扶正祛邪法在恶性血液病治疗中的应用

化疗是恶性血液病目前最主要的治疗手段之一,中医药在扶正祛邪法的基础上联合化疗药物进行治疗,可减少化疗不良反应、调节免疫功能,提高患者生活质量,延长生存期。

加味青蒿鳖甲汤对急性髓性白血病完全缓解患者CD34^(+)源树突细胞诱导过程中IL-6的影响

目的探讨加味青蒿鳖甲汤对急性髓性白血病完全缓解患者CD34^(+)源树突细胞(dendritic cell,DC)诱导过程中IL-6的影响。方法以高、中、低剂量的加味青蒿鳖甲汤煎剂灌胃新西兰大白兔制备不同浓度的含药兔血清备用。Ficoll梯度离心法分离骨髓单个核细胞,继予CD34^(+)免疫磁珠提纯得到CD34^(+)细胞。使用Flt-3、IL-3、TPO、SCF等细胞因子体外扩增后,以IFN-α、GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子配以不同浓度的含药兔血清进行体外诱导DC。在DC诱导的第0天、第6天、第9天取上清采用ELISA法检测上清液中IL-6的含量,并在第9天使用流式细胞术检测DC表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a、HLA-DR的表达。结果各含药血清+细胞因子组、正常血清+细胞因子组及单纯细胞因子组中IL-6的含量都随着DC诱导成熟天数的增加而逐渐升高(P<0.05);在同一时间内各含药血清+细胞因子组IL-6浓度均较正常血清+细胞因子组、单纯细胞因子组升高(P<0.05)。CD80、CD83、CD86、CD1a、HLA-DR表面分子在各组中均可表达。CD80表面分子在各组中的表达差异均无统计学意义(P>0.05);CD83、CD86、HLA-DR等的表达在各含药血清+细胞因子组中均较正常血清+细胞因子组、单纯细胞因子组高(P<0.05);含药血清中剂量+细胞因子组与低剂量+细胞因子组中CD1a的表达较高剂量+细胞因子组、正常血清+细胞因子组、单纯细胞因子组高(P<0.05)。结论加味青蒿鳖甲汤能促进急性髓性白血病完全缓解患者CD34+源DC的成熟,且在诱导DC成熟的过程中促进DC分泌IL-6。

基于PP2A/AKT通路探讨扶正祛毒汤对急性髓系白血病-完全缓解患者CD34^(+)细胞源DC激发T细胞的影响

目的:探讨扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病-完全缓解(AML-CR)的可能作用机制。方法:运用血清药理学、Ficoll密度梯度离心、免疫磁珠阳性选择、细胞培养、流式细胞分析、Western Blot和RT-qPCR等技术检测DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达,DC激发T细胞中CTLA-4、PP2A、AKT、p-AKT蛋白和mRNA的表达。结果:扶正祛毒汤含药血清能诱导AML-CR患者CD34^(+)细胞形成典型的DC形态,显著增加DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达(P<0.05),上调DC激发T细胞中PP2A蛋白及mRNA的表达(P<0.05),下调CTLA-4、AKT蛋白及mRNA的表达(P<0.05),下调p-AKT蛋白表达(P<0.05)。结论:扶正祛毒汤治疗AML-CR的作用机制可能与该方能够促使AML-CR患者CD34^(+)细胞源DC成熟,抑制CTLA-4与CD80、CD86的结合,有效激活T细胞,调控PP2A/AKT信号通路,进而杀伤白血病细胞有关。

基于B7-1/2/CD28/CTLA-4通路探讨扶正祛毒汤干预急性髓系白血病完全缓解患者CD34~+细胞诱导成树突细胞激发T细胞的影响

目的探讨扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的可能作用机制。方法12只新西兰大白兔随机分为正常组以及扶正祛毒汤低、中、高剂量组,每组3只。扶正祛毒汤低、中、高剂量组兔分别给予扶正祛毒汤浓缩煎剂5、10、20g/(kg·d)灌胃3d,正常组兔给予等体积蒸馏水灌胃,末次灌胃后心脏取血获得正常血清和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清。将急性髓系白血病完全缓解患者骨髓稀释后分离提纯CD34~+细胞,将扩增后的CD34^(+)细胞分为空白组、细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组。除空白组外,其余各组均添加细胞因子诱导9d成为树突细胞。流式细胞术(FCM)检测各组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达,以及共刺激分子B7-1、B7-2的表达。诱导成熟后的树突细胞分别激发自体和异体T细胞,免疫印迹试验(WB)和RT-qPCR法检测T细胞中特异性表面糖蛋白CD28(CD28)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)蛋白和mRNA的表达。MTT比色法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人髓系白血病细胞株K562的杀伤作用。结果与空白组相比较,细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达明显升高(P<0.05),共刺激分子B7-1、B7-2的表达明显升高(P<0.05);与细胞因子组和正常血清组相比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达明显升高(P<0.05),共刺激分子B7-1、B7-2的表达明显升高(P<0.05)。与空白组、细胞因子组和正常血清组相比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组CD28蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.05),CTLA-4蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05),T细胞对K562细胞的杀伤率明显增加(P<0.05),且杀伤作用随效靶比的增加而增强,但正常人T细胞与患者T细胞对K562细胞的杀伤作用无明显差异(P>0.05)。结论扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的机制可能与该方能够有效促进急性髓系白血病完全缓解患者骨髓CD34^(+)细胞源树突细胞的成熟,从而抑制共刺激分子B7-1、B7-2与CTLA-4结合,且促进B7-1、B7-2与CD28结合,调控B7-1/2/CD28/CTLA-4信号通路有关。

扶正祛毒汤含药血清对急性髓系白血病完全缓解患者CD34^(+)细胞诱导成树突细胞及共刺激分子B7-1、B7-2表达的影响

目的探讨扶正祛毒汤治疗微小残留白血病的可能作用机制。方法12只新西兰大白兔随机分为扶正祛毒汤低、中、高剂量组以及正常组,每组3只。扶正祛毒汤低、中、高剂量组兔分别给予扶正祛毒汤浓缩煎剂5、10、20g/(kg·d)灌胃3天,正常组兔每天给予7.5ml蒸馏水灌胃,末次灌胃后心脏取血获得正常血清和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清。将急性髓系白血病完全缓解患者骨髓稀释后分离提纯CD34细胞,将扩增后的CD34细胞分为空白组、细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组。除空白组外,其余各组均添加细胞因子诱导9天成为树突细胞,诱导前及培养过程中观察细胞形态。9天后检测树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、人白细胞DR抗原(HLA-DR)、B7-1、B7-2表达,检测树突细胞中B7-1、B7-2蛋白及mRNA表达。结果空白组细胞始终未观察到树突状改变;细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组细胞胞体明显增大,细胞表面呈现星状多形性或树枝状典型突起,其中扶正祛毒汤中剂量血清组最为典型。与空白组比较,其余各组树突细胞表面标志物CD1a、CD83、HLA-DR、B7-1、B7-2表达均升高(P<0.05);与细胞因子组和正常血清组比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组DC表面各标志物表达均升高(P<0.05)。与空白组、细胞因子组和正常血清组比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组B7-1和B7-2蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。与扶正祛毒汤中剂量血清组比较,扶正祛毒汤低、高剂量血清组B7-1和B7-2蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05)。结论扶正祛毒汤可促进急性髓系白血病完全缓解患者CD34*细胞源树突细胞的成熟,增加树突细胞中共刺激分子B7-1、B7-2的表达,提高抗原提呈能力,这可能是其治疗微小残留白血病的作用机制之一。

加味青蒿鳖甲汤对急性T淋巴细胞白血病完全缓解患者骨髓CD34^+细胞源树突细胞生物学效应的影响

目的:探讨加味青蒿鳖甲汤对急性T淋巴细胞白血病完全缓解(T-ALL-CR)患者骨髓CD34+细胞源树突细胞(DC)生物学效应的影响。方法:采用血清药理学方法,运用Ficoll密度梯度离心、免疫磁珠阳性选择、细胞培养、流式细胞分析、MTT法检测等技术研究加味青蒿鳖甲汤含药血清对T-ALL-CR患者骨髓CD34+细胞源DC生物学效应的影响。结果:复方中药干预诱导的CD34+细胞能形成典型的DC形态,并高表达CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR;诱导的DC激活T细胞对CEM细胞具有良好的杀伤作用。结论:加味青蒿鳖甲汤能促进T-ALL-CR患者CD34+细胞源DC的成熟,并发挥良好的生物学效应。

扶正透毒祛毒复方含药血清干预T-ALL-CR患者骨髓CD34^+细胞源DC诱导的研究

目的:探讨加味青蒿鳖甲汤对干预诱导的T-ALL-CR患者骨髓CD34^+细胞源树突细胞的影响。方法:分别用高、中、低剂量加味青蒿鳖甲汤煎剂灌胃健康新西兰大白兔制备高、中、低浓度的含药血清;用Ficoll密度梯度离心法分离T-ALL-CR患者骨髓获得骨髓单个核细胞(Bone Marrow Nucleated Cell,BMNC),用CD34^+免疫磁珠阳性选择法提取BMNC中CD34^+细胞;将CD34^+细胞加入含细胞因子的培养体系中培养诱导DC,并分组加入高、中、低剂量含药血清干预诱导,诱导过程中采用倒置显微镜观察细胞形态并拍照记录,9天后收集细胞用流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)检测培养细胞CD80、CD86、CD83、CD1a、HLA-DR的表达以鉴定DC的成熟。结果:DC形态随着培养时间的延长,观察发现CD34^+细胞逐渐聚集,出现不规则突起,形成集落,可见较为典型的DC形态;诱导第9天后CD80、CD86、CD83、CD1a、HLA-DR所有表面抗原在各组中均有较高表达,不同剂量含药血清组的表达大多数优于正常兔血清组及细胞因子组(P<0.05),不同剂量含药兔血清组间的表达无明显差异(P>0.05)。结论:不同剂量加味青蒿鳖甲汤含药血清能促进T-ALL-CR患者CD34^+细胞源DC的成熟,能较高表达DC表面抗原CD83、CD86、CD80、CD1a、HLA-DR。

加味青蒿鳖甲汤含药血清对白血病CEM细胞株增殖及凋亡的研究

目的:观察加味青蒿鳖甲汤含药兔血清对CEM细胞株增殖周期及凋亡的影响。方法:用加味青篙鳖甲汤含药兔血清与CEM细胞共同孵育24 h,用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果:不同剂量复方含药兔血清干预后CEM细胞G0/G1期的比例明显增高,高剂量组与低剂量组比较,有统计学意义(P<0.05)。高、中剂量组的S、G2/M期的比例明显下降,与正常兔血清组比较,有统计学意义(P<0.05)。低剂量组的S期的比例亦较低,与正常兔血清组比较,无统计学意义(P>0.05)。不同剂量复方含药兔血清组PI、SPF与正常兔血清组比较,有统计学意义(P<0.05),以高剂量组最优。不同剂量复方含药兔血清组细胞凋亡率与正常兔血清组比较有统计学意义(P<0.05),高剂量组与低剂量组比较,有统计学意义(P<0.05)。结论:加味青蒿鳖甲汤含药兔血清可抑制CEM细胞的增殖,并提高CEM细胞的凋亡率。

从“肝者,凝血之本”探讨原发免疫性血小板减少症的病机与论治思路

原发免疫性血小板减少症(ITP)归属于中医学“血证”“发斑”“肌衄”等范畴,临床表现以出血为主,治疗上以防止出血为要。肝脏是调节血液运行的重要脏器。明代章潢《图书编》曰:“肝者,凝血之本”,认为肝为凝血之本,主凝血,具有收摄血液、防止出血的功能,为从肝论治ITP提供了良好的理论依据。文章以“肝者,凝血之本”为切入点,论述其内涵主要包括肝气摄血、肝阴凝血和肝主疏泄能防止出血3个方面;ITP病机上以肝之气、血、阴虚为本,虚热、血热、气滞、血瘀为标,可以概括为肝不主凝血;从补肝以止血(益肝气、养肝血、滋肝阴)、凉肝清肝以止血、疏肝化瘀以止血3个方面论治ITP,冀为ITP的防治和诊疗提供新思路。