基于线上线下混合式教学的微生物学与免疫学课程思政探索与实践

课程思政是实现“立德树人”根本任务的重要举措。近年本课程团队基于线上线下混合式教学模式开展了微生物学与免疫学课程思政探索和实践,从课程目标、教师教学能力、线上线下教学各环节全过程全方位将课程思政有机融入其中,旨在培养“德才兼备”的医药人才。

浅析《微生物学与免疫学》实验教学改革

医学微生物学与免疫学在医学范畴里属于重要的基础学科之一,而这门学科的实验教学在课程教学里面扮演着重要的角色,并且对于医学微生物学与免疫学理论及基本技能方面都起到了关键作用。因此,本文通过《微生物学与免疫学》的实验教学为切入点,提出了《微生物学与免疫学》的实验教学指导思想、学生实践能力的相关培训及老师教学模式的提高等方法。

非洲猪瘟病毒致病机制及防治策略研究进展

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种急性、出血性、高度接触性的烈性传染病,对世界养猪业和食品安全产生了巨大的负面影响,目前仍无商品化疫苗和特效药物。其病原体非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是一种大型、结构复杂的双链DNA病毒,但80%的编码蛋白功能未知,因此其致病机制及药物研究现状对防控具有重要意义。作者概述了ASFV的病原体特征、传播途径及其引起的临床表现;从病毒入侵过程、免疫细胞功能改变及其相关通路变化等方面梳理了病毒致病机制的最新进展;介绍了ASFV的最新检测技术及疫苗新进展;系统总结了最新的中西药治疗研究现状,并对中药防治ASFV的未来前景进行展望,提出了未来重点研究方向和相关问题解决策略,以期为ASF的治疗提供借鉴和指导。

启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响。方法按沙参∶丹参∶茯苓∶川贝母(去心)∶郁金∶砂仁壳∶杵头糠=6∶6∶2∶3∶1∶1∶1的比例配制启膈散,每克药物配10 ml的比例加入95%乙醇溶液,用旋转蒸发仪浓缩药液,浓缩液与乙酸乙酯按体积比2∶1进行萃取,获取启膈散乙酸乙酯提取物。Eca9706细胞与浓度分别为12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μg/ml的启膈散提取物共培养,MTT法检测启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率。Eca9706细胞与35%抑制浓度(IC35)、50%抑制浓度(IC50)和70%抑制浓度(IC70)的启膈散提取物共培养,采用流式细胞仪检测启膈散提物对Eca9706细胞的凋亡率。结果不同浓度启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率与启膈散提取物浓度拟合曲线方程为Y=-1.835×10^(-5)X2+0.006X+0.185,R2=0.996,概率法计算IC35为22.8μg/ml,IC50为81.8μg/ml,IC70为162.2μg/ml。显微镜下观察,随着启膈散提取物浓度的增加,细胞变圆、变小,贴壁细胞数目逐渐减少,细胞间隙增大,细胞碎片增多。IC35、IC50和IC70启膈散提取物对Eca9706细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.001)。激光共聚焦显微镜下显示,启膈散提取物作用于Eca9706细胞后,部分细胞膜呈绿色,提示早期凋亡;部分细胞膜呈绿色,且细胞核呈红色,细胞体积变小、变圆,形成凋亡小体,提示晚期凋亡细胞。结论启膈散乙酸乙酯提取物可抑制食管癌Eca9706细胞增殖,诱导细胞凋亡。

启膈散乙酸乙酯部位抑制食管癌Eca109细胞STAT3信号通路诱导细胞凋亡的研究

【目的】研究启膈散乙酸乙酯部位对食管癌Eca109细胞生长的影响及其作用机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测启膈散乙酸乙酯部位对食管癌Eca109细胞的生长抑制作用,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测STAT3、Bcl-2、Caspase9蛋白的表达量。【结果】在10~100μg/m L范围内,不同浓度启膈散乙酸乙酯部位能有效抑制Eca109细胞增殖（P〈0.05）。用1.47、33.26、76.52μg/m L的启膈散乙酸乙酯部位作用Eca109细胞48 h,细胞凋亡率显著增加,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;Western blot检测结果显示：随着药物浓度的增加,STAT3和Bcl-2的表达量降低,Caspase9表达量增加。【结论】启膈散乙酸乙酯部位能显著抑制食管癌Eca109细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制STAT3信号通路有关。

橙皮苷对人食管癌Eca9706细胞增殖的抑制研究

本文通过MTT法和流式细胞术研究橙皮苷对人食管癌Eca9706细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响,结果显示:不同浓度橙皮苷能有效抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性(P<0.01),IC50为84μg/mL;22、43、84μg/mL的橙皮苷作用于Eca9706细胞48h,细胞周期在S期的比例分别为25.16%、30.13%、31.05%,比对照组明显升高(P<0.002);细胞凋亡率分别为6.23%、8.19%、10.62%,与对照组相比细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).以上结果说明,橙皮苷通过干预细胞周期和凋亡抑制食管癌Eca9706细胞增殖.

祛痰法治疗炎性疾病研究进展

不同系统疾病采用祛痰法治疗均能有效改善局部或全身的炎症反应,较单纯西药治疗具有更好的疗效。中医强调分经用药,不同系统疾病虽然均采用祛痰法治疗,但采用的祛痰药物各有侧重。从经络角度,呼吸系统炎性疾病归肺经,主要采用杏仁,金银花等;心脑血管系统炎性疾病归属心经,主要采用远志等;生殖系统炎性疾病归肾经,主要采用薏苡仁等。但目前对该类疾病的研究指标较单一,缺乏系统性。文献报道仅限于单一炎症指标的升降,炎症发生的具体机制尚未明确,缺乏对抑制激发炎症的关键蛋白和炎症通路的系统变化研究。今后,需将中医辨证用药与西医辨病用药相结合,明确祛痰类中药具体的作用机制。

人乳头瘤病毒致宫颈癌机制的研究进展

在世界女性恶性肿瘤的发病率中,宫颈癌排第三位,并且人乳头瘤病毒(human paplilloma virus,HPV)感染是宫颈癌最常见的病因。随着对HPV研究的不断深入,HPV与宫颈癌的关系越来越清晰,本文就HPV的生物学特性,致宫颈癌的主要机制进行阐述。

B组轮状病毒WH-1株nsp2基因的原核表达与抗体制备

根据B组轮状病毒(GBRV)WH-1株nsp2基因的全序列,设计引物,用PCR的方法扩增得到nsp2基因的编码区.将其片段克隆到原核表达载体pGEX-KG上,经IPTG诱导,在E.coliDH5α菌株中得到高效表达.表达的GST融合蛋白大小为61×103,经SDS-PAGE分离纯化,免疫小白鼠制备了多克隆抗体.抗体经1∶3 000倍稀释后用于Western Blot分析,获得特异性显色信号.所表达的蛋白和制备的抗体可用于蛋白结构和功能的进一步研究.

甲型H1N1流感病毒血凝素和神经氨酰酶基因进化分析

目的：探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素和神经氨酰酶基因的进化规律。方法：通过NCBI数据库下载最新收录的甲型H1N1流感病毒基因序列（中国的北京、四川、山东、福建、台湾,美国的纽约和得克萨斯州,俄罗斯）,采用DNAstar软件排列和修剪病毒各段基因序列并构建进化树。结果：不同地区分离到的2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素和神经氨酰酶编码基因均具有高度同源性（99%~100%）,同一国别的亲缘关系更近,不同国别的亲缘关系稍远,尤其是中国和俄罗斯的关系最远,相近月份亲缘关系近。结论：此次新型甲型H1N1流感病毒来自同一传染源,且病毒到目前没有发生变异。

中医院校留学生的医学微生物与免疫学教学体会

医学微生物与免疫学是中医院校各专业的一门重要基础课程,也是一门较难讲解的课程,其课时少、内容多,对于留学生更是如此。针对本校留学生在教学中出现的问题,如教材和教学内容的选择、现代教学手段以及教师的选择等方面,笔者做了诸多尝试,在此将笔者的一些体会与各位同仁共同探讨,以期提高留学生的医学微生物与免疫学教学水平。

中医院校医学微生物与免疫学实验课教学探索

医学微生物学与免疫学是我院的一门主要的基础医学主干课程，也是一门实践性非常强的学科，理论与实验相辅相成、不可分割，理论课的教学已经比较成熟，实验课的教学更应重视，在课时少、任务重的情况下，只能根据学校的教学目标、教学对象特点，突出教学重点，抓好基本知识和基本技能训练，本文在此谈实验课教学体会。

上好中医院校医学微生物与免疫学初探

医学微生物和免疫学教学在课时少、任务重的情况下,只能根据学校的教学目标、教学对象特点,突出教学重点,抓好基本知识和基本技能训练,适当介绍新理论、新进展,灵活运用多种教学手段,才能全面提高教学质量。

在中医院校研究生中开展聚合酶链式反应技术的探索

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种用于放大特定的DNA片段,可看作是生物体外的特殊DNA复制的分子生物学技术。近代PCR技术在生物学、临床医学等众多研究领域的应用愈来愈广泛,实践性和技术性很强,是基础研究与临床研究的重要方法,也是研究生应该了解和掌握的一种科研技术。PCR技术为本校向研究生新开的课程,立足于培养具备自然科学、生命科学、医学科学和实验技能专门人才,对这一门广泛应用的技术,我们在研究生的教学中做了初步探索。

健脾和胃法对食管癌细胞株EC9706移植瘤生长的抑制作用

目的:通过观察健脾和胃法及其代表方六君子汤对裸鼠移植瘤的生长和组织中STAT3通路相关因子和蛋白表达的影响,探讨其治疗食管癌的分子机制。方法:用EC9706细胞皮下注射裸鼠制备移植瘤模型,实验分为:正常空白组(C组)、模型组(M组)、六君子汤组(L组)、抑制剂组(S组)、六君子汤加抑制剂组(L+S组),C、M组为空白对照组,灌服生理盐水和腹腔注射生理盐水;L组灌服六君子汤和腹腔注射生理盐水;S组灌服生理盐水和腹腔注射Stattic工作液;L+S组灌服六君子汤水煎液和腹腔注射Stattic工作液。4周后摘除眼球取血和移植瘤,ELISA检测血清中IL-6、VEGF含量;免疫组化检测移植瘤组织中CD34和VEGF表达;Western blot检测移植瘤组织细胞中JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果:与模型组比较,六君子汤组肿瘤体积较小(P<0.05);各组移植瘤重量及组织中CD34表达均下降(P<0.05);血清中抑制剂组IL-6含量明显降低(P<0.05),其它各组没有明显差异;仅六君子汤组和抑制剂组中JAK2和STAT3表达下降(P<0.05),抑制剂组中p-STAT3明显降低(P<0.05),其它各组无明显差异。与抑制剂组比较,六君子汤组中CD34表达略高于抑制剂组(P<0.05),其它各组无明显差异;STAT3蛋白表达中六君子汤组表达降低(P<0.05),而联合抑制剂组则明显升高(P<0.05);p-STAT3表达中,六君子汤组和及其联合制剂组均明显升高(P<0.05)。与六君子汤组比较,除STAT3表达在联合抑制剂组表达有所增高(P<0.05)外,其它各组无明显差异。结论:健脾和胃法及其代表六君子汤可以抑制食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长,可能与下调移植瘤中CD34、JAK2、STAT3的表达有关。

六君子汤提取物抑制食管癌Ec9706细胞增殖及其对信号转导和转录活化因子3信号通路的影响

目的研究六君子汤提取物对食管癌Ec9706细胞增殖的抑制作用及其对信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路的影响。方法于2013—2015年,采用70%乙醇提取六君子汤,正丁醇、乙酸乙酯及水提法过夜萃取,用MTT法观察提取物对Ec9706细胞活性的影响,选取最优提取部位,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法观察六君子汤乙酸乙酯部位对Ec9706细胞分泌相关细胞因子〔包括白介素6(IL-6)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)〕的影响,采用Western-blotting法测定六君子汤乙酸乙酯部位对食管癌Ec9706细胞STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达的影响。结果对照组、六君子汤70%乙醇部位、六君子汤正丁醇部位、六君子汤水提部位Ec9706细胞OD值比较,差异有统计学意义(F=448.90,P<0.01)。药物处理组对Ec9706细胞生长的抑制效果依次为:六君子汤正丁醇部位>六君子汤70%乙醇部位>六君子汤水提部位。六君子汤乙酸乙酯部位Ec9706细胞OD值比较,差异有统计学意义(F=19.78,P<0.001)。在250μg/ml时,六君子汤70%乙醇部位、六君子汤正丁醇部位、六君子汤水提部位对Ec9706细胞的抑制率分别为7.31%、23.24%、-25.07%,而在200μg/ml时,六君子汤乙酸乙酯部位对Ec9706细胞的抑制率为77.03%,抑制效果明显优于其他部位,故筛选的有效部位为六君子汤乙酸乙酯部位。应用概率法计算六君子汤乙酸乙酯部位抑制率IC35、IC50、IC70,代表低、中、高浓度,相应的浓度为63.08、93.00、133.70μg/ml。对照组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组IL-6、TGF-β1、VEGF水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组IL-6、TGF-β1、VEGF水平低于对照组(P<0.05)。对照组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组STAT3、p-STAT3表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组STAT3、p-STAT3表达水平低于对照组(P<0.05)。结论六君子汤不同试剂提取物中,乙酸乙酯提取物抑制食管癌细胞增殖作用最强,其抑制作用可能与调节STAT3信号通路有关。

启膈散对食管癌Eca-9706细胞株诱导血管生成的影响

目的:研究启膈散对食管癌血管生成的影响。方法:MTT法检测启膈散醇提物对人食管鳞癌Eca-9706细胞株生长抑制作用,收集其IC50浓度的Eca-9706细胞条件培养基,以鸡胚绒毛尿囊膜模型、MTT法、迁移试验和小管形成试验观察条件培养基对血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的影响,ELISA法检测Eca-9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清VEGF、IL-6含量。结果:启膈散醇提物可明显抑制Eca-9706细胞增殖,具一定量效关系,IC50为96μg/m L。Eca-9706细胞条件培养基显著增加CAM生成的血管总面积,促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成;启膈散醇提物可减少Eca-9706细胞条件培养下CAM血管生成,人脐静脉内皮细胞增殖和小管形成,但增加内皮细胞迁移。启膈散醇提物可减少内皮细胞分泌IL-6和VEGF,但在Eca-9706细胞却使之增加。结论:启膈散醇提物可抑制Eca-9706细胞所致血管生成、内皮细胞增殖和小管形成,增加内皮细胞迁移,减少内皮细胞分泌VEGF和IL-6。

启膈散协同顺铂抑制食管癌EC9706细胞生长与miR-21的关系

目的:观察启膈散含药血清联合顺铂对人食管癌细胞EC9706的增殖效应,从miR-21探讨其作用机制。方法:制备启膈散含药血清,MTT法筛选其最佳作用浓度;PCR检测miR-21、PDCD4 mRNA和PTEN mRNA的表达情况;Western-blot检测蛋白PDCD4、PTEN的表达水平。结果:5%含药血清的浓度作用效果最为显著(q>1)。与5%对照血清组比较,除5%含药血清PDCD、PTEN mRNA和0.5μg/m L顺铂组的PTEN mRNA表达量下降外,其余各组的miR-21、PDCD4 mRNA和PTEN mRNA表达均升高(P<0.05);顺铂联合含药血清后,两组miR-21表达和联合高浓度顺铂组的PDCD4 mRNA均比其单用下降(P<0.05),而两组PTEN mRNA和联合低浓度组的PDCD4 mRNA的表达则升高(P<0.05)。与对照组相比,各组PDCD4蛋白表达量升高P<0.05;高浓度顺铂联合含药血清组比单用高顺铂组PDCD4蛋白表达量升高(P<0.05),低浓度顺铂的两组变化不明显(P>0.05);两个浓度顺铂联合含药血清时PTEN的表达量均高于单独使用顺铂(P<0.05)。结论:启膈散能够增加EC9706对顺铂的敏感性,可能是通过miR-21与其调控的下游基因PDCD4与PTEN共同参与完成。

六君子汤对食管癌细胞株EC9706致血管生成的影响

目的研究六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法 MTT法检测六君子汤醇提物对食管癌细胞株EC9706生长抑制作用,收集其500μg/m L质量浓度的EC9706细胞条件培养基用于鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的观察。ELISA法检测EC9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清中VEGF和IL-6含有量。结果六君子汤醇提物可明显抑制EC9706细胞增殖,具一定剂量依赖性,其IC50值为505.28μg/m L。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞条件培养基所致鸡胚绒毛尿囊膜血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞和内皮细胞IL-6及内皮细胞VEGF分泌。结论六君子汤醇提物可能通过干预EC9706细胞信号通路从而抑制血管生成的效应。

启膈散通过STAT3信号通路抑制EC-9706细胞移植瘤的生长

目的：研究启膈散对食管癌EC-9706细胞移植瘤抑制作用,并从STAT3信号通路探讨其机理。方法：收集对数期生长的EC-9706细胞,皮下注射于裸鼠右前腋下,8 d后,随机分为模型组、抑制剂组、启膈散组、抑制剂＋启膈散组,每2 d测量大小,3周后处死,摘取移植瘤,称重;移植瘤组织H.E染色显微镜下观察一般病理;免疫组化检测移植瘤微血管;Western blot检测移植瘤中蛋白表达。结果：在种植肿瘤第7天,可见有粟米粒大小肿瘤产生;在种植肿瘤第14天,模型组肿瘤大小增速快于用药各组,抑制剂组、启膈散组、启膈散＋抑制剂组肿瘤成长相近。与模型组比较,用药组移植瘤的重量明显变轻（P〈0.05）。镜下可见各组肿瘤细胞大小形态不一,异型性明显,有病理性核分裂像,部分肿瘤区域中出现肿瘤组织坏死,并有少部分淋巴细胞浸润,用药组肿瘤组织坏死区增大。与模型组相比,用药各组CD34表达面积明显下降（P〈0.05）。与模型组比,除启膈散＋抑制剂组的STAT3下降不明显外,其它均下降明显（P〈0.05）;与抑制剂组相比,仅启膈散和启膈散＋抑制剂组的STAT3蛋白表达增高（P〈0.05）。结论：启膈散能有效抑制移植瘤的生长,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关。