人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定

目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRLR融合蛋白作为抗原包板,经过3轮循环的吸附-洗脱-扩增的筛选及1轮交叉筛选,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,将筛选到的阳性克隆FabG2转化至Top10’受体菌,诱导表达可溶性Fab抗体,通过Western blot和ELISA进行特异性的鉴定。结果构建的人源Fab库容为1.0×109,4轮的筛选,获得6株能与hPRLR结合的人源抗体克隆。选取的FabG2能够进行可溶性Fab抗体蛋白的表达,ELISA初步鉴定,能够与hPRLR进行特异性地结合。结论成功构建了人源Fab噬菌体抗体库,筛选并鉴定了1株抗hPRLR Fab抗体的克隆。hPRLR特异性Fab抗体的获得将为高表达hPRLR乳腺癌的生物免疫治疗奠定了基础。

人催乳素受体胞外区蛋白的原核表达及纯化

目的:建立人催乳素受体的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:由RT-PCR获得人催乳素受体(human prolactin receptor,hPRLR)胞外区氨基酸的编码序列,扩增并通过酶切位点修饰后克隆至pMD18-T载体,经测序正确后,切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG诱导重组工程菌表达,使用谷胱甘肽偶联的GSTrapFF柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:重组菌株可以表达GST-hPRLR融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为37.6×103处有一条带。结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-hPRLR融合蛋白,为进一步研究催乳素受体的功能和制备特异性的抗体奠定了基础。

PDCA循环法在某肿瘤医院国家自然科学基金青年基金申报管理中的运用

专科医院如何提高国家自然科学基金的立项成功率。作者通过介绍某肿瘤医院科研科使用PDCA循环法,分析该院2007年至2016年10年期间国家自然科学基金青年基金申报出现的问题并进行总结,通过提供科研启动资金和一系列激励政策,使医院国家级课题的申报工作初步进入良性循环。

泛素样含PHD和环指域1对胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响

目的观察RNA干扰下调泛素样含PHD和环指域1（UHRF1）基因对人胃癌SGC-7901细胞生长、凋亡、侵袭转移和周期分布变化的影响。 方法合成针对UHRF1基因的小干扰RNA（siRNA）片段，转染至胃癌细胞株SGC-7901；实验分为3组：转染组（转染特异性siRNA）、阴性对照组（转染非特异性siRNA）、空白对照组；细胞转染24 h后用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测转染前后UHRF1的mRNA和蛋白的表达水平变化；细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖能力；Matrigel和Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布。 结果转染后，胃癌细胞株SGC-7901 UHRF1 mRNA的相对表达量为0.22±0.02，低于阴性对照组（P＝0.003）和空白对照组（P＝0.001），UHRF1蛋白的相对表达量为0.17±0.01，低于阴性对照组（P＝0.001）和空白对照组（P＝0.000）；细胞增殖能力显著降低（P＝0.000）;转染组细胞和非特异性阴性对照组侵袭细胞数分别为（117.3±4.2）个和（433.3±5.5）个（P＝0.000），迁移细胞数分别为（123.0±3.6）个和（377.3±4.7）个（P＝0.000），细胞的侵袭迁移能力显著减弱；转染组凋亡率为（16.36±0.84）%较阴性对照组（9.67±0.36）%、空白对照组（8.63±0.10）%明显增加（P＝0.002）；细胞周期分布改变显著，G0/G1期的细胞明显增多（P＝0.010）。 结论UHRF1能促进胃癌细胞株SGC-7901增殖，增强其迁移侵袭能力，抑制细胞凋亡。