结核分枝杆菌重组Ag85A、Ag85B蛋白免疫原性的研究

目的研究结核分枝杆菌重组Ag85A(rAg85A)和/或Ag85B(rAg85B)蛋白与母牛分枝杆菌菌苗(Mycobacteri-um vaccae,MV)联合免疫的免疫原性。方法 60只雌性BALB/c小鼠随机分为下列6组:(1)阴性对照组:磷酸盐缓冲液(PBS)组,(2)阳性对照组:卡介苗(BCG)组,(3)阳性对照组:MV组,(4)实验组:rAg85A-MV组,(5)实验组:rAg85B-MV组及(6)实验组:rAg85A-rAg85B-MV组。每2周免疫1次,共免疫3次。末次免疫结束后第14天杀鼠,用ELISA法检测血清中IgGI、gG1和IgG2a水平;ELISPOT检测脾脏分泌γ干扰素(IFN-γ)的T淋巴细胞斑点数;流式细胞术检测全血单个核细胞内Th1和Th2百分比。结果三个实验组小鼠血清抗体水平均明显高于三个对照组(P<0.001);三个实验组和两个阳性对照组小鼠的T淋巴细胞斑点数均明显高于阴性对照组(P<0.05);rAg85A-rAg85B-MV组小鼠Th1百分比明显高于其余五组(P<0.001),三个实验组Th1/Th2比值均明显高于三个对照组(P<0.05)。结论结核分枝杆菌rAg85A和rAg85B蛋白均具有很强的免疫原性,与MV联合免疫可增强其Th1型细胞免疫应答。

蛋白芯片联合检测多种结核抗体在结核病诊断中的应用价值

目的设计并建立一种基于结核分支杆菌表面抗原表位的蛋白芯片检测方法,用来进行临床分离样本的检测,探讨其在临床诊断中的应用价值。方法利用生物信息学方法,分析结核分枝杆菌抗原Ag85A,38 kD,CFP10,MPT51,16 kD,TB10.4和ESAT-6的表位,并克隆表达这些优势肽段,用于制备多靶点的蛋白芯片;使用该芯片对300株临床分析样本进行检测,与商品化蛋白芯片结果进行比较,分析其敏感性与特异性。结果在200例临床确诊结核病人中,商品化芯片检测敏感性为35.5%。而本文建立的蛋白芯片检测敏感性为98.5%;在100例临床检测非结核病人中,商品化芯片特异性92%,而本文建立的蛋白芯片特异性97%。结论基于优势表位的蛋白芯片敏感性及特异性均显著高于商品化试剂盒,具有较高的临床诊断价值,可提高检测阳性率。

全血γ-干扰素释放试验对活动性结核病的辅助诊断价值

目的研究全血γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)释放试验对活动性结核病的辅助诊断价值。方法应用化学发光酶免疫分析法分别检测124例结核病患者、60例非结核肺部疾病患者、33名健康对照者全血中IFN-γ水平;绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)确定其诊断活动性结核病的临界值,并评价其对活动性结核病的诊断效能。结果活动性结核病患者组结核特异性IFN-γ的水平为405±306pg/mL,显著高于非结核肺部疾病组(111±127pg/mL,P<0.001)和健康对照组(52.20±28.28pg/mL,P<0.001)。而健康对照组与非结核肺部疾病组差异无统计学意义(P>0.05)。结核特异性IFN-γ诊断结核病的临界值为143pg/mL,其灵敏度和特异性分别为86.3%和77.8%。结论全血γ-干扰素释放试验可能成为活动性结核病辅助诊断指标之一。

呼吸道合胞病毒F蛋白基因片段真核细胞表达纯化及其ELISA建立的研究

目的表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA),为进一步大量表达F基因、构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础。方法逆转录并扩增F基因中的F1片段,连接到载体中,转染真核细胞,诱导并纯化重组F蛋白。将纯化重组F蛋白免疫小鼠制备抗体血清,并建立间接夹心ELISA。通过100份标本应用"金标法"对所建立的方法进行验证。结果成功获得F基因中F1片段的扩增产物,筛选阳性克隆,得到相对分子质量为45000的大量表达蛋白。确定了间接夹心ELISA的最佳反应条件和工作浓度;鼠抗F1IgG最佳质量浓度为3.2μg/mL,样品最佳反应时间为37℃70 min,酶标兔抗鼠IgG最佳工作浓度为1∶6 000。与"金标法"对比,阳性样品的变异系数为3.2%～8.6%,阴性样品的变异系数为5.1%～8.3%,均小于10.0%,表明该方法有良好的重复性。结论构建的重组真核细胞能够大量表达F蛋白,纯化的F蛋白具有很好的免疫原性,制备的抗体血清用于ELISA能够得到准确的检测结果。

实习生实践活动的设计和引导

帮助确立医学生生产实习所要达到的目标，根据目标进行实习生实践活动的设计和引导，让学生参与到整个设计中来，并参与到最后的评估中。

鲁东南地区317681例新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查及基因型调查

目的调查鲁东南地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的患病率及基因突变类型。方法荧光分析法检测2016年5月—2017年12月在鲁东南地区出生的317681例新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性,对检测阳性标本,用多色探针荧光PCR熔解曲线法进行基因分型。结果荧光分析法检测出109例阳性患儿,患病率为0.343‰。男性患儿107例,患病率为0.337‰,女性患儿2例,患病率为0.063‰,男患儿的患病率显著高于女患儿。调查并获得患儿母亲的籍贯和民族:汉族母亲97例;壮族母亲4例;黎族和傣族母亲各2例;景颇族母亲1例;另有3例患儿母亲民族不明。山东籍母亲60例;广西籍母亲12例;云南籍母亲10例;广东籍母亲6例;缅甸、贵州和海南籍母亲各3例;江苏、河南、越南和四川籍母亲各2例;柬埔寨、泰国和福建籍母亲各1例。荧光PCR熔解曲线法检测出66例患儿的10种基因突变类型,分别是c.1388G>A、c.1376G>T、c.487G>A、c.1024C>T、c.95A>G、c.1360C>T、c.871G>A、c.592C>T、c.392G>T和c.1004C>A,其中1388G>A(25.8%)、c.1376G>T(21.2%)和c.487G>A(13.6%)是主要的突变类型。结论鲁东南地区G6PD缺乏症患病率较低,基因突变类型及比例有其自身特点,有必要建立本地区基因突变数据库。

实验室筛查与诊断新技术在遗传代谢病中的应用价值

目的 探讨实验室筛查与诊断新技术在遗传代谢病中的应用价值。方法 选取2019年1月—12月于本院就诊的568例可疑遗传代谢病患儿为研究对象,采集所有可疑患儿的尿液标本并利用气相色谱质谱联合分析技术进行检测,分析其检测结果。结果 568例可疑患儿中确诊遗传代谢病患儿15例,占比2.64%,其中苯丙酮尿症10例,甲基丙二酸血症、希特林蛋白缺乏症和极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症各1例,短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症2例。结论 采用气相色谱质谱联合分析的新技术检测可疑遗传代谢病患儿,具有较好的应用效果,可显著提高疾病筛查率,利于早期诊断及治疗遗传代谢病。

新生儿甲基丙二酸血症的筛查与基因突变分析

目的分析甲基丙二酸血症(methylmalonic acidemia),MMA的临床筛查、基因突变情况。方法采用串联质谱技术对新生儿疾病筛查中心的150 583例新生儿MMA进行筛查,并利用基因测序技术对其基因突变情况进行分析。结果确诊的18例MMA患儿中单纯型MMA 5例,合并型MMA 13例,经治疗后各生化指标均明显改善,8例检测出MMACHC基因突变,1例检测出HCFC1基因突变,1例同时存在这两种基因突变。随访6个月,3例单纯型MMA患儿中2例体格、智能均发育正常。8例合并型MMA患儿中5例生长发育正常,1例出现轻度精神运动发育迟缓。结论液相色谱串联质谱技术有助于早期筛查MMA,MMACHC基因缺陷是导致MMA的主要原因,且患儿预后与维生素B_(12)反应性、疾病类型等有关。

浅谈财务总监在大型企业集团中的作用

我国的财务总监制度．源自政府委派财务总监对固有企业实施监督．财务总监不仅应对企业的财务活动的合法性、真实性、有效性等进行监督．而且还应该对企业会计核算的合规性、真实性、可比性、一致性等进行监督。在实行监督职能的同时也具有一定的管理职能。因此，从普遍意义上讲．财务总监是指由企业的所有者或代表决定的．体现所有者意志的，负责对企业的财务、会计活动进行全面监督与管理的高级管理人员．

保持共产党员的先进性——从基层领导谈起

党的基层领导是党在社会基层中的先锋者,是党全部工作和战斗的骨干,是最贴近广大人民群众的公仆。保持共产党员的先进性,是搞好基层工作的基础,是实践 "三个代表"重要思想的出发点和落脚点。首先,党的基层领导是社会基层中起着先锋模范作用的普通劳动者。一个基层领导的好与坏。

高苯丙氨酸血症患儿贫血情况及影响因素分析

目的调查高苯丙氨酸血症患儿贫血情况并探讨其影响因素。方法选取2013年1月-2018年12月间在我院经新生儿疾病筛查确诊并正规治疗的苯丙酮尿症患儿73名,进行血常规检测,统计其血红蛋白结果。设计调查问卷对其监护人进行问卷调查,主要指标有患儿居住地、父母文化程度、母乳喂养停止时间以及添加特食时间等资料。结果苯丙酮尿症儿童贫血率为10.95%,调查发现贫血情况与患儿居住地,母亲文化程度,母乳喂养停止时间及添加辅食时间有相关性。结论要降低苯丙酮尿症患儿贫血的发生率,首先大力提倡坚持母乳喂养,其次要尽早添加特食,改变患儿的饮食习惯,做好苯丙酮尿症知识的宣教,对出现贫血症状的患儿做到早发现早干预。