农业高校植物病理虚拟仿真实践教学改革探究

文献数据库检索结果表明,农业高校植物病理学科虚拟仿真技术的发展应用相对落后,至今未检索到相关报道。植物病理学科是培养未来植物医生的摇篮,具有很强的实践性和应用性。然而,该学科的实践教学却因占地多、成本高、具有偶然性、危险,以及受植物生长周期和季节限制而难以开展。导致培养的学生难以解决生产实践中的问题。鉴于此,该文探讨利用虚拟仿真技术进行实践教学改革,以此突破传统实验教学的限制,构建虚实结合的实验教学体系,为卓越农业人才培养提供新的途径。

桃褐腐病菌抗药性分子机理研究进展

桃褐腐病是严重危害桃生产的重要病害之一。在实际生产中,该病害的控制主要以化学防治为主。由于杀菌剂的大量使用,桃褐腐病菌已对几类常用的杀菌剂产生了不同程度的抗药性。本文就桃褐腐病菌(Moniliniaspp.)对生产上使用的几大类杀菌剂的抗药性情况及抗药性分子机制研究进展进行简单概述和分析,以供国内同行借鉴与参考。

桃溃疡病的鉴定

本文对云南昆明地区由Phomopsis amygdali侵染引起的桃树溃疡病进行了鉴定。采集受害病枝到实验室分离培养,进行形态学鉴定。结果表明:分离菌在PDA培养基上菌落灰色、绒毛状,从菌落的背面可看到有淡褐色的色素形成;分生孢子无色、子弹状、双细胞,大小为3.7μm×8.7μm。进行ITS系列分析:提取其基因组DNA,PCR扩增产物测序,对所测序列在NCBI中进行Blastn分析比对,结合在寄主植物上的症状,分离菌的生物学特性等,判断该分离病菌为桃溃疡病菌Phomopsis amygdali。最后进行回接实验,把分离到的病菌接种到健康的桃果实上,观察接种桃子发病情况及症状,比较从发病桃子上再分离到病菌的形态学特征,确证该分离菌就是引起桃溃疡病的病原菌。

野生柑橘炭疽病鉴定

本研究对华中农业大学野生柑橘上的病害进行鉴定。运用形态学及ITS序列分析方法对病样进行系统鉴定。结果表明,从发病的野生柑橘枝稍病样上共分离到24个单孢菌株,这些菌株根据形态学及ITS序列分析方法分为3种真菌:(1)菌落粉红色,长势非常缓慢,孢子镰刀形,ITS序列分析鉴定为砖红镰孢菌Fusarium lateritium;(2)菌落灰黑色,气生菌丝多,孢子砖格状,ITS序列分析为链格孢菌Alternaria alternata;(3)菌落灰白色,气生菌丝较少,常产生橙色胶滴和黑色小粒点,分子孢子短杆状,ITS序列分析为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides。利用健康柑橘枝条对此3种真菌进行回接实验时,接种胶孢炭疽菌的枝条出现了跟采样枝条相同的症状,而且从发病的枝条上又分离到同样的炭疽菌;而接种链格孢及砖红镰孢的枝条不发病。该病害鉴定为胶孢炭疽菌C.gloeosporioides感染引起的炭疽病。

基于MOOC和SPOC的农业植物病理学实践教学改革

农业植物病理学是农业高校植物保护专业的核心课程。为适应现代社会对具有创新意识及实践能力植保专业人才的需求,利用MOOC、SPOC课堂对农业植物病理学课程的教学内容、教学模式及考核方式进行了系列改革。通过这些改革,培养学生获得、掌握、运用知识的能力及提供更多实践技能训练的机会,为将来学生走入社会运用植保专业理论知识及实践技能解决生产问题打下坚实基础,使人才培养能力及培养水平跃升新台阶。

稻瘟病菌原生质体制备条件优化实验研究

原生质体的制备一直是现代分子生物学研究的重要内容。以稻瘟病菌作为供试菌株,优化了其原生质体的制备条件。优化的原生质体制备条件包括:使用新鲜的菌丝进行接种;加入玻璃珠一起培养,通过振荡使菌丝体破碎分离以获得更多的生长点;菌悬液继续加入新鲜培养液进行培养;原生质体沉淀时选择3 000r/min离心10min,保证最大限度地收集原生质体。实验证明,通过这4个条件优化后,原生质体的产量有了极大的提高,每毫升酶液可制备10 8～109个原生质体。

利用原生质体融合技术构建梨孢属融合子的研究方法初探(英文)

鉴于有性世代形成能高的稻瘟病菌菌株有限,稻瘟病菌间的杂交组合难于获得,从而很难对一些重要基因,如无毒基因,抗药性基因等进行遗传分析及深入研究。本研究利用原生质体融合技术获得梨孢菌的杂合子,从而评价该体系用于遗传研究的可行性。首先,利用转基因技术获得稻瘟病菌Y93-164a-1跟蟋蟀草病菌SA98-4的抗药性转化子,然后将两个菌的稳定转化子的原生质体进行融合,之后进行连续5次的继代培养,最后进行3次单孢分离来挑选稳定的融合子。结果表明,利用原生质体融合技术在两个不同致病型的梨孢菌之间能获得稳定的融合子,初步表明利用原生质体融合技术组建梨孢菌的融合子群体用于遗传分析在技术上是可行的。

CHEF Ⅲ型脉冲电泳仪获得清晰电泳效果的实验探索

CHEF Ⅲ型脉冲电泳仪是微生物种类鉴定、DNA大分子分离等基础科学研究中一个不可或缺的重要工具。该仪器可以快速、高效、准确地分离200 kb到6 Mb的DNA分子。因此,在染色体数目及染色体大小的确定、核型分析、遗传图谱分析、同源性检测分析等方面有关键性的作用。然而在实验过程中要使DNA分子完全、有效地分离,得到清晰、高效的条带却并非易事。本实验基于这些问题,经过一系列的探索研究,找到了稻瘟病菌及分子量标准酵母菌染色体分离所需要的最适条件,该条件能为分离其他真菌染色体提供借鉴与参考。

云南省稻瘟病菌生理小种演变及稻种资源垂直抗性基因的利用

1993～ 1 997年从云南省 32个县 (市 )采集、分离到 80 0余个稻瘟病菌分生孢子单孢菌株。从中选出来自 2 1个县 (市 )的 1 5 5个菌株 ,用日本鉴别品种鉴定 ,结果可分为 78个生理小种 ,出现频率最高的为 1 36 4(出现频率 6 5 % ) ,较高的有 31 7 4(5 2 % )、 0 0 7(5 2 % )、 1 37 4(4 5 % )、 0 0 3(3 2 % )、 0 0 7 5(2 6 % )。稻瘟病菌的致病谱比 1 983～ 1 988年的小种有了明显增强 ,这主要是由于栽培了抗病较强的水稻品种的原因。根据生理小种在各稻作区的组成和分布 。

部分水稻栽培品种对稻瘟病的抗性分析及利用评价

把采集、分离自云南省 5个稻作区的 89个稻瘟病菌分生孢子单孢菌株及本实验分离的 2 80多个子囊孢子单孢菌株 ,共 10 8个生理小种 ,接种于当地 10个主栽水稻品种上。根据不同菌株在各个水稻品种上的毒力频率及品种两两配合后的联合致病系数 ,明确云粳 34号、云粳 42号、腾糯 2号、楚粳 17号抗瘟性较强。在 10 8个生理小种中 ,其毒力频率分别仅为 1 93%、2 75 %、9 43%和 16 76 % ,仍可在本省继续推广种植或作抗源使用 ;而合系 35、鹤 16、楚粳 3号、楚粳 14号、云粳 9号、云粳 136号的毒力频率值分别为 2 3 99%、2 5 88%、42 32 %、86 35 %、5 7 84%和 41 0 8% ,已不能在云南单一大面积推广种植。试验表明 ,在利用分生孢子菌株作抗性分析 ,同时辅助于子囊孢子 。

稻瘟病菌二个无毒基因的初步分析

分析了 2个稻瘟病田间采集菌株Y95 - 2 2 3和Y94 - 6 4的杂交后代的 5 4个菌株对合系 35号、楚粳 3号及日本鉴别品种新 2号、梅雨明、PiNo .4和K6 0共 11个水稻品种致病性测定结果。结果表明 :陆稻菌株Y94 - 6 4对合系35号、楚粳 3号、PiNo .4分别持有 2个无毒基因 ,对新 2号、K6 0分别持有一个无毒基因 ;菌株Y95 - 2 2 3对梅雨明持有一个无毒基因 ,因为Y95 - 2 2 3对梅雨明不致病 ,Y94 - 6 4对它致病 ,而杂交后代非致病菌株与致病菌株比为 1∶1.

滤纸片低温干燥法保存丝状真菌

将待保存菌株接种在PDA培养基平板中央,在菌落周围放置直径3~5 mm的圆形无菌滤纸片,待真菌菌丝(孢子)长满滤纸片后,将其取出放入无菌培养皿中,放置在底部盛有变色硅胶的干燥器中干燥3~5 d。将干燥后的带菌滤纸片再转入底部装有无菌变色硅胶的无菌离心管中,用封口膜封口,放入透明冷冻盒内-20℃保存。通过对保存周期为2~7年的15种真菌菌种共计260个菌株的存活情况及部分菌株的致病性进行检测,发现保存的菌种存活率高,致病性和生物学特性不易退化。因此,滤纸片低温干燥法保存丝状真菌菌种,具有对设备要求简单、占用空间小、保存容量大、保存时间长、工作效率高等优点。

棉花AGO蛋白家族基因鉴定及表达分析

AGO蛋白在所有由小RNA介导的RNA沉默通路中发挥重要作用。在植物中,它广泛参与维持基因组的稳定、调控组织的发育、对逆境的应答以及对入侵的转基因和植物病毒的免疫。对AGO基因家族成员的研究有利于研究其功能。为揭示棉花中AGO家族的功能,本研究利用全基因组信息在陆地棉基因组中鉴定了27个AGO蛋白,并对这些家族成员的特性进行了进化分析,这些AGO蛋白被分为3类,蛋白长度介于731~1462 aa之间,第一、三亚家族蛋白编码区较多,第二亚家族蛋白编码区较少。27个基因分布在16条染色体上。8个基因在所有组织中的表达量较高,棉花AGO基因与拟南芥AGO基因在组织中的表达模式极为相似。本研究为进一步研究棉花中AGO蛋白的功能提供了指导意义。