献血者血小板1-16抗原基因遗传多态性分析及已知HPA型供者数据库的建立

本研究的目的是分析人类血小板抗原(humanplateletantigen,HPA)基因多态性,根据分布频率来判断HPA抗原不配合比率以及抗体产生的机会,确定有临床意义的血小板抗原系统,并建立邯郸地区血小板基因频率数据库和供者库。采用SSPPCR方法对邯郸地区148名随机献血者进行HPA116抗原32个等位基因的检测分析,并与不同人群的分布频率进行比较。结果表明:每个样本均检测到HPA1a、2a、4a14a、16a基因;HPA4a、7a14a、16a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPAb;对于HPA1、2、5、6主要以a/a纯合子为多,a/a基因型频率分别是0.9595、0.8108、0.9865、0.9797,没有b/b纯合子出现。在HPA116中,具有最高杂合度的是HPA15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.2230、0.5270、0.2500;HPA3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.3851、0.5135、0.1014。经χ2检验,结果符合HardyWeinberg遗传平衡定律。邯郸地区随机献血者HPA15系统基因频率与石家庄地区相似(P>0.05);与我国台湾人群进行HPA113、HPA15的比较,HPA1、2、6具有明显的不同(P<0.05),其它相似(P>0.05);与韩国人群进行HPA18的比较,除HPA3具有明显不同外(P<0.05),其余均相似(P>0.05);与美国黑人进行HPA15的比较,HPA1、2、5具有明显的差异(P<0.05);与英国人进行HPA111的比较,HPA1、5具有明显的不同(P<0.05)。结论:北方地区中国人群HPA2、3、5、15系统具有多态性,且HPA抗原分布不配合比率较高,这必然造成免疫暴露的机会增加,提示在临床上可能具有重要的免疫学意义。同时,在此次研究数据的基础上建立了邯郸地区血小板基因频率数据库和血小板已知型供者库。

中国人群中发现的主要弱D型——弱D15个体的分子背景研究

为了探讨中国汉族人群弱D15型个体的Rh血型系统血型血清学表型及分子背景,采用常规血型血清学技术检测RhD抗原弱阳性个体RhD、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)方法同时检测RHD基因和RHCE基因;标本测序分析RHD基因全长编码区序列;同时通过特异性PCR技术测定RHD合子型或RHD基因数目。结果表明,血型血清学试验证实为D抗原弱阳性表型的人群中,有18例为弱D15型(占D抗原弱阳性表型56%),RHD基因全长编码区序列分析发现其第6外显子有一处碱基突变:845G>A,编码区序列其它部分与正常RHD序列相同;检测Rh小因子有3种表型CcEe(2例)、CcEe(2例)、ccEe(14例),分别占弱D15型的11%、11%、78%,血清学检测结果与分子生物学检测结果一致。RHD杂合性试验鉴定显示仅表型为CcEe的2例标本为纯合型RHD+/RHD+,提示基因型为DCe/DcE;其余为杂合型RHD+/RHD-,提示基因型分别是DCe/dce和DcE/dce。结论:弱D15型是中国人群中最主要的弱D型,其中大部分为杂合型。

在中国人群中首次发现1例Rh血型弱D12型

目的分析鉴定1名RhD抗原弱阳性个体的血型血清学表型及分子背景。方法采用常规血型血清学技术检测Rh D、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)方法同时检测RHD基因和RHCE基因,并测序分析RHD基因全长编码区序列;同时通过特异性PCR技术测定RHD合子型或RHD基因数目。结果血型血清学试验证实该标本为D抗原弱阳性表型,与相应Rh抗血清反应为C-c+E+e+;SSP-PCR检测显示RhCcEe基因定型结果与血型血清学完全一致,且有完整的RHD基因;但RHD基因全长编码区序列分析发现该标本的RHD第6外显子存在1处碱基突变:830G>A,编码区序列其它部分与正常RHD序列相同;RHD杂合性试验鉴定显示为RHD+/RHD-杂合型,推测该个体基因型可能为DcE/dce。结论对照国内外文献报道和GenBank记录的基因序列,该个例为在中国人群中首次发现的弱D12型。

华北地区汉族人群Rh(D)抗原弱表现型个体的分子遗传机制研究

目的探讨汉族人群非血缘关系Rh(D)抗原弱阳性个体的血清学表型及分子遗传机制。方法采用常规血清学技术从非血缘关系随机献血者中筛检Rh(D)抗原弱阳性个体(包括弱D型、部分D型),对其进行Rh D、C、c、E、e抗原表型的检测;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法同时检测其RHD基因和RHCE基因;测序分析RHD基因全长编码区序列;同时通过特异性PCR技术测定其RHD合子型。结果血清学试验证实为D抗原弱阳性表型的有32例个体,占无关供者人群比率为0.015%,其中18例个体为弱D15型(845G>A),1例为弱D12型(830G>A),1例为携带DEL等位基因(1227G>A)的弱D型,8例为部分D表型中的DⅥⅢ型(RHD-CE(3-6)-D),1例为部分D表型中的DⅤa(Hus)(RHD-CE(5)-D),3例标本10个外显子检测均未见异常。Rh小因子检测有3种表型CcEe(4例)、Ccee(10例)、ccEe(18例),其血清学与分子生物学检测一致。RHD杂合性试验鉴定显示仅4例标本为纯合型RHD+/RHD+,其余为杂合型RHD+/RHD-。结论汉族人群D抗原弱阳性比率明显少于高加索人,汉族人群D弱表现型中,弱D15型频率最高;部分D的弱表现型中,DⅥⅢ型占主要比例。

化学发光法应用于无偿献血者HBsAg阴性/HBV DNA阳性标本检测及其与核酸检测的关联分析

目的分析化学发光技术(CLIA)检测检测无偿献血者HBsAg-/HBV DNA+标本的感染状态及其与核酸检测技术(NAT)关联性。方法对邯郸市中心血站2018年7—12月采集的49 125(人)份无偿献血者血液标本中,ELISA双试剂检测HBsAg阴性或(和)单试剂检测反应性标本做NAT检测,再对其中HBsAg-/HBV DNA+标本使用CLIA法进一步做乙肝5项血清学检测,据此检测结果分析这些标本的HBV感染状态。结果 HBsAg ELISA双试剂检测阴性或单试剂检测反应性标本的NAT检测HBV DNA阳性检出率0.071%(35/49 125);CLIA检测:隐匿性乙肝(OBI)、HBV窗口期感染和一过性HBV感染的比例分别占74.29%(26/35)、20%(7/35)和5.71%(2/35),其中CT值>39的标本占65.7%(23/35)。在OBI标本中,有65.38%(17/26)标本的抗-HBs滴度<10 IU/mL;抗-HBc滴度(IU/mL):<6.0的标本占15.38%(4/26)、6.0—9.0的标本占50%(13/26)、>9.0的标本占34.62%(9/26)。结论 CLIA法有利于对NAT检出的ELISA HBsAg-/HBV DNA+献血者标本的客观评价;结合CLIA的多种血清学检测指标分析OBI的血清学特征,可为采供血机构血液安全策略提供更充分的科学依据。

118例汉族人群IAT检测RhD阴性个体RHD基因多态性分析

目的观察汉族人群IAT检测RhD阴性个体RHD基因多态性。方法采用常规血清学技术检测RhD、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法同时检测RHD基因和RHCE基因。结果抗球蛋白试验(IAT)证实的118例RhD阴性个体中,PCR-SSP方法检测RHD基因结果有28例Del表型个体(23.7%)。在余下的90份真正RhD阴性标本中,有69份标本(76.7%)RHD基因完全缺失;21份标本带有不表达RHD基因。Del表型个体均带有C抗原,带有不表达RHD基因的真正RhD阴性个体大多表现为RhC阳性。结论汉族人群IAT证实的RhD阴性个体呈现RHD基因结构多态性,不表达RHD基因主要以RHD-CE(2-9)-D2为主。

不规则抗体筛查阳性患者紧急抢救输血20例分析

目的通过回顾性调查不规则抗体筛查阳性患者的紧急抢救输血情况,追踪评价《推荐方案》在临床输血中的应用效果。方法统计邯郸地区2014年6月~2016年5月不规则抗体筛查阳性患者的紧急抢救输血情况,对遵循《推荐方案》的病例,分析评价其应用效果。结果不规则抗体筛查阳性患者,紧急抢救输血病例(以下称"紧急抢救组")20例,输血31次,输注红细胞126 U,平均输注4 U,总有效率77.4%;鉴定出抗体特异性后再输血病例(以下称"正常程序组")83例,共输血137次,有效率86.9%,紧急抢救组和正常程序组的差异无统计学意义(χ~2=1.78,P>0.05)。结论对于不规则抗体筛查阳性患者紧急抢救输血,采用与患者ABO、RhD/C/c/E/e同型且交叉配血试验阴性的供者红细胞输注或O型、RhD/C/c/E/e且交叉配血试验阴性的供者红细胞输注,都是相对安全的;回顾性调查显示不规则抗体筛查阳性患者的紧急抢救组与正常程序组的输注有效性的差异无统计学意义。因此,《推荐方案》是可行且必要的。

特殊情况紧急抢救血小板ABO非同型输注回顾性分析

目的通过回顾性分析特殊情况紧急抢救时单采血小板ABO同型输注与异型输注2组病例,探讨单采血小板ABO非同型输注的必要性和可行性。方法统计邯郸地区8家医院非同型紧急抢救输注单采血小板情况,统计2014年12月-2015年11月单采血小板ABO异型输注率,分析比较单采血小板ABO同型和异型输注2组病例的临床输注指征及输注效果评价。结果共输注单采血小板804袋,ABO同型输注780袋,输注率97.01%,异型输注24袋,输注率2.99%;同型输注有效率75.26%,异型输注有效率41.67%,2组病例输注有效率差别比较有统计学意义。排除非免疫因素,同型输注有效率80.08%,异型输注有效率62.5%,2组病例输注有效率比较差异无统计学意义。结论单采血小板输注有效率ABO异型输注低于ABO同型输注,但排除非免疫因素,2组病例输注无显著性差异,因此,特殊情况紧急抢救时,ABO异型输注是必要的、可行的。

母婴血小板血型不合致新生儿血小板减少症的试验诊断

目的探讨新生儿同种免疫性血小板减少症(NAIT,Neonatal Allo-immune Thrombocytopenic)的试验诊断方法。方法采用常规凝集试验进行红细胞血型系统相关检测,采用MASPAT试剂盒单克隆抗体固相血小板抗体实验进行血小板特异性抗体鉴定,采用酶联免疫(ELISA)方法进行HLA-Ⅰ类抗体检测,同时用PCR-SSP方法进行被检者HPA基因分型。结果虽然母亲为RhD(-)且既往有多次妊娠史,但无Rh系新生儿溶血病血清学表现,母亲HPA基因型为HPA15a/15a,父亲和患儿基因型均为HPA15a/15b。相关试验证实既有HLA-Ⅰ类抗体,也有血小板特异性体抗HPA-15b。结论按照本系列试验方案进行检测,能够对引致NAIT的血小板抗体进行筛查分类,并为NAIT的科学准确诊断及治疗提供依据。

有氧运动通过降低献血者BMI来防治献血反应发生的作用研究

目的探讨有氧运动通过降低献血者BMI减少献血反应的作用机制。方法按照男女1∶1.5比例随机选取2011-2015年在邯郸市中心血站街头采血车上献血但BMI范围在(26.27±0.53)kg/m^2体重超重或肥胖的献血者200例,根据有氧运动干预分为实验组和对照组,每组100例,对照组无偿献血者给予常规干预,实验组无偿献血者在常规干预基础上给予有氧运动3个月。比较实验组和对照组无偿献血者BMI降低情况、献血反应发生情况、采血不足量情况。结果干预前实验组BMI为(26.33±1.96)kg/m^2,对照组为(26.14±1.89)kg/m^2(P>0.05)。干预后实验组BMI为(23.71±2.02)kg/m^2,对照组BMI为(24.87±1.89)kg/m^2,实验组BMI降低情况高于对照组(P﹤0.05);实验组有99例符合献血标准的献血者参加献血,2例出现献血反应,无1例出现采血不足量,对照组有67例符合献血标准的献血者参加献血,有12例出现献血反应,3例出现采血不足量,(P﹤0.05)。结论有氧运动可通过改善献血者的BMI,进而改善献血者血压、心率、血管弹性,有效降低献血反应及采血不足量的发生。

街头初筛ALT对献血者及采供血量的影响

目的探讨开展街头丙氨酸氨基转移酶（ALT）初筛对献血者和采、供血量的影响。方法对邯郸市2009～2012年登记献血的献血者321439人次进行分析，自2010年3月起在街头原有检测项目的基础上增加ALT初筛，对于ALT〉40EU／L的献血者进行献血知识的宣传后延期献血并记录，同时结合站内大生化检测的ALT不合格血液进行汇总。统计分析开展街头初筛ALT前后年度采血量、供血量和报废血量的差异。结果2009年与2010年、2011年、2012年相比采集人数中ALT报废的差异均有统计学意义（P〈0．01）。2010～2012年街头淘汰ALT不合格献血者占总登记人数的12％～14％，ALT街头淘汰和站内检测的总不合格率为14．5％～15．1％，高于2009年的9．84％（P〈0．01）。采血量因开展ALT街头初筛呈现先抑后扬的走势，供血量为持续上升的趋势，报废血量降低（P〈0．01）。结论开展街头初筛AI，T，有利于提高采、供血效率，节约原辅材料，保护血源，具有明显的经济效益和社会效益。

2个新的ABO血型等位基因的发现和序列分析

目的 探讨4例ABO血型正反定型不符标本的遗传背景。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的7个外显子;采用测序方法对7个外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验证实4例标本为ABO亚型,分别为:Bx(1例);ABx(1例);Ax(2例)。基因直接测序发现Bx和ABx在ABO~*B.01基础上1~6外显子未发生改变,仅在B等位基因第7外显子发生了449位核苷酸A>G的突变;2例Ax在ABO~*A1.01基础上1~6外显子未发生改变,仅在A等位基因第7外显子发生了467位核苷酸C>T的突变和798位插入了一个碱基T,以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。结论 研究揭示了4例ABO亚型的分子遗传背景。发现2个新的ABO血型等位基因,即:c.449A>G单基因位点突变,c.467C>T的突变和c.798insT单碱基插入。

乙型肝炎病毒X基因部分区段及其编码氨基酸变异的分析

目的进一步探讨X基因在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者疾病转归中的作用。方法采用巢式PCR(nested-PCR),用型特异性引物对标本进行基因分型,针对基因分型成功的标本,采用巢氏PCR扩增X基因部分区段,对有特异性条带的扩增产物进行序列测定,测序结果用相关软件进行处理,翻译成蛋白质后与文献中已经公布的和疾病相关的变异位点进行比对并进行统计。结果测序成功的41人份标本翻译成氨基酸后,与文献中已报道的与疾病相关的X蛋白变异位点进行比较,发现17个样品的变异与肝细胞癌相关,9例X基因中的插入和缺失变异,会导致X蛋白整个读码框架的改变。结论本实验对HBV感染者的疾病转归进行了初步预测,通过追踪研究可对X基因在致病过程中所起的作用进行更为科学的调查和研究。

血型血清学ABO亚型95例的分子机制研究

目的研究95例中国人群血型血清学ABO亚型个体的分子机制。方法 2013年11月—2017年10月采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行检测;采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）及第6、7外显子基因测序方法进行基因分型,其中部分标本采用了第1—7外显子的测序。结果对血型血清学方法确认的95例（73例先证者,22例家系成员）ABO亚型标本。经PCR-SSP和基因测序检测,73例ABO亚型先证者中检出A亚型基因的个体13例（17.8%）,检出B亚型基因的个体17例（23.3%）,检出B（A）型基因的个体22例（30.1%）,共52例（71.2%,52/73）;22例家系成员中检出ABO亚型基因者18例。先证者中未检出ABO亚型基因者21例（28.8%,21/73）,且21例中5例（6.8%,5/73）检出O基因但表达弱A或弱B抗原;22例家系成员中4例未检出ABO亚型基因,共25例（25/95）。结论 ABO亚型的基因型与表型不完全符合,且同1个血型血清学表型对应不同的基因型,同1个基因型又表现为不同的血型血清学结果。

B(A)血型表型与基因型研究

目的了解河北地区中国人群中B(A)血型的分布特点及其表型与基因型的关联性。方法采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行检测;采用序列特异性引物聚合酶链反应(SSP-PCR)及第6、7外显子基因测序方法进行基因分型,并对表型和基因型的关联性进行分析,并做家系调查。结果经测序确定为B(A)血型的有34例(22例B(A)血型个体,12例家系成员),包括两种B(A)等位基因,分别为B(A)02和B(A)04。22例B(A)血型个体中B(A)02有17(77.3%)例,B(A)04有5(22.7%)例。这两种等位基因所对应的表型包括B(A),AxB,A2B和ABx。结论在河北地区中国人群中,此次主要检测出B(A)血型的两种基因型B(A)02和B(A)04,以B(A)02常见,基因型所对应的表型具有多样性。家系调查证实了B(A)血型的顺式遗传特性。

邯郸地区乙肝病毒感染者的分子流行病学研究

目的探讨邯郸地区乙肝病毒感染者基因型分布及其分子流行病学特征。方法收集到邯郸市区及周边各县体检和住院以及本站无偿献血的乙肝病毒感染者血清或血浆,通过ELISA法测定HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc。特异性引物法和S基因测序相结合的方法测其基因型。对有临床症状且扩增出基因型的样品进行S基因全长扩增,经测序后采用相关软件进行S基因变异和分子进化研究。结果 306个标本中178份分型成功,其中B基因型2份、C基因型176份,未发现其它基因型。对于血清学模式HBsAg、HBeAg、抗-HBc同时阳性的标本分析成功率为90.48%,显著高于其它血清学模式(P<0.05)。扩增出全长S基因27份,各序列之间同源性最高为99.6%,最低为96.7%。核苷酸差异度P i在381—480 nt最低,为0.00 484。在831—930 nt最高,为0.05664。结论邯郸地区乙肝病毒感染者的优势基因型为C型,病毒变异在156—947核苷酸区段呈非随机分布,在分子进化上和日本毒株同在一个分支。