HBV不同感染状态患者CD4＋T细胞功能的差异研究

目的 探讨适应性免疫应答（adaptive immune response）中CD4＋T淋巴细胞在不同HBV感染状态患者中功能的差异.方法 采集健康成人（healthy individuals,HI）、急性乙型肝炎（acute hepatitis B,AHB）、慢性HBV感染免疫耐受期（immune tolerance phase,IT）和免疫清除期（immune clearance phase,IC）患者的外周静脉全血.应用流式细胞术检测外周血CD4＋T细胞频数,表面功能分子CD69表达,Th1、Th2亚群细胞频数及Th1/Th2比值,并分析其在HBV感染不同状态患者中的差异.结果 共收集健康人、急性乙型肝炎、慢性HBV感染免疫耐受期和免疫清除期患者各12、33、30、49例.急乙肝组CD4＋T细胞频数（AHB,39.99±8.00％）显著高于免疫耐受组（IT,33.86±6.87％）和免疫清除组（IC,34.52±9.17％）（F =4.584,P=0.004）,其余各组差异无显著性;急乙肝组的CD69分子的平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI） （25.56±9.01）也显著高于免疫清除组（21.66±3.38）和免疫耐受组（21.57±5.58）（F=3.291,P=0.023）,而AHB、IC、IT、HI各组的CD69分子绝对分子数（absolute molecular count,ABC）依次降低,且差异均有统计学意义（F=15.201,P=0.000）.HBV各感染状态的Th2/Th1比值均无显著性差异（1.76±0.54,1.57±0.59,1.76±0.67,P＞0.05）.结论 急性乙型肝炎患者的CD4＋T细胞频数及细胞表面活化分子CD69均显著高于慢性HBV感染组;Th2型应答在HBV各感染状态的CD4＋T细胞应答中均占主导地位.

NK细胞在HBV感染中的作用研究

目的自然杀伤（natural killers, NK）细胞是淋巴细胞的重要组成，属于固有免疫的一部分。在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染过程中，NK细胞既发挥抑制病毒复制的作用，同时又可引起肝组织损伤。对于NK细胞在HBV感染过程中的具体作用，目前还存在很大争议。方法该研究比较了49例慢性HBV感染免疫清除期（immune clearance phase，IC）、32例急性乙型肝炎（acute hepatitis B，AHB）、30例慢性HBV感染免疫耐受（immune tolerance phase，IT）患者及13例健康对照（health control, HC）的外周血NK细胞、CD56bright群、CD56dim群和NK细胞表面受体IFNAR2、NKp46的表达情况以及细胞因子IL-10、TGFβ1、IFNα2、IFNγ的含量，并分析了它们与ALT、HBV DNA的关系。结果IC和AHB组CD3-CD56＋NK细胞频数降低，主要发挥细胞毒作用的CD56dim群的频数也减少，而主要分泌IFNγ的CD56bright群却升高。不一致的，外周血IFNγ含量却没有相应升高，相反，还明显降低。与HC组比，在IT组并没有发现NK细胞及其亚群频数的明显改变。可抑制NK细胞产生IFN-γ的IL-10在IC和AHB组升高，同样升高的还有另一种抑制性细胞因子TGFβ1。IC组IFNα2分泌增加而且NK细胞IFNAR2的表达上调。IT组虽然NK细胞IFNAR2表达上调，但是外周血IFNα2分泌量明显不足。AHB组IFNα2分泌水平和健康对照相近。ALT与HBV DNA在IC患者呈负相关，在AHB组呈正相关。IC组HBV DNA含量与IFNAR2的表达水平呈正相关。结论NK细胞在免疫清除期患者和急性乙型肝炎患者受到抑制，这种抑制可能有助于减轻肝脏损伤。在免疫清除期患者和急性乙型肝炎患者NK细胞的细胞毒性功能被保存，但分泌细胞因子能力受损。免疫耐受期患者可能是IFNα2分泌不足，不能有效的激活NK细胞，导致HBV长期存在。急性乙型肝炎患者HBV的清除可能依赖非IFNα2途径。ALT可作为评估免疫清除期患者免疫清除HBV水平的指标。急性HBV感染时，病毒的快速扩增可能是导致肝脏损伤的机制。另外，在免疫激活时，HBV可能刺激NK细胞上IFNAR2的表达。

急性和慢性乙型病毒性肝炎中自然杀伤细胞的功能研究

目的 探讨自然杀伤细胞（natural killer cells,NK）在慢性乙型病毒性肝炎（chronic hepatitis B,CHB）免疫活动期（immune active phase,IA）和急性乙型病毒性肝炎（acute hepatitis B,AHB）频数及功能的差异.方法 入组慢性乙型病毒性肝炎免疫活动期患者和急性乙型病毒性肝炎患者,分别在慢乙肝免疫活动期、急乙肝肝炎期和急乙肝恢复期检测其外周血NK细胞、CD56dim NK细胞、CD56bright NK细胞、IFNAR2＋ NK细胞、NKp46high NK细胞和NKp46dim NK细胞频数以及NK细胞表面功能分子IFNAR2、NKp46的表达情况,并分析它们与ALT、HBV DNA以及HBV markers相关性.结果 在IA和AHB两组间,AHB组NK细胞总频数、NKp46dim NK细胞频数显著低于IA组,但AHB组NKp46high NK细胞频数高于IA组.对于20例急乙肝恢复的患者,恢复期NK细胞和NKp46dim NK细胞频数显著高于急性炎症期,NKp46high NK细胞频数显著低于急性炎症期,而在急乙肝恢复前后CD56bright NK细胞频数和IFNAR2MFI、NKp46MFI水平在急乙肝恢复后有下降趋势,CD56dim NK、IFNAR2＋ NK和NKp46＋ NK细胞频数则呈上升趋势.在AHB组,HBV DNA与ALT呈正相关,而在急乙肝恢复前后：△HBV DNA和△ALT、△NK/LY（％）呈正相关;△ALT与△NKp46high NK频数、△NKp46MFI、△IFNAR2MFI呈正相关.结论 在慢性乙型肝炎免疫活动期,外周血NK细胞活性弱,而急性乙型肝炎中NK细胞在清除病毒,介导肝组织炎症损伤中发挥主导作用.

急、慢性乙型肝炎患者浆细胞样树突状细胞与辅助性CD4＋T细胞的功能研究

目的 探讨浆细胞样树突状细胞（Plasmacytoid dendritic cells,pDC）、辅助性CD4＋T细胞（CD4＋T helper cells,CD4＋ Th cells）在急性乙型肝炎（Acute hepatitis B,AHB）和慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B,CHB）免疫活动期（Immune active phase,IA）中的差异.方法 该研究入组急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎免疫活动期两组患者,分别在慢乙肝免疫活动期、急乙肝肝炎期和急乙肝恢复期检测其外周血pDC、CD86＋pDC细胞群和pDC表面刺激性功能分子的表达情况,以及外周血CD4＋T细胞频数,Th1、Th2亚群细胞频数及Th2/Th1比值;并分析它们与HBV DNA、HBV markers以及ALT的相关性.结果 AHB组ALT水平显著高于IA组,急性乙型肝炎时炎症更明显;在IA和AHB两组间,IA组CD86＋pDC频数和功能分子CD86的平均荧光强度（CD86MFI）比AHB组更高,但AHB组CD4＋T细胞频数高于IA组.对于急乙肝恢复的患者,恢复期CD86＋ pDC频数升高,并且Th1频数呈上升趋势,而CD4＋T、Th2频数在急乙肝恢复后有下降趋势,Th2/Th1比值降低.在AHB组,HBV DNA分别与ALT、Th2百分比呈正相关.结论 在慢性乙型肝炎免疫活动期,具有刺激功能的CD86＋pDC发挥重要作用,但CD4＋T细胞的细胞免疫应答作用减弱.而在急乙肝炎症期CD4＋T细胞中的Th2型细胞调节占主导地位,参与炎症反应,而急乙肝恢复期Th1型细胞的细胞毒作用占主导地位,发挥强烈的细胞免疫应答,最终使得病毒被清除.

固有免疫在HBV感染发病和治疗中的作用

乙型肝炎病毒（HBV）感染的发病机制是宿主免疫系统和HBV之间复杂的相互作用,宿主免疫系统包括固有免疫和适应性免疫.现在认为,宿主对病毒及其蛋白的免疫反应是决定病毒清除、感染慢性化和肝细胞损伤的主要因素.固有免疫是宿主对抗病毒感染的第一道防线,但许多研究显示HBV可以逃避固有免疫识别、干扰固有免疫信号通路并介导免疫抑制.对固有免疫在HBV感染过程中的作用和状态研究有助于开发新的治疗方法,以达到根除HBV.本文对固有免疫反应的模式识别受体（PRRs）、树突状细胞（DCs）、自然杀伤（NK）细胞/自然杀伤T（NKT）细胞、调节性T细胞（Tregs）和干扰素（IFNs）的近期研究进展进行了综述.

慢性乙型肝炎治疗前X区变异与聚乙二醇干扰素α-2a治疗疗效的关系研究

目的 探讨慢性乙型肝炎治疗前X区变异与聚乙二醇干扰素α-2a治疗疗效的相关性.方法 收集HBeAg阳性慢乙肝患者,给予聚乙二醇干扰素α-2a治疗,收集基线及治疗12周后的患者血清.12周后根据HBVDNA下降水平分为三组：DNA应答组、DNA部分应答组、DNA无应答组.对患者基线血清进行全序列扩增、克隆、测序.通过logistic回归分析确定与聚乙二醇干扰素α-2a治疗疗效相关的变异位点,取P＜0.05为有统计学意义.结果 共对29例患者进行了数据分析,DNA应答组7人、DNA部分应答组9人、DNA无应答组13人.各组间基线ALT水平比较（X2 =10.732,P=0.005）,差异有统计学意义.年龄、性别、HBVDNA、HBsAg、HBeAg、HBeAb比较,差异均无统计学意义.共获得306条序列,进行统计学分析及结合临床应答,得到X区核苷酸变异位点共16个,进一步进行多因素logistic回归分析发现ntG1386A、ntG1437A、ntGl515A有利于干扰素抗病毒治疗;ntC1383A、ntT1425C、ntG1512A不利于干扰素抗病毒治疗.氨基酸水平分析发现V5M、G22S和D48N是干扰素治疗的有利因素,V30L和A47T是不利因素.结论 基线X区变异与聚乙二醇干扰素α-2a治疗疗效可能相关.

慢性乙型肝炎患者NK细胞功能与干扰素疗效相关性研究

目的 探讨慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B,CHB）患者外周血NK细胞频数及功能分子与干扰素α（Interferon-alpha,IFNα）疗效的相关性.方法 采集乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）慢性感染免疫清除（Immune clearance,IC）期经聚乙二醇干扰素α-2a（Peg-IFNα-2a）治疗患者在基线及治疗12和24周静脉全血,采用流式细胞仪检测外周血CD3-CD56＋ NK细胞、CD56brightNK细胞和CD56dimNK细胞频数及NK细胞表面受体IFNAR2和NKp46的表达.血浆HBV DNA、HBsAg、HBeAg含量及肝功能由北京地坛医院检验科提供.结果 本实验共入组41例IC期经Peg-IFNα-2a治疗患者,包括21例应答不佳（Poor response,PG）患者和20例应答（Good response,GR）患者,结果显示：与基线比较,GR组CD3-CD56＋NK细胞频数在治疗24周升高（11.74,5.69％ - 18.15％ vs 13.7,9.36％ -20.18％,P〉0.05）,在PR组同样升高（8.94,6.26％ -14.15％ vs 12.5,7.64％-16.55％,P〉0.05）.GR组CD56brightNK细胞频数在治疗24周显著升高（9.49,6.2％-12.48％vs 12.98,7.75％ -20.93％,P〉0.05）,在PR组也同样显著升高（11.45,8.27％ -19.13％ vs 17.52,12.3％ - 22.42％,P=0.0239）.GR组NK细胞NKp46表达水平在治疗24周显著升高（90.55,83.8- 94.78 vs 93.8,92.28 - 96.4,P=0.0263）,而PR组却未升高（95,90.6 - 96.15 vs 94.3,92.1-95.6,P〉0.05）.GR组NK细胞NKp46high表达水平在治疗24周显著升高（12.4,8.58- 19.08 vs 39.3,23.15-49.3,P=0.0011）,其升高幅度显著高于PR组（14.2,9.78 - 17.65 vs 27.58,19.13 -36.56,P=0.006）.结论 慢性乙型肝炎患者经Peg-IFN-α-2a治疗后外周血CD3-CD56＋ NK细胞和CD56bright NK细胞频数升高,对Peg-IFN-α-2a治疗应答患者NK细胞上NKp46表达上调,而且Peg-IFN-α-2a治疗使NKp46high表达显著上调,尤其在应答患者.