AFLP法在辣椒胞质雄性不育恢复系选育中的应用

辣椒具有显著的杂种优势,利用细胞质雄性不育(CMS)三系制种是辣椒杂种优势利用的重要途径。为了丰富辣椒CMS的基础理论,加快辣椒 CMS恢复系的选育步伐,本研究以湖南省蔬菜研究所选育的辣椒CMS系 9704A、恢复系8001及其组合9704A×8001 F2群体24株植株为材料,利用 AFLP法和群分法(BSA)进行恢复基因定位,找到一个与辣椒CMS恢复系 8001中的恢复基因紧密连锁的分子标记OPL09-170。

烟草种质资源遗传多样性及亲缘关系的AFLP分析

【目的】揭示烟草种质资源的遗传多样性及亲缘关系。【方法】选用4对AFLP选择性扩增引物(EcoRI+3/MseI+3)对48份烟草材料的基因组DNA进行选择性扩增。【结果】共获得321条扩增带,其中174条具有多态性,平均多态检出率为54.2%。对AFLP扩增结果采用UPGMA法进行聚类分析,可以将48份烟草资源分为两大类群,即黄花烟草群和普通烟草群,普通烟草可进一步分为4组;48份材料的遗传距离变幅在1.41～11.0之间。【结论】AFLP标记技术能较好地从分子水平揭示中国烟草种质资源的遗传背景、亲缘关系及演化规律。

烟草AFLP分析体系的建立与优化

以10份烟草种质资源为试材,对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、MseⅠ/EcoRⅠ以及T4DNA连接酶的浓度、反应时间和反应温度、以及其反应体系的组成等影响因素进行了研究。建立了一种适于烟草AFLP银染技术的优化体系。该体系中各优化因素为模板DNA的用量为400ng,酶切体系中MseⅠ和EcoRⅠ各加入4U,T4DNA连接酶加入2.8U,采用酶切与连接在同一体系中一步完成,其酶切连接温度为37℃,反应时间为7h。并对预扩增、选择性扩增和银染的效果进行了检测,以引物E-ACT/M-CAC构建了烟草种质资源的AFLP指纹图谱,该图谱扩增带多,多态性强,且质量好。

烟草RAPD反应体系的建立与优化研究

以烤烟品种为材料,研究了烟草RAPD分析过程中的影响因素,包括模板浓度、Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、循环次数、退火温度等,建立了适于烟草RAPD分析的PCR反应体系:即在25μl反应体系中,模板用量为40ng;引物浓度为0.4μM;Mg2+浓度为2.5mM;dNTP浓度为0.2mM;TaqDNA聚合酶用量为1U。扩增程序为94℃预变性5min;然后94℃变性1min,38℃复性1min,72℃延伸1.5min,39个循环;最后72℃延伸5min。

烟草种质资源AFLP分析中DNA模板的制备

采用CTAB法和SDS法提取烟草基因组DNA,经检测表明,CTAB法提取的基因组DNA纯度高于SDS法;CTAB法提取的DNA,其OD260/OD280值均高于1.8,相对分子量23kb左右,且能完全被EcoRⅠ和MseⅠ酶切消化,并能获得清晰的AFLP指纹图谱。

48个烟草品种遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对48个烟草品种进行遗传多样性研究。从200个10bp的随机引物用RAPD方法筛选获得28个多态性引物,然后对48份烟草种质资源的基因组DNA进行扩增,共获得184条DNA扩增片断带。其中多态性带86条,平均多态检出率为46.7%。48份材料的遗传距离为0～7.81,采用UPGMA法聚类分析,可将其分为两大类群,即黄花烟草群与普通烟草群,后者又可分为4组。