相关,临床上可用于肝细胞癌的诊断和治疗。

家族性腺瘤性息肉病癌变伴肝转移1例报道并文献复习

家族性腺瘤性息肉病(Familial adenomatous polyposis, FAP)是一种临床上少见的常染色体显性遗传性大肠息肉病,目前是公认的癌前病变。该病特征是结直肠上布满了大小不一的腺瘤性息肉,若不及时干预,恶变率可达100%。现将我科收治的1例家族性腺瘤性息肉病癌变伴肝转移患者诊疗情况报告如下,并进行文献复习。1 病例资料患者女,63岁,因“腹部不适3个月,发现胃隆起病变7d”入院。

大鼠肝卵圆细胞GPC3表型亚群分离与鉴定

目的:分离纯化GPC3阳性卵圆细胞亚群,为深入探索原发性肝癌的分子发病机制奠定物质基础。方法:采用2-乙酰氨基芴结合三分之二肝切除术(2-AAF+2/3PH)构建大鼠肝卵圆细胞增殖模型,鉴定卵圆细胞标记蛋白-6(OV-6)、细胞角蛋白19(CK19)及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的表达,通过酶消化结合Percoll梯度离心分离纯化卵圆细胞群,采用间接磁珠阳性技术进一步分选得到GPC3+/-卵圆细胞。结果:2-AAF(15mg/kg)/PH可成功诱导大鼠卵圆细胞增殖,模型组以术后第9~11天达增殖高峰,免疫组化能表达OV-6、CK19及GPC3三种抗原。两步酶消化法结合Percoll密度梯度离心及间接免疫磁珠分选技术所得卵圆细胞亚群OV-6、GPC3呈阳性表达。结论:2-AAF/PH可有效建立大鼠肝卵圆细胞增殖模型;通过间接免疫磁珠分选技术可分离纯化GPC3+卵圆细胞亚群,进一步证实GPC3为卵圆细胞的新型表面抗原。