猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒河南分离株ORF3-7基因克隆与序列分析

参照GenBank中公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲株ATCC VR2332的ORF3～7基因序列,利用Pri mer软件分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的特异性引物,利用RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株分别扩增得到了大小约964、675、718、566和501 bp的片段,并将扩增的片段插入PGEM-T-easy载体进行测序。利用DNAStar软件进行序列分析表明,河南分离株Hn-1/06株属于美洲型,同时将Hn-1/06株ORF3～7基因的核苷酸序列和推导氨基酸序列与ATCC VR2332、LV、Resp、CH-1a、BJ-4、S1、CC-1、HB-1、JX0612、HUB1等分离株进行了同源性分析。

MxA抗病毒蛋白的研究概况

MxA抗病毒蛋白是新发现的由I型干扰素(IFNα/β)诱导产生的分布于细胞质中的78 kD的蛋白质,具有广谱的抗病毒作用。随着对MxA研究的深入,现已清楚,MxA蛋白对多种RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用(Arloric等,1990;Ordien等,2001),而且其水平高低可以作为机体IFN诱导状态的适宜标志。因此开展MxA蛋白研究具有很高的医学价值。

一例笼养蛋鸡痛风病的诊治

鸡痛风病是由于蛋白质代谢障碍或药物中毒等原因导致肾脏受到损伤，进而使尿酸或尿酸盐大量沉积在关节囊、关节软骨、关节周围、胸腹腔及各种脏器表面和其他问质组织中的一种疾病。临床上以病鸡行动迟缓、腿与翅关节肿大、厌食、跛行、衰弱和腹泻等为特征。而且近年来该病的发生有增多的趋势，特别是集约化笼养的蛋鸡，由于饲料生产、饲养管理水平中有许多诱发痛风的因素，因此，痛风是我国养鸡业所面临的重要疾病之一。

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR2332的N蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从PRRSV Hn-1/06株中克隆了大小为372bp的N蛋白基因(EU025136)。将N蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-N,在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为33000的可溶性融合蛋白N-His;经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的29%。将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达91%。用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性。利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法(N-ELISA),并将所建立的N-ELISA与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对200份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为92.7%。结果表明,本试验建立的N-ELISA与IDEXX-ELISA具有同样高的特异性。

猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP3蛋白的原核表达与纯化

根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF3基因序列,利用Primer 5.0软件设计合成了1对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为765 bp的片段,并将扩增的片段插入pTG19-T载体进行测序而获得含有ORF3的阳性克隆pTG19-T-GP3。将此基因亚克隆到原核表达载体pET-32a,经筛选获得了阳性重组质粒pET-GP3,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为45 kDa的融合蛋白GP3-His,纯化后经Western blot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。从而为进一步研究PRRSV次要结构蛋白GP3的免疫特性和功能奠定了基础。

鸡干扰素的研究进展

干扰素自发现以来,它的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节机制逐渐清晰,而现在它的抗病毒机制中信号传导途经及分泌表达的调节正成为研究热点。作者就上述方面作一综述。

假基因的研究现状及展望

在庞大的基因组序列中数量占绝对优势的序列因为不编码蛋白质或RNA产物,但在结构和DNA序列上与相应的活性基因具有相似性,一直被人们认为是假基因。作者对假基因的来源、特性、分布特点、作用机理、功能、假基因与进化及对假基因的展望进行了综述。

整合猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的重组鼠白血病病毒特性

通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒完整的GP5基因并进行了克隆与鉴定。序列测定结果与已经登陆GenBank的EF488048高致病性江西株比对分析表明碱基同源性达98.7%。构建含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染人胚肾细胞293T,48h后收集假病毒上清,超离后通过Western-blot证明GP5蛋白在假型病毒颗粒表面存在,表明GP5蛋白被整合到此假型病毒粒子表面。通过感染293T、Mark-145不同的靶细胞,证实所构建的假型病毒粒子具有感染性。成功构建了具有感染性的MuLV-GP5假病毒体系,为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法。

猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株GP5基因的克隆及在293T细胞中表达

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株GP5基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增PRRSV Hn/06-1分离株GP5基因片段.将扩增片段克隆到真核表达载体pcDNA3.0中,测序后用DNAstar序列分析.构建的pcDNA-GP5重组质粒瞬时转染293T细胞,48 h后用Western-blot检测,证明GP5基因在293T细胞中获得了表达,可与PRRSV阳性血清发生特异性反应.

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）属于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属的单股正链RNA病毒，是目前引起猪繁殖障碍的主要疫病之一，临床上以母猪发热、厌食、早产、流产和产木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸困难和仔猪的高死亡率为特征。

基于支持向量机的变电工程造价预测研究

针对变电工程造价影响因素复杂导致其预测难度大、精度低等问题,通过文献综述等方法确定变电工程造价影响因素,然后根据支持向量机理论,建立变电工程造价预测模型,通过历史工程数据进行模型训练,输入预测工程的指标后可得出预测造价。研究对于变电工程造价投资分析有一定借鉴意义。

基于因子分析的输电线路造价的影响因素研究

以某地区2005～2014年内竣工投产的输电线路工程为研究对象，为挖掘造价变化的潜在因素、解决指标间的共线性，本文利用数值间的相关性，采用因子分析方法对影响因素进行降维，得到相互独立的影响因子，再对互相独立的影响因子进行回归分析，回归系数即为各影响因子对造价的影响程度。最后通过影响因子对单位长度造价与单位容量长度造价影响系数的差异，科学、合理地揭示出输电线路造价水平变化的潜在因素和趋势。通过分析得出工程量是单位长度造价上涨的主要因素、建场费呈快速上升趋势、大截面导线的广泛应用等结论。

基因芯片技术的应用现状及展望

基因芯片技术是20世纪90年代中期发展起来的一项尖端技术,已经成为生命科学及医学界的研究热点之一。作者阐述了基因芯片的基本概念,简述了其主要分类及其在分子生物学、兽医临床中的应用及基因芯片的制备过程,并对其发展前景作了预测及展望。

鸡呼吸道性疾病的鉴别和防治

鸡的呼吸道性疾病在养鸡生产中是比较复杂的,引起发病的病因也很多。有的是由病毒引起的,有的是由细菌和支原体引起的。值得注意的是,无论哪种呼吸道疾病发生,从临床症状和鸡群的表现上都很难确定发生的是哪一种呼吸道疾病，给诊断带来一定的困难。因此，鸡的呼吸道疾病在养鸡生产中是不容忽视的一类疾病。

邹城畜牧业发展现状探析

近年来，邹城市畜牧系统认真贯彻落实各级农业农村工作的决策部署，紧紧围绕畜牧业增效、农民增收的工作目标，以转方式调结构为主线，以深化改革为动力，大力发展现代畜牧业，畜牧业保持了健康与可持续发展的良好势头。2015年底，全市生猪存栏48万头，牛存栏6．4万头，奶牛存栏0．7万头，羊存栏43万只，家禽存养1450万只，全市肉类总产量7．5万t，禽蛋总产量5．8万t；奶类总产量1．3万t。连续7年获得全国生猪调出大县奖励，畜牧业已成为促进全市农村经济发展和农民增收的支柱产业。

海上风力发电塔架直、间接作用的研究状态及展望

随着风电能源的开发利用,海上风力发电塔架近些年来得到了广泛的应用和推广。其对经济发展和环境保护的重要作用,确保海上风力发电塔架结构在复杂荷载条件下安全可靠的运行,具有十分重要的意义。通过对海上风力发电塔架常见的结构形式和基础形式的总结,从风荷载、波浪荷载、地震作用以及多种荷载同时作用四个方面介绍了海上风力发电塔架的研究现状和存在的问题。最后对海上风力发电塔架下一步的研究热点进行了展望。

特高压线路投标报价主要影响因素及其敏感性分析

主要技术经济指标的确定是特高压线路投标工作的重点,但指标调整耗时费力、效率低下,不利于投标工作的深入和创新。本文拟从输电线路工程造价的诸多影响因素中识别出影响投标报价的主要技术指标,结合特高压线路工程实例,基于单因素敏感性分析方法,就主要技术指标对造价指标的影响程度进行数据分析,得出敏感性关键指标、计算敏感度系数,简化技术指标与造价指标的数值关系,达到定量调整关键指标即可满足造价指标的快速合理调整,为今后特高压线路投标工作提供参考和依据。