集落刺激因子影响神经元存活及凋亡的体外观察

目的 观察集落刺激因子（ＣＳＦ－１）对神经元体外存活及凋亡的影响。方法 采用无血清单纯神经元培养，观察补充人重组ＣＳＦ－１（ｈｒＣＳＦ－１）对小鼠神经元体外存活率的影响，同时用Ｔａｇ酶细胞凋亡试剂盒检测ＣＳＦ－１对神经元自然凋亡的影响。结果ＣＳＦ－１能明显提高神经元体外存活率，降低体外培养神经元的凋亡百分比。结论 通过阻止或减缓细胞凋亡，提高神经元体外存活时间可能是ＣＳＦ－１实现神经元保护作用的机制之一。

高压氧联合活脑灵对新生儿缺氧缺血性脑病的早期干预效果

目的新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxicischemicen-cephalopathy,HIE)尚缺乏有效的治疗方法,探讨高压氧联合活脑灵治疗HIE的临床疗效。方法将72例HIE患儿分为3组,分别给予常规治疗(24例),单纯高压氧(24例)及高压氧联合活脑灵(24例)治疗,比较治疗后各组脑电图好转率及新生儿行为神经测定(neonatalbehavioralnevrologicalassessment,NBNA)评分。结果①脑电图:常规组、高压氧治疗组、高压氧联合活脑灵治疗组治疗后各组脑电图好转率分别为42%,44%和82%,各组好转率相比差异有显著性意义(χ2=7.245,P=0.027);其中高压氧治疗组与常规组比较,好转率差异无显著性意义(P>0.05),高压氧联合活脑灵治疗组与常规组、高压氧治疗组比较,好转率明显增高,差异有显著性意义(P<0.05)。②NBNA评分:各组治疗后NBNA评分分别为36.92±1.21,37.05±1.33,38.50±1.35,各组相比差异有非常显著性意义(F=10.99,P<0.001),其中高压氧治疗组与常规组比较,NBNA评分差异无显著性意义(P>0.05);高压氧联合活脑灵治疗组与常规组、高压氧治疗组比较,NBNA评分差异有显著性意义(P<0.001)。结论高压氧联合活脑灵治疗新生儿HIE较常规及单纯高压氧治疗有明显的效果。

神经干细胞移植的临床应用及儿科应用展望

神经干细胞(NSCs)移植治疗中枢神经系统(CNS)疾病在动物实验及临床研究都取得令人鼓舞的进展。国内外NSCs移植治疗CNS疾病在成人临床应用中取得了较好结果。新生动物的实验研究及人NSCs移植治疗缺氧缺血性脑病(HIE)的临床应用,提示NSCs移植在儿科将会有较好治疗前景。

佩-梅病3例报告

1临床资料 病例1,男,11个月,因＂智力、运动发育落后9个月伴惊厥发作＂入院。围产期无明显异常。有1姐姐,体健,家族无类似病史。入院时不能竖头,不会翻身,不能独坐,手不能握物,能认识亲人,能逗笑,不会发声。生后1/2个月出现惊厥发作,服用丙戊酸钠、苯巴比妥后惊厥控制。体检：头围45.5 cm,视物追踪可,无眼球震颤,

自体骨髓单个核细胞移植治疗重度精神发育迟滞儿童临床观察

目的观察自体骨髓单个核细胞（bone marrow mononuelearcell，BM-MNC）移植治疗重度精神发育迟滞（mental retardation，MR）儿童的临床疗效。方法海军总医院儿科自2011年1月2012年3月收治的重度MR患儿40例（年龄2～14岁），骨髓动员后进行BM-MNC分选，分别进行右侧颈动脉穿刺1次及腰椎穿刺3次行BM-MNC移植。每次移植的BM—MNC细胞数为l×10^6／kg。每例患儿对其进行术前6个月及术后6个月自身对照观察，采用家长随访量表，评估2个相同长度时间段内患儿智力、运动的发育状态。同时对移植术后1、3、6个月及1年患儿的发育情况进行追踪随访分析。结果40例中3例失访，余37例完成评估随访。其中，术后有明显进步19例，有效率为51．3％；患儿在术后3d至1个月逐渐出现不同程度的变化，持续至术后6个月后无再进步病例。随访量表进步值术前6个月为（4．69±4．33）分，术后6个月为（16．04±12．54）分，进步幅度术后较术前明显增加，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论自体BM-MNC移植安全可靠，能在短时问内改善重度MR患儿智力发育水平，移植及手术不良事件极其轻微。

人神经干细胞移植治疗重度新生儿一氧化碳中毒的初步探讨

目的探讨人神经干细胞移植治疗新生儿重度一氧化碳中毒的可行性。方法1例生后18d的新生儿重度一氧化碳中毒急性期患儿，肌张力异常，原始反射减弱，新生儿神经行为测定评分15分。取孕12周胚胎前脑细胞体外培养扩增11d，获取人神经干细胞球，经患儿脑室穿刺注入。结果移植后28d，患儿肌张力、原始反射明显改善，新生儿神经行为测定评分35分。移植后9个月Peabody量表，0～6岁儿童神经心理检查量表评估，患儿运动、智力、语言发育正常。结论本例人胚胎来源神经干细胞移植治疗急性期新生儿重度一氧化碳中毒，临床疗效显著。最终的疗效还需更多病例的进一步观察。

神经元上集落刺激因子受体表达的发生学变化

目的 观察小鼠脑神经元集落刺激因子 1受体 (CSF 1R)表达的发生学变化。方法 用免疫组化和免疫蛋白电泳的方法检测不同胎龄至生后 4周小鼠脑内神经元上CSF 1R的表达状况。结果 胎龄 14d小鼠脑神经元上即可观察到CSF 1R的表达 ,并随胎龄增长而逐渐增强。出生时至峰值 ,生后逐渐降低 ,生后 4周达到成年鼠水平。结论 CSF 1R表达水平的消长与脑神经元发生、发展过程具平行关系 。

骨髓间充质干细胞移植治疗小儿重度脑性瘫痪的疗效观察

目的观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗重度脑性瘫痪儿童的临床疗效。方法对50例重症脑性瘫痪患儿进行骨髓间充质干细胞移植,移植前、后6个月进行自身对照,比较患儿粗大运动和综合功能的进步程度,并随访移植后0、1、3、6、12个月患儿一般情况。结果 50例患儿自体骨髓间充质干细胞培养均成功。移植后6个月失访1例,至12个月失访4例,余46例完成观察。移植后6例患儿在手术后3～5 d即出现显著临床改善,大部分患儿在移植后3个月左右运动能力进步,6个月之后进步幅度减缓。移植前6个月综合功能评估进步程度为(19.14±9.82)%,移植后6个月为(28.49±10.52)%,移植后进步显著大于移植前(P=0.001),其中以运动和认知改善明显。粗大运动功能评估总百分比从移植前的(23.80±10.64)%,上升到移植后(27.31±11.72)%,平均每月上升(1.05±0.49)%,显著大于移植前6个月进步幅度(P=0.001)。结论自体骨髓间充质干细胞移植对康复治疗效果不佳的重症脑瘫患儿有明显临床改善作用,能够有效促进患儿各功能区的发育。

高压氧对移植的外源性人神经干细胞体内神经元分化的影响

目的观察缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠移植人神经干细胞(hNSCs)后高压氧(HBO)对外源性hNSCs体内神经元分化的影响。方法新生7d的SD大鼠HIBD模型制作后3d经脑室移植hNSCs,并分成移植组(n=8)和移植+HBO组(n=8)。移植+HBO组于移植后1h进行HBO治疗,每日1次,10d后断头取脑,应用免疫荧光方法检测植入细胞在皮层、海马神经元分化情况。结果移植后10d,植入细胞分化形成神经元,分布以海马、皮层为主。统计学结果表明,在皮层,两组分化的神经元计数差异无显著性(P>0.05);而在海马区,移植+HBO组神经元分化存活的数量较单纯移植组多,差异有显著性(P<0.05)。结论HIBD新生大鼠移植hNSCs后HBO促进海马区外源性hNSC向神经元的分化。

人神经干细胞移植治疗重度视觉障碍脑瘫患儿的临床观察

目的观察人神经干细胞(NSCs)移植治疗脑性瘫痪(CP)合并重度视觉障碍患儿的临床疗效。方法取孕11周正常发育人胚胎前脑细胞,经体外培养扩增为人神经干细胞球,并经前囟穿刺注入7例严重视觉障碍CP患儿的脑室。结果移植后,4例患儿在很短时间即出现视觉功能改善,伴有闪光视觉诱发电位、功能核磁的改变。结论人NSCs移植对部分重度视觉障碍脑瘫患儿有治疗作用。

细胞因子在中枢神经系统中的作用及其突破

细胞因子是传递细胞间信息的物质。人们对“细胞因子”认识,经历了一个相当长的过程。神经—内分泌—免疫这一分支学科的建立,使研究者通过探索三大系统,尤其是神经系统与免疫系统间联系,对传统概念上的神经递质、激素以及免疫淋巴因子在分布、作用上的重叠有了初步的了解。随着受体超家族概念的建立以及细胞内信号传导系统的阐明,各种细胞间信号传导“因子”间的共性逐渐得以揭示。本文仅以两组细胞因子为例,试图通过对这些“免疫细胞因子”在中枢神经系统中作用的分析,说明神经递质、生物活性多肽(激素、生长因子)以及免疫细胞因子并非局限在某一系统的专一因子,而是在分布上相互重叠、功能上彼此协同/拮抗、作用特点相似的活性分子群体。它们在有机体内细胞动力学活动中起着至关重要的作用。

超声引导脑室内神经干细胞移植治疗小儿脑瘫

目的探讨超声引导下经皮侧脑室穿刺脑室内神经干细胞（NSCs）移植治疗脑瘫的方法及近期疗效。方法 45例脑瘫患儿接受超声引导下经皮穿刺脑室内NSCs移植术。NSCs来自自然流产的孕12周人胚胎前脑组织。采用常规彩色多普勒超声诊断仪,普通扇扩探头,频率2.0~4.0 MHz,带有穿刺架和引导软件。结果 45例患儿共接受56次超声引导下侧脑室穿刺,1次穿刺成功率为100%,脑室内注入NSCs 0.3~1.2 ml,平均（0.8±0.5）ml,细胞计数3.8×106~7.2×107个,平均（12.0±6.8）×106个;3例患儿有轻度脑室血管损伤,14例术后出现发热,经对症处理体温恢复正常。术后21例（21/45,46.67%）近期临床表现有不同程度好转,无术后病情加重病例。结论超声引导下脑室内NSCs移植术安全、准确、穿刺成功率高,有助于改善脑瘫患儿的临床症状。

低体质量石骨症患儿外周血干细胞采集及其临床意义

目的探讨低体质量石骨症(OP)患儿进行外周血干细胞(PBSCs)采集的安全性及其临床意义。方法对1例低体质量OP患儿使用CS-3000plus血细胞分离机进行外周血采集,观察采集过程的安全性,记录采集前后单个核细胞(MNC)和CD34+细胞的细胞数,分析其临床意义。结果低体质量OP患儿能耐受PBSCs采集过程,采集物MNC和CD34+细胞分别为10.06×108/kg,2.74×106/kg。结论OP患儿无需使用粒细胞刺激因子动员即能采集到足够PBSC,为移植失败提供一补救措施;低体质量儿PB-SC采集是安全的。

英夫利西单抗与 IVIG 治疗 IVIG 初治无效川崎病效果比较

目的比较英夫利西单抗与静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin, IVIG)治疗 IVIG 初治无效川崎病的效果。方法选取2013年1月至2017年10月本院儿科诊断的88例 IVIG 初治无效川崎病患儿为研究对象,其中22例患儿接受英夫利西单抗治疗(英夫利西单抗组),66例患儿追加 IVIG 治疗(IVIG复治组)。比较两组患儿持续发热时间、不同时间点的退热率、冠状动脉病变(coronary artery lesions,CALs)发生率及不良反应发生情况。结果英夫利西单抗组患儿平均持续发热时间[(16.8±2.9)小时]显著短于 IVIG 复治组[(56.3±8.6)小时](P<0.001),不同时间点退热率均显著高于 IVIG 复治组(P<0.05)。治疗后第10天,英夫利西单抗组1例患儿出现CALs,治疗后第56天恢复正常; IVIG 复治组9例患儿出现CALs,治疗后第56天病变仍存在。 IVIG 复治组1例患儿出现严重不良反应(治疗后3周川崎病复发);英夫利昔单抗组患儿便秘发生率显著低于 IVIG 复治组(P<0.05),治疗期间无一例患儿发生支气管炎; IVIG 复治组8例患儿发生支气管炎。两组患儿其他不良反应发生率比较均无显著差异(P>0.05)。结论英夫利西单抗能加速川崎病患儿退热,缩短患儿持续发热时间,且安全性良好,可有效治疗 IVIG 初治无效川崎病。

长效核黄素预防大剂量甲氨喋呤化疗毒副反应疗效观察

目的观察长效核黄素对大剂量甲氨喋吟(HD-MTX)化疗常见毒副反应的预防效果。方法1996年10月至2004年8月期间,26例患儿共接受72个疗程HD-MTX化疗(3.0g/m2,持续静滴12 h),观察组41个疗程同时应用长效核黄素,对照组31个疗程不用。根据WHO抗癌药物毒副反应分度标准,观察比较两组患儿治疗后口腔黏膜损害、肝功能变化及骨髓抑制程度。结果观察组口腔黏膜损害发生率(12.2%,5/41)明显低于对照组(45.2%,14/31),且观察组损害程度较重(P=0.002)。两组间肝功能变化及骨髓抑制程度差异无显著性。结论HD-MTX化疗中应用长效核黄素可有效预防口腔黏膜损害,对肝功能损害及骨髓抑制无明显预防作用。

人神经干细胞移植到缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的存活及分布

目的：新生儿缺氧缺血性脑病是导致脑性瘫痪的重要原因,至今缺乏有效疗法。将体外培养的人神经干细胞经脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生鼠,观察植入细胞在宿主脑内的存活、迁移及分化。方法：实验于2005-01/09在解放军海军总医院儿科实验室完成。①对象：神经干细胞来源于孕12周流产的人胎儿脑组织,孕妇签署知情同意书,符合医院伦理委员会规定。清洁级SD新生鼠80只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组,40只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取人胚胎脑组织,机械分散法分离单个核细胞,接种于添加表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中,获取生长旺盛的人神经干细胞球,制成单细胞悬液,浓度约为5.0×10^11 L^-1,培养6d后行PKH标记用于植入后示踪。两组新生鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,造模后3d,细胞移植组损伤侧脑室缓慢注入5μL人神经干细胞悬液,模型对照组于相同部位注入等量生理盐水。③实验评估：取未经PKH标记的细胞球,通过免疫细胞化学染色鉴定巢蛋白的表达及其向神经元、星形胶质细胞的分化情况。分别于细胞移植后1,2,4周及3个月,常规取脑组织,行免疫组织化学和荧光分析,观察植入后细胞存活及分布情况。结果：在造模及细胞移植过程中,因麻醉、出血细胞移植组新生鼠死亡5只,模型对照组死亡7只,存活率85%～90%。①神经干细胞的鉴定及分化：80%活细胞巢蛋白呈阳性表达,并可分化为神经元、星形胶质细胞。②神经干细胞植入后存活及分布情况：植入后1周,神经丝蛋白阳性细胞多位于损伤侧皮质及海马处,纹状体、脑干、小脑、嗅球也有少量分布。植入后2周,海马和皮质可见神经丝蛋白阳性细胞,胞体伸出的神经微丝更长,细胞数量与1周时基本相似。植入后4周及3个月时PKH阳性细胞数量明显减少。结论：在含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中形成的人神经干细胞球,具有良好的增殖能力,可分化为神经元,移植至缺血缺氧新生鼠脑中能够向损伤区迁移,分布范围广。