高速逆流色谱法分离何首乌中的游离蒽醌及二苯乙烯苷

目的:利用高速逆流色谱法分离何首乌中的游离蒽醌与二苯乙烯苷。方法:以不同溶剂系统分离纯化何首乌提取液,分别以紫外分光光度法测定其游离蒽醌含量,高效液相色谱法测定其二苯乙烯苷含量,同时以单因素试验考察高速逆流萃取流速、转速、萃取温度对游离蒽醌与二苯乙烯提取率的影响,在此基础上通过响应曲面法优化试验、优选最佳工艺。结果:以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(9∶1∶5∶5)作为溶剂系统时,何首乌中游离蒽醌的分离度最高。以甲酸乙酯-甲醇-水(10∶0.5∶10)作为溶剂系统时,何首乌中二苯乙烯苷的分离度最高。何首乌游离蒽醌萃取工艺流程为:溶剂流速1.5 mL/min,转速735 r/min,萃取柱温度27℃;二苯乙烯苷萃取工艺流程为:溶剂流速1.5 mL/min,转速738 r/min,萃取柱温度26℃;此工艺条件下何首乌中游离蒽醌的质量分数达68.60%,二苯乙烯苷的质量分数达73.77%。结论:利用高速逆流色谱法富集何首乌中游离蒽醌、二苯乙烯苷,快速、简单、分离度好。

燕窝对正常小鼠肠道菌群的影响

观察燕窝对正常小鼠肠道菌群的影响,评价其对肠道微生态调节的作用。昆明种小鼠40只,分成4组,即正常对照组,燕窝高、中、低剂量组。灌胃给药28d后,选用厌氧及需氧菌选择性培养基测定盲肠内容物标本中代表性菌种肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌、拟杆菌、双歧杆菌和乳酸杆菌数量。与空白对照组相比,燕窝各剂量组小鼠肠道肠杆菌含量显著降低(P<0.01或P<0.05);燕窝高剂量组产气荚膜梭菌含量显著下降(P<0.05);燕窝中、高剂量组肠球菌含量显著下降(P<0.05或P<0.01);燕窝中、高剂量组小鼠拟杆菌含量显著增加(P<0.05);燕窝高剂量组双歧杆菌、乳酸杆菌含量显著上升(P<0.05)。说明燕窝可通过扶植肠道有益菌、抑制有害菌来调节小鼠肠道菌群。

地黄丸类方对肾阳虚大鼠免疫功能的影响

目的观察3种地黄丸类方对肾阳虚大鼠免疫功能的影响,并从基因水平探讨其免疫调节的机制。方法采用氢化可的松注射液肌注2周造成肾阳虚大鼠模型,造模成功后,六味、桂附、知柏地黄丸连续灌胃给药3周,应用酶联免疫法(ELISA)检测各组大鼠血清IL-2及IL-4的含量,荧光定量PCR法检测各组大鼠肾组织NF-κB mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组胸腺质量显著下降,血清IL-2、IL-4水平显著改变(P<0.05);与模型组比较,桂附地黄丸、六味地黄丸均可显著提高胸腺质量,改善血清IL-2、IL-4水平(P<0.05),知柏地黄丸无显著改变作用(P>0.05);与模型组比较,六味、桂附地黄丸各组均可显著降低大鼠肾组织NF-κB mRNA表达量(P<0.05),知柏地黄丸无显著改变作用(P>0.05)。结论六味地黄丸、桂附地黄丸对于肾阳虚大鼠免疫功能有一定的改善作用,知柏地黄丸改善作用不显著。

岗梅不同药用部位抗炎、止咳药效比较研究

目的研究岗梅不同药用部位抗炎、止咳药效的差异。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、氨水引咳法观察岗梅根、茎、叶、根茎混合物抗炎、止咳作用,比较不同部位药效差异。结果与空白对照组比较,岗梅根、茎、叶、根茎混合物均可显著抑制致炎小鼠耳廓肿胀(P<0.01),耳肿胀抑制率分别达62.11%、43.95%、53.90%、57.38%;岗梅根、茎、叶、根茎混合物对致咳小鼠咳嗽潜伏期无显著性差异(P>0.05),但根、茎、根茎混合物可显著减少致咳小鼠5min内咳嗽次数(P<0.05)。结论岗梅根、茎、根茎混合物均具有显著的抗炎和止咳药效,但岗梅叶仅有抗炎作用。

富含谷氨酰胺多肽的制备及其体外模拟消化

以乳清蛋白、大米蛋白和小麦蛋白为原料,通过不同酶水解制备富含谷氨酰胺多肽,根据蛋白质回收率、酰胺氮含量、分子质量分布以及抗氧化活性(羟自由基清除活性和氧自由基吸收能力)筛选不同来源的最优多肽。研究优选的3种多肽耐受胃肠模拟消化能力,确定其制剂形态并筛选富含谷氨酰胺多肽制备的最优原料。结果显示,乳清蛋白肽(胰蛋白酶组)、大米蛋白肽(风味蛋白酶组)及小麦蛋白肽(风味蛋白酶组)为优选多肽,作为模拟消化的研究对象。以乳清蛋白肽为基料的谷氨酰胺功能性食品,应选择肠溶胶囊为包装材料。大米蛋白肽、小麦蛋白肽采用普通胶囊为包装材料。小麦蛋白肽经胃肠模拟消化后酰胺氮含量增至1.90%,小分子肽(Mw<1 ku)占比高达74.59%,且抗氧化活性无显著差异(羟自由基清除率为22.89%,ORAC值为1.28μmol TE/(L·mg)肽,P>0.05),说明小麦蛋白是制备富含谷氨酰胺多肽的最优原料。

杜仲黄酮与鸡软骨肽的相互作用对抗氧化活性及荧光特性的影响

本文对杜仲黄酮与鸡软骨多肽的相互作用进行研究,以为其在相关食品和保健食品中的应用提供一定的参考。通过DPPH·清除活性检测以及荧光光谱法,研究杜仲黄酮与鸡软骨肽相互作用后其抗氧化活性以及荧光特性的变化。5 mg/mL鸡软骨肽分别与9、12、15、18、21μg/mL杜仲黄酮相互作用后,其DPPH·清除活性均呈现出显著的协同增强效果;高温杀菌(121℃,20 min)及pH6.0的酸性体系有利于提高相互作用产物的DPPH·清除活性。杜仲黄酮对鸡软骨肽的内源荧光有明显的猝灭作用,且随黄酮浓度的增加,荧光猝灭效果越明显,同时荧光最大发射峰出现了明显的红移。说明,杜仲黄酮可与鸡软骨肽发生相互作用,使其抗氧化活性及荧光特性等发生了相应的改变。

鸡软骨肽化学结构特征及抗氧化、抗炎活性成分研究

目的:明确鸡软骨肽的主要化学结构特征,及其抗氧化、抗炎的物质基础。方法:对鸡软骨肽进行水解,采用异硫氰酸苯酯(PITC)-柱前衍生高效液相色谱法检测鸡软骨肽水解后所得氨基酸的组成;借助LC-MS/MS以及物种蛋白质数据库,确定鸡软骨肽中主要水解多肽的氨基酸序列;利用固相合成方法制备已知氨基酸序列的多肽,采用DPPH法、水杨酸法、FRAP方法测定合成肽段的抗氧化作用,采用H2O2致C518大鼠膝关节软骨细胞损伤模型测定合成肽段对氧化损伤的保护作用,采用LPS诱导的C518大鼠膝关节软骨细胞炎症模型测定合成肽段的抗炎作用。结果:确定18种氨基酸在鸡软骨肽中的占比情况,其中占比最高的是甘氨酸(G)29.5%,其次为脯氨酸(P)11.63%、丙氨酸(A)10.61%、谷氨酸(E)9.2%;从水解鸡软骨肽中鉴定出的11条分子量为794~1860 Da的肽段,并筛选出多条抗氧化、抗炎作用显著的活性肽段,其中综合功效最佳的肽段为G4(MEGNAEESTLFCFAVRG)。结论:LC-MS/MS结合物种蛋白质数据库是一种快速、有效研究鸡软骨肽化学结构特征的新方法,本实验借助该方法初步确定了鸡软骨肽的化学结构特征以及抗氧化、抗炎活性成分,将为深入开展鸡软骨肽的应用研究提供基础。

脾气虚证模型大鼠尿液的1H-NMR代谢组学研究

目的建立脾气虚证大鼠模型,分析脾气虚证的代谢通路,探究内源性代谢产物变化与脾气虚证的关系。方法采用苦寒泻下、劳倦过度和饥饱失常复合因素方法建立并评价脾气虚证大鼠模型,检测其血清中肌酸磷酸激酶活性;对大鼠尿液进行~1H-NMR检测,以变化倍数(fold change,FC)>1.2,结合独立样本t检验(P<0.05)的统计学方法筛选脾气虚证模型组和对照组的差异代谢物,进行代谢通路分析与富集分析。结果脾气虚证模型建立成功;模型组的肌酸磷酸激酶活性低于对照组(P<0.05);从主成分分析(PCA)结果得出模型组和对照组的代谢产物得到明显区分;筛选出33种差异代谢物,主要参与的代谢通路涉及能量代谢、氨基酸代谢、核苷酸代谢,同时对肠道菌群存在干扰。结论脾气虚主要扰乱了大鼠的能量代谢通路(三羧酸循环、糖酵解、脂质氧化),抑制了供能作用,导致大鼠出现疲乏和体质量增长抑制的症状。

青钱柳叶对糖尿病大鼠的治疗作用

目的通过研究青钱柳(Cyclocarya paliurus)叶水提物对肝脏胰岛素受体(InsR)、胰岛素受体底物2(IRS-2)mRNA的表达影响来了解治疗大鼠2型糖尿病的可能作用机制。方法采用高脂饲料结合链脲佐菌素方法复制2型糖尿病大鼠模型,成模80只SD大鼠均分成模型组和青钱柳叶水提物组,灌胃给药4周后,检测体质量、尿量、饮食量、饮水量、空腹血糖值(FBG)、血清中胰岛素和肝脏组织中InsR、IRS-2 mRNA含有量变化。结果与模型组相比,青钱柳叶水提物给药组可明显减少动物的摄食量、饮水量和尿量,增加体质量;降低空腹血糖值和胰岛素水平,改善胰岛素敏感指数(ISI);上调肝组织中InsR、IRS-2的mRNA表达。结论青钱柳叶水提物具有改善2型糖尿病大鼠的症状,降低空腹血糖和提升胰岛素敏感性,可能与上调肝组织中InsR、IRS-2的mRNA表达有关。

肌肽纳米脂质体改善人成纤维细胞抗氧化性能研究

采用高压匀质技术制备了肌肽纳米脂质体,所得肌肽纳米脂质体平均粒径为65.5 nm,多分散性系数(PDI)为0.290,Zeta电位为-43.6 mV,载药量和包封率分别为6.6%和67.0%。采用Franz扩散池法考察肌肽纳米脂质体体外透皮性能,结果显示其12 h体外皮肤累积透过量为92.32μg/cm^2,皮肤滞留量为。研究了游离肌肽和肌肽纳米脂质体分别对H_2O_2诱导人成纤维细胞(HSF)细胞氧化损伤的保护作用,测定HSF细胞中MDA含量、SOD和CAT活性的变化。结果显示,肌肽质量浓度为25～400 mg/L时,与游离肌肽组相比,肌肽纳米脂质体使受损HSF细胞活力显肌肽。

中链甘油三脂和共轭亚油酸复配食用油对大鼠脂肪囤积及认知功能的影响

为了研究中链甘油三脂和共轭亚油酸复配食用油对大鼠脂肪囤积及认知功能的影响,将SD大鼠随机分为对照(蒸馏水)、猪油、健康油脂和复配油脂组,灌胃大鼠4周,记录大鼠体重、摄食和饮水量;进行水迷宫测试;测定Lee’s指数、肾周、腹部、附睾和心外膜脂肪重量,以及血糖、肝功、血脂代谢、瘦素、TNF-α的水平;观察小肠和肝小叶组织结构变化。与对照组相比,猪油组大鼠肾周脂肪、附睾脂肪、心外膜脂肪重量、TNF-α和谷丙转氨酶显著升高;与猪油组相比,健康油脂组、复配组不同剂量大鼠空腹血糖值、谷丙转氨酶、TNF-α、肾周脂肪、附睾脂肪和心外膜脂肪重量显著降低;与对照和猪油组相比,复配油脂低剂量组的甘油三酯明显降低。复配油脂在控制甘油三酯水平和炎性反应上有一定优势。

地黄丸类方对肾阳虚大鼠HPA轴的影响

目的比较桂附、知柏、六味地黄丸方对肾阳虚大鼠治疗作用的异同以及对下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的影响。方法取SD大鼠80只,随机分为8组(每组10只):正常组,模型组,六味地黄丸高、低剂量组(4,1 g·kg-1),知柏地黄丸高、低剂量组(4,1 g·kg-1),桂附地黄丸高、低剂量组(4,1 g·kg-1),灌胃给药,连续21 d。采用氢化可的松注射液肌注14 d的方法,制备大鼠肾阳虚模型,观察3种地黄丸方对肾阳虚大鼠的一般状态、体质量、肛温、血浆cAMP、cGMP、CRH、ACTH、血清CORT含量以及血浆cAMP/cGMP水平的影响。结果建模后大鼠体质量、肛温均有显著的降低,血浆cAMP水平无显著性变化,cGMP水平则显著升高,c AMP/c GMP比值显著下降,血浆CRH、ACTH和血清CORT水平均较正常组显著下降(P<0.05,P<0.01)。给药后,3种地黄丸类方均可显著升高肾阳虚大鼠体质量(P<0.05,P<0.01);桂附地黄丸表现出显著的升高肛温作用(P<0.05),六味地黄丸虽在后期表现出一定升温作用,而知柏地黄丸则未表现出升高肛温的作用(P>0.05);桂附地黄丸可显著升高cAMP/cGMP比值和恢复大鼠HPA轴功能(P<0.05,P<0.01),六味、知柏地黄丸组均无显著性改变。结论 3种地黄丸类方对肾阳虚大鼠生存状态及神经内分泌网络的影响方面存在明显差异,桂附地黄丸可以明显改善肾阳虚大鼠HPA轴抑制的状态;六味地黄丸对于肾阳虚大鼠免疫功能表现出一定的改善作用,知柏地黄丸改善作用不明显。

金仁陈子方对IBS模型大鼠的治疗作用及机理研究

目的观察金仁陈子方对母子分离复合应激诱导的肠易激综合征(IBS)大鼠的治疗作用,并探讨其作用机理。方法采用新生大鼠母子分离与避水应激复合法复制内脏高敏感性IBS大鼠模型,观察金仁陈子方对IBS大鼠内脏敏感性、避水应激排便粒数、血清一氧化氮(NO)含量、血清及结肠组织5-羟色胺(5-HT)含量的影响。结果与模型组比较,金仁陈子方高、低剂量组大鼠内脏敏感性显著降低(P<0.01),避水应激排便粒数显著减少(P<0.01),血清NO含量显著升高(P<0.01),血清及结肠组织5-HT含量均显著降低(P<0.05)。结论金仁陈子方可通过调节大鼠体内NO、5-HT水平,显著改善IBS模型大鼠肠道功能。

大黄白糖散对大鼠烫伤皮肤的修复作用研究

目的:观察大黄白糖散对大鼠烫伤皮肤修复作用的影响,以评价其治疗烧烫伤皮肤的疗效。方法:取深Ⅱ度烫伤模型大鼠64只,随机分为空白对照组、阳性对照组、大黄白糖散低剂量组、大黄白糖散高剂量组。每组16只。阳性对照组:涂抹美宝湿润烧伤膏,大黄白糖散高、低剂量组:分别涂抹大黄白糖散软膏0.5 g、0.25 g。每天涂抹药并观察记录创面愈合时间,连续18天。分别于涂抹第9天观察创面愈合时间,并各组取6只大鼠烫伤皮肤做HE染色切片观察。结果:与空白对照组比较,大黄白糖散高、低剂量组大鼠烫伤皮肤结痂、脱痂以及完全愈合的时间均缩短(P<0.01),并且高、低剂量大黄白糖散均能显著改善烫伤皮肤病理形态。结论:大黄白糖散对大鼠烫伤皮肤创面具有较好的修复作用。

抗流感病毒的古方用药规律分析

目的挖掘古籍方剂治疗抗流感病毒的药物组,指导临床用药组配。方法搜集古籍记载的方剂6950首,基于Excel2010对方药进行关联关系挖掘。结果抗流感病毒方药的单味药使用频次从高到低排序前10名分别是甘草、人参、茯苓、防风、黄芩、陈皮、川芎、当归、白术和麻黄;两味药药物组使用频次从高到低排序前10名分别是人参-甘草、茯苓-甘草、黄芩-甘草、陈皮-甘草、防风-甘草、川芎-甘草、柴胡-甘草、桔梗-甘草、白术-甘草和麻黄-甘草。抗流感病毒古方用药多为疏风解表、清热解毒、止咳化痰和补益脾肺药物。结论抗流感用药以解表药物和清热药物为主,健脾益气,补血活血药物使用频次亦较高,说明治疗流感的古方多有气血亏虚的表现。

青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的改善作用

【目的】探讨青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的作用。【方法】将60只SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,知柏地黄丸组,青钱柳叶水提物高、中、低剂量组。复制阴虚内热型2型糖尿病大鼠模型:大鼠给予高脂饲料喂养,喂养第4周时,按0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量连续皮下注射甲状腺素(T4)7 d;第5周时,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg,3周后造模结束。模型复制成功后,除正常组和模型组外,其余各组给予相应药物灌胃治疗4周。每周观察中医证候指标并评分。末次给药后,观察空腹血糖(FBG)值变化、血糖曲线下面积(AUC)及血清中尿素(Urea)含量;取肝脏称质量计算肝指数,并检测肝组织肝糖原含量;检测CD3^+、CD4^+和CD8^+T淋巴细胞百分比。【结果】与模型组比较,给予青钱柳叶水提物治疗之后,阴虚内热型糖尿病中医表征表现如背部温度上升、舌色鲜红、活动次数明显增加、爪色青紫及眼睛神采异常等均有明显的改善(P<0.05或P<0.01),FBG、AUC、Urea含量和肝脏系数下降(P<0.05或P<0.01),肝糖原含量升高,CD8^+T细胞百分比升高,CD4^+T细胞百分比及CD4^+/CD8^+值下降(P<0.05或P<0.01)。【结论】青钱柳叶水提物能改善大鼠阴虚内热型2型糖尿病中医表征及调节免疫功能。