颈动—静脉分流法建立肺动脉高压模型

目的利用颈动—静脉分流手术建立新西兰白兔动力性肺动脉高压模型。方法将35只雄性新西兰白兔行右侧颈总动脉—颈外静脉吻合术,观察其肺动脉收缩压(SPAP)、肺动脉平均压(MPAP)和体动脉平均压(MAP),右心室/左心室+室间隔(RV/LV+S)比值,肺血管病变发生率。结果术后观察3个月,35只兔存活并吻合口通畅兔的肺动脉高压形成率为82.35%,并有肺小动脉的病理形态学变化。SPAP为(46.3±11.2)mmHg,MPAP为(39.2±7.6)mmHg,MAP为(87.5±12.8)mmHg,RV/LV+S为59%±10%。结论利用颈动—静脉分流手术可成功建立新西兰白兔动力性肺动脉高压模型。

结肠癌VEGF-C表达、淋巴管密度与淋巴转移和预后的关系

目的:评估VEGF-C、淋巴管密度(LMVD)与结肠癌临床病理指标及预后的关系。方法:对44例原发结肠癌和14例淋巴结转移癌分别用抗VEGF-C和抗VEGFR-3单抗进行免疫组化染色,检测VEGF-C和VEGFR-3表达,计数LMVD,分析上述指标与临床病理指标和预后的关系以及VEGF-C与LMVD的相关关系。结果:VEGF-C表达率结肠癌为43.2%(19/44),淋巴结转移癌为92.9%(13/14)。LMVD平均为10.14±4.19。VEGF-C表达与肿瘤分化程度(P=0.003)、淋巴结转移(P=0.002)相关。LMVD与淋巴结转移(P=0.001)相关。VEGF-C阳性表达组LMVD为11.34±4.83,高于VEGF-C阴性表达组的9.24±3.48,但VEGF-C与LMVD无相关性(P=0.105)。VEGF-C阳性病人的生存率明显低于VEGF-C阴性病人(P=0.0225),LMVD高密度组病人的生存率明显低于LMVD低密度组病人(P=0.0036)。远处转移(P=0.0004)、淋巴结转移(P=0.021)、LMVD(P=0.0469)可以作为结肠癌独立的预后指标。结论:VEGF-C、LMVD在结肠癌淋巴结转移中起重要作用,VEGF-C和LMVD对于判断结肠癌侵袭性和预后有重要参考价值。LMVD可以作为判断结肠癌预后的独立指标。

IL-10对大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的影响

目的:研究IL-10对大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的影响。方法:将18只供体Wistar大鼠和18只受体SD大鼠分为3组,每组各有6只Wistar大鼠和SD大鼠。Ⅰ组:Wistar→SD小肠移植;Ⅱ组:Wistar→SD小肠移植+CsA;Ⅲ组:Wistar→SD小肠移植+rrIL-10。术后3、5、7d观察病理学改变并用半定量RT-PCR方法检测IFN-γ、IL-2mRNA。结果:Ⅰ组术后3 d出现排斥反应,第7 d时最重;Ⅱ组术后7d部分出现轻度排斥反应;Ⅲ组术后5d出现轻度排斥反应,术后7d出现中度排斥反应。Ⅰ组IFN-γ、IL-2mRNA术后明显增高;Ⅱ组术后略升高,与Ⅰ组差异有统计学意义(P<0.01);Ⅲ组术后升高,较Ⅰ组升高程度低,二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-10可抑制大鼠小肠移植急性排斥反应。

简化的大鼠异位全小肠移植术

目的 :建立简化的大鼠异位全小肠移植术技术 ,以提高手术成功率 ,为相关研究奠定基础。方法 :供、受体均为雄性近交系Wistar大鼠 ,共 180只 ,配对手术。采用供肠的肠系膜上动脉与受体肾下腹主动脉端侧吻合、门静脉与受体左肾静脉套管法端端吻合重建移植小肠血供 ,移植小肠远端腹壁造口。结果 :手术耗时 130min ,移植小肠热缺血时间约 30min。 90只受全大鼠术扣即时存活率为 10 0 % ,长期存活率 (>7d)为 95 6 %。结论 :简化术式具有操作简便 ,移植小肠的热缺血时间短 ,手术成功率高等优点 。

海藻糖对低温保存的气管组织细胞活力的影响

目的探讨海藻糖对低温保存的气管组织细胞活力的影响。方法新鲜配制两组保存液,其中:Ⅰ组LPD+DMSO,Ⅱ组LPD+DMSO+海藻糖(0.10mol·L-1)。切取SD大鼠气管后立即分别放入含上述两种溶液的冻存管,在程序降温仪降至-80℃后投入液氮中保存,分别在1,15,30,60,120d后对气管组织体外培养,并加入3HTdR做标记,检测细胞掺入率。结果采用3HTdR体外组织培养,低温保存后Ⅰ组气管3HTdR掺入率(88.72%～78.21%)明显高于Ⅱ组(80.99%～70.75%),这种趋势可长时间持续(共120d)。结论含有海藻糖的LPD溶液在低温下对气管组织细胞有明显的保护作用;3HTdR体外组织培养的方法可以比较客观地反映了器官保存后的活力。

TGF-β_1 mRNA与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系

目的 :研究TGF β1mRNA与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系。方法 :试验分 2组 ,Ⅰ组 :Wistar→SD小肠移植 ;Ⅱ组Wistar→SD小肠移植 +CsA。术后 3,5 ,7d观察病理学改变并用半定量RT PCR方法检测IFN γ、IL 2、TGF β1mRNA。结果 :病理改变 :Ⅰ组术后 3d出现排斥反应 ,7d最重 ,Ⅱ组术后 7d部分出现轻度排斥反应。Ⅰ组IFN γ、IL ImRNA术后明显增高 ,Ⅱ组术后略升高 ,两者相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。Ⅰ组TGF β1mRNA术后增高 ,Ⅱ组TGF β1mRNA术后增高大于Ⅰ组 ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :TGF

缺血再灌注对血管内皮细胞功能的影响及药物干预作用观察

目的 :探讨缺血再灌注 (缺氧再给氧 )对内皮细胞免疫功能的影响及川芎醇的干预效果。方法 :用人脐静脉内皮细胞株ECV30 4缺氧再给氧模型模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤 ,并用川芎醇干预其缺氧再给氧过程。间接免疫荧光染色显示胞内核因子 κΒ(ΝF κΒ) ,流式细胞术检测细胞表面HLA ABC ,HLA DR ,CD86和CD5 4 ,并将内皮细胞与同种异体淋巴细胞混合培养 (MELR) ,检测淋巴细胞增殖程度、IL 2的产生及凋亡淋巴细胞百分率。结果 :缺氧再给氧使ECV30 4细胞变圆、收缩、脱落 ,胞浆NF κB表达增高 ,且由胞浆阳性为主转为胞核阳性为主 ,细胞表面HLA ABC ,HLA DR ,CD86增高 ,CD5 4无显著变化 ,MELR中3 H TdR掺入量、IL 2生成量显著增多 ,凋亡淋巴细胞百分率降低。川芎醇干预后ECV30 4细胞形态基本恢复正常 ,NF κB表达未下调 ,但核阳性细胞百分率降低 ,以核浆阳性为主 ,其他多项检测指标的改变得以逆转。结论 :缺氧再给氧影响了ECV30 4细胞几种重要免疫相关分子的表达 ,川芎醇可发挥拮抗作用 。

CO_2促缺血下肢侧支循环建立的实验研究

目的:观察经股动脉主射CO2对兔缺血下肢侧支循环形成作用。方法:采用新西兰大白兔,建立兔急性下肢缺血模型。将模型兔分成两组,实验组10条,每日经股动脉注射95%的CO2(2ml/kg);对照组6条,每日只注射与实验组等量的肝素生理盐水,共20d,20d后行血管造影、病理、免疫组化染色检查,评价各组侧支血管形成状况。结果:实验组较对照组动物下肢缺血部位新生血管明显增多,侧支循环形成。结论:CO2能加速扩张下肢动脉侧支血管,加速缺血区动物侧支循环的建立,增加下肢缺血区微血管的密度,改善缺血区的血液供应,并有效的保护下肢功能。

同种异体大鼠嵌合体动物模型的建立及意义

目的:探讨建立同种异体大鼠嵌合体动物模型的方法,初步研究嵌合体与耐受的关系。方法:采用两种诱导方法处理受体Wistar大鼠(♀) :Ⅰ组大鼠亚致死TBI(11Gy) ;Ⅱ组大鼠TBI(7Gy) ,两组均在4小时内输入SD大鼠(♂)BMC(8×10 7) ,Ⅱ组于2天后腹腔注射CTX(5 0mg kg)。分别于BMT后2 0、4 0天通过PCR方法检测SD大鼠源性BMC在Wistar大鼠体内植活情况,并通过皮肤移植、DTH和MLR检查,判断其耐受情况。结果:经上述处理两组大鼠外周血均可测出SD大鼠源性嵌合体,皮肤移植、DTH和MLR检查显示对SD大鼠产生特异性耐受,但Ⅰ组大鼠生存情况明显不如Ⅱ组。结论:应用7GyTBI +腹腔注射CTX(5 0mg kg) +供体BMT可成功建立同种异体大鼠嵌合体模型,诱导特异性免疫耐受。

评价含抑肽酶肺保护液疗效的实验研究

目的:利用兔在体肺保存模型,评价含抑肽酶的改良肺保护液对肺的保护作用。方法:新西兰白兔30只,随机分为对照组、低钾右旋糖酐液(LPD液)组、抑肽酶组,每组10只。制备兔在体左肺保存模型,对照组仅阻断肺门和冷藏,不灌肺保护液,LPD液组和抑肽酶组分别经肺动脉插管,在体灌注LPD液和含抑肽酶的LPD液,完毕后将左肺下叶放入特制的肺保存器内在体低温冷藏2h,移去肺保存器,开放肺门再灌注2h。在实验过程中抽取肺静脉血标本行血气分析,取肺组织行病理学检查,同时检测支气管灌洗液中性粒细胞百分比及肺湿/干重比以评价肺保存效果。结果:抑肽酶组再灌注5min和2h两个时间点肺静脉血氧分压显著高于LPD液组和对照组(P<0.05)。抑肽酶组肺泡出血及肺结构损害分级均较对照组及LPD组轻微(P<0.05)。肺湿/干重比抑肽酶组较对照组和LPD液组均有非常显著的差异(P<0.01)。结论:含抑肽酶的肺保护液对肺的保护效果确切,其保护作用明显优于单纯LPD液。

CO_2对犬缺血心肌侧支循环形成的影响及对心功能的保护作用

目的:观察经冠状动脉注入缺血心肌内CO2对犬缺血心肌侧支循环形成的影响及对心功能的保护作用。方法:采用健康杂种犬,建立犬急性心肌缺血模型。将模型犬分成两组,实验组10只,每日注射95%的CO2(2ml/kg);对照组9只,每日只注射与实验组等量的肝素生理盐水,共14d;另选5只为空白对照组。两周后行冠状动脉造影、超声心动图、病理学、免疫组化染色检查,评价各组心功能及侧支血管形成状况。结果:实验组较对照组心脏缺血部位微血管明显增多,侧支循环形成,心功能改善。结论:CO2能加速扩张冠状动脉侧支血管,加速缺血区冠状动脉侧支循环的建立,增加心肌缺血区微血管的密度,改善缺血区的血液供应,并有效地保护心功能。

一氧化氮合酶抑制剂对创伤性休克的干预作用

目的:评价选择性诱导型一氧化氮合酶(iNO)抑制剂氨基胍(AG)和非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-N位硝基精氨甲酯(L-NAME)对创伤性休克的治疗效果.方法:40只Wistar大鼠制作创伤性休克动物模型,双侧股骨干砸伤后并经股动脉放血至平均动脉压(MAP)35～45mmHg(4.67～6.00kPa),维持30min,然后回输失血和等量的林格式液.随机分为休克组(10只),AG组(根据复苏时静脉注射AG含量为10,50mm/kg.则分为AG Ⅰ,AGⅡ各10只),L-NAME组(10只,复苏时静脉注射L-NAME 10mg/kg),观察休克前后血浆NO浓度的动态变化及24h大鼠存活率.并留取肺、肝、肾、小肠组织,观察病理改变.结果:大鼠创伤性休克后,血浆NO水平明显高于休克前;AG各组动物复苏后血浆NO的水平明显降低,各脏器的病理损害亦显著减轻,存活率明显提高,AGⅡ组效果最好;L-NAME组动物复苏后血浆NO的水平也明显降低,各脏器的病理损害无明显变化,存活率无明显提高.结论:NO在创伤性休克的病理发展过程中起着重要作用,应用AG有助于创伤性休克的改善;L-NAME能降低NO的水平,但对休克的预后无明显改善.

海藻糖在气管低温保存中的保护机制

目的探讨海藻糖在气管低温保存中的保护作用和机制。方法新鲜配制4组保存液,其中:Ⅰ组 LPD;Ⅱ组LPD+10%DMSO;Ⅲ组LPD+0.15M海藻糖;Ⅳ组LPD+10%DMSO+0.15M海藻糖。切取SD 大鼠气管后立即分别放入含上述4种溶液的冻存管,在程序降温仪降至-80℃后投入液氮中保存。20d后对 气管标本进行HE染色和Bcl 2、Bax蛋白检测(免疫组化),并将其异位移植到Wistar大鼠腹腔,15d后取出 移植气管,观察组织学变化。结果4种保存液低温保存气管20d后,Ⅲ组和Ⅳ组气管结构完整,软骨细胞Bax 蛋白表达较低,尤其Ⅳ组保存效果最好,同种异体异位移植后生长良好。各组Bcl 2蛋白表达无明显区别。 结论在气管低温保存中海藻糖的保护作用主要是通过对软骨细胞的保护实现的,抑制软骨细胞Bax基因的 表达是其中的保护机制之一。海藻糖和DMSO合用保护作用更好。

手术学实验教学方法及考核模式的优化探索

外科手术学是临床医学从理论过渡到实践的桥梁.将手术学的发展通过现代的教育方式融入到手术学教学中,可更好地与临床接轨,同时不断提高学生的实际操作能力.本文参考近年来开展效果较好、学生评价较高的教学手段,探讨如何改进教学方式、考核模式.提高教学质量,培养具有多元化能力的创造性医学人才.

兔在体肺保存模型的建立及其意义

目的 建立一种能筛选和鉴定肺保护液保护效果的兔在体肺保存模型。方法 新西兰白兔 40只 ,经左侧开胸 ,掀开胸壁 ,游离左上肺动脉 ,穿刺置管 ,切除左肺上叶 ,经左心房置管入左肺下静脉。阻断左肺根后 ,自肺动脉灌注肺保护液 ,经肺静脉管引流 ,完毕后将左肺下叶放入特制的肺保存器内低温冷藏 2h ,移去肺保存器 ,开放肺门再灌注 3h。在实验过程中取标本观察肺保存效果。结果 在预实验阶段 ,10只动物因出血死亡 ,或因出血导致的后续操作无法进行而致失败 5只 ,成功率 5 0 %。经过改进后在正式实验阶段 ,3 0只动物模型均制作成功 ,术中血压、心率及体温等各项生理指标稳定 ,与开胸前相比 ,无统计学意义差异 (P <0 .0 5 ) ,动物对手术的耐受性好。结论 兔在体肺保存模型制作简单 ,过程符合生理 ,模型稳定、安全、实用 ,是研究肺灌注液保存效果的理想的急性和慢性实验动物模型。

抑肽酶对缺血肺组织ICAM-1和P-选择素基因mRNA表达的影响

目的 探讨抑肽酶对在体缺血冷存再灌注后肺组织细胞间黏附分子 1(ICAM 1)和P 选择素基因mRNA表达的影响。方法 新西兰白兔30只,随机分为3组:对照组、PLD组和抑肽酶组。建立兔在体肺缺血冷存再灌注模型,对照组左肺不灌注肺保护液,阻断左肺门后直接将左肺下叶在体冷存于10℃肺保存器内2h ,再灌注2h ;LPD组左肺门阻断后经肺动脉灌注LPD液,余同对照组;抑肽酶组灌注液为含抑肽酶的改良LPD液,余同LPD组。分别于左肺门阻断前、缺血2h、再灌注2h取左肺组织,以RT PCR技术检测P 选择素和ICAM-1基因mRNA表达。结果 再灌注2h ,对照组和LPD组P 选择素基因mRNA的表达量明显高于缺血前和缺血2h ,抑肽酶组则无明显变化。缺血2h和再灌注2h ,对照组和LPD组ICAM-1基因mRNA表达量较缺血前均显著升高,且明显高于抑肽酶组。结论 抑肽酶可抑制缺血冷存再灌注后肺组织P 选择素和ICAM-1基因mRNA表达上调。

E1AF基因对大肠癌细胞侵袭力的影响及其作用机制

E1AF基因是ETS（E26 transforming specific or E twenty six specific）癌基因家族的新成员，是鼠PEA3癌基因的同源类似物。以往研究发现，ElAF苯因对恶性肿瘤的进展有促进作用，其作用可能与基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）有关。本研究的目的在于阐明E1AF基因对大肠癌侵袭能力的影响，并同时研究E1AF对MMP。2和MMP-7的调控，以明确E1AF基因促进大肠癌侵袭能力的机制。