血管紧张素Ⅱ抑制ECV304细胞BK_(Ca)效应的细胞机制及银杏叶提取物的作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡAⅡ)抑制人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞的大电导钙激活钾通道(Maxi-conductancecalcium-activatedpotassiumchannelBKCa)效应与AⅡ受体、蛋白激酶C(ProteinKinaseCPKC)和一氧化氮(NitricOxideNO)的关系,以及中药银杏叶提取物Gingkoleafextract对AⅡ抑制BKCa效应的影响。方法细胞贴附式膜片箝技术。结果AⅡ受体拮抗剂saralasin(10-7mol/L)可对抗AⅡ(10-7mol/L)的抑制效应;PKC的激动剂佛波酯(5×10-8mol/LPhorbolester)可加重AⅡ的抑制效应;NO(10-10mol/L,sod-iumnitroprussideSNP)则削弱AⅡ的抑制作用。中药银杏叶提取物(800μg/ml)可激活BKCa并可对抗AⅡ的抑制效应。结论AⅡ对ECV304BKCa的抑制是由AⅡ受体介导的,PKC参与其中。NO与银杏叶提取物对ECV304BKCa免受AⅡ的抑制具有保护作用。

肿瘤坏死因子-α激活ECV304钙激活钾通道及G蛋白的增强效应

目的 观察肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞株 ECV30 4钙激活钾通道 (BKca)的影响以及 G蛋白是否在此过程中起作用。方法 细胞贴附式膜片箝技术。结果 发现 ECV30 4细胞膜上存在大电导钙激活钾通道 (BKca) ,它的电导是 (2 0 2 .5 4± 16 .6 2 ) p S,其活动可被 2 0 0 U / m l TNF-α增强 ,G蛋白在此过程中起介导作用。结论 TNF-α作用于内皮细胞 ,快速激活 BKca,促进钾离子大量外流 ,使细胞膜发生超极化 ,增大静息钙离子内流的电化学驱动力 ,开放静息钙通道升高静息胞内钙离子浓度。G蛋白可增强此激活效应。

硝普钠对SHRsp阻力血管平滑肌钙激活钾通道的影响

目的观察硝基类扩血管药硝普钠（ｓｏｄｉｕｍｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ，ＳＮＰ）对卒中易感型自发高血压大鼠（ＳＨＲｓｐ）及其正常血压对照ＷＫＹ大鼠肠系膜动脉Ａ４－Ａ５分支阻力血管平滑肌钙激活钾通道（ＫＣａ）的作用。方法用细胞贴附式膜片箝（ｐａｔｃｈｃｌａｍｐ）技术。结果发现ＳＮＰ可激活ＳＨＲｓｐ与ＷＫＹ阻力血管平滑肌ＫＣａ在同等剂量（１ｎｍｏｌ／Ｌ）ＳＮＰ作用下，被激活的ＳＨＲｓｐＫＣａ的电导、通道开放电流等均小于正常对照ＷＫＹ大鼠。同等剂量（１０ｕｍｏｌ／Ｌ）的８－Ｂｒ－ｃＧＭＰ激活ＳＨＲｓｐＫＣａ的效应亦弱于ＷＫＹ，结果与ＳＮＰ激活作用相似。结论高血压时阻力血管平滑肌ＫＣａ对舒血管的血管内皮释放因子／一氧化氮（ＥＤＲＦ／ＮＯ）的反应减弱。

GTP_γS及GDP_βS对SHR_(sp)内脏阻力血管平滑肌钙通道的影响

目的研究G蛋白激动剂GTP_γS和抑制剂GDP_βS对卒中易惑型自发性高血压大鼠(SHR_(SP))及常压大鼠(Wistar)肠系膜动脉A_4～A_5分支阻力血管平滑肌钙通道的影响。方法应用膜片箝全细胞钡电流方式。结果 (1)GTP_γS使SHR_(SP)和Wistar两种大鼠阻力血管平滑肌全细胞峰值钡电流(peak IBa^(2+))明显增加,且SHR_(SP)大鼠显著大于wistar大鼠。GDP_βS则可抑制两种大鼠的全细胞峰值钡电流,对于SHR_(SP)大鼠的抑制程度显著大于对照Wistar大鼠。(2)GTP_γS使SHR_(SP)和Wis-tar两种大鼠阻力血管平滑肌钙通道稳态激活曲线右移,并且SHR_(SP)大鼠右移量显著大于wistar大鼠。GDP_βS也可使两种大鼠钙通道稳态失活曲线右移,SHR_(SP)的右移量在HP=-80mV时明显大于Wistar大鼠。结论 G蛋白可激活自发性高血压大鼠内脏阻力血管平滑肌电压依赖性钙通道。其作用特点有利于外钙内流,这可能是高血压时外周阻力增高的原因之一。

mm-LDL激活ECV304 BK_(Ca)及丹参与川芎嗪的干预作用

目的 观察轻度氧化低密度脂蛋白（mm-LDL）对人脐静脉内皮细胞株ECV304的大电导钙激活钾通道（BK_(Ca)）活动的影响，以及丹参(radix salviae miltiorrhizae)水溶提取物764-3和川芎嗪对其效应的干预。方法 细胞贴附式膜片箝技术。结果 mm-LDL(100μg/ml) 可增强ECV304 BK_(Ca)的活动；764-3(30μg/ml)和川芎嗪(200μg/ml)可削弱mm-LDL的激活效应。结论 mm-LDL激活BK_(Ca)的活动，从而增大静息钙内流的电化学驱动力，升高胞内钙浓度，致内皮细胞功能障碍。764-3和川芎嗪通过削弱这一作用而对内皮细胞起到保护作用。

SHRsp内脏阻力血管平滑肌钙通道动力学特征

用膜片箝全细胞钡电流方式比较成年雄性卒中易感型自发性高血压大鼠（ＳＨＲｓｐ）及正常大鼠（Ｗｉｓｔａｒ）肠系膜动脉Ａ４－Ａ５分支阻力血管平滑肌电压依赖性钙通道的动力学特性。结果发现：１）两种大鼠该段均存在有Ｌ型与Ｔ型钙通道。２）峰值电流（ｐｅａｋＩＢａ２＋）幅度和密度ＳＨＲｓｐ均大于Ｗｉｓｔａｒ大鼠。３）通道激活时间常数（τａ）ＳＨＲｓｐ小于Ｗｉｓｔａｒ大鼠，失活时间常数（τｉ）于箝制电压（ＨＰ）＝－４０ｍＶ时，两种大鼠无区别，ＨＰ＝－８０ｍＶ时，ＳＨＲｓｐ显著大于Ｗｉｓｔａｒ。４）和Ｗｉｓｔａｒ大鼠相比较，ＳＨＲｓｐ的稳态激活曲线（Ｄ∞）与稳态失活曲线（Ｆ∞），均呈现左移。ＳＨＲｓｐ肠系膜动脉阻力血管平滑肌电压依赖性钙通道的如此特征更有利于胞外钙离子进入胞内。而关于内脏阻力血管的实验结果迄今鲜有报道。

SHRsp大鼠阻力血管平滑肌IKca对Ca^（2＋）i敏感性的改变

ＳＨＲｓｐ大鼠阻力血管平滑肌ＩＫｃａ对〔Ｃａ￣（２＋）〕ｉ敏感性的改变王国勇，郑永芳，屈金河，王晓芳（中国医学科学院基础医学研究所生理室，北京１００００５）细胞兴奋时胞内钙浓度升高可激活细胞膜上的钙激活钾通道（ＩＫｃａ），使胞内钾离子外流，细胞膜电位...

G蛋白对血管紧张素Ⅱ抑制ECV304钙激活钾通道的调节效应

目的 探讨血管紧张素 (A )对人脐静脉内皮细胞株 ECV 30 4大电导钙激活钾通道 (BKCa)的影响及 G蛋白在此过程中的作用。方法 用细胞贴附式膜片箝技术记录 BKCa的活动电流。结果 10 - 7mol/ L A 可抑制 ECV30 4细胞膜上 BKCa的活动 ,表现为电流幅值下降 ,开放概率减小 ,通道开放时间缩短 ,关闭时间延长 ;G蛋白稳定激动剂 GTPγS可对抗 A 的抑制效应 ,G蛋白稳定抑制剂 GDPβS则增强 A 的抑制效应。结论 A 可明显减弱 ECV30 4细胞膜上 BKCa的活动 ,使膜向着去极化方向发展 ,从而改变膜的稳定性 ,导致内皮细胞功能障碍。 G蛋白在此过程中起调节作用。

黄皮酰胺促钾通道开放

一种新发现的具有促智作用的药物——黄皮酰胺能抑制去甲肾上腺素(NE)或KCl引起的血管平滑肌收缩。本研究旨在应用膜片钳(patch clamp)技术探讨黄皮酰胺对Wistar大鼠尾动脉平滑肌细胞膜钾离子通道的作用。单个平滑肌细胞用酶法分离,以细胞封接方式记录离子通道活动。在细胞池内注入2μM黄皮酰胺后,钾离子通道活动明显增强。用本实验室开发的计算机软件(patch clamp analysis system,Version 1.0)计算分析通道活动的特征参数。

佛波脂及Microcystine-LR对sHRsp内脏阻力血管平滑肌钙通道的影响

目的研究佛波脂(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)及microcys-tine-LR(MCYST-LR)对卒中易感型自发性高血压大鼠(SHRsp)及常压对照Wistar大鼠肠系膜动脉A4-A5段分支阻力血管平滑肌电压依赖性钙通道的影响。方法采用膜片箝全细胞钡电流方式记录钙通道的活动。结果佛波脂激活蛋白激酶C(PKC)或MCYST-LR抑制细胞蛋白磷酸酶(PPⅠA、PPⅡA)而相对增加磷酸化过程,均可激活内脏阻力血管平滑肌电压依赖性钙通道。结论 PMA的激活效应,在SHRsp,是使开放的L型钙通道活动显著增强,T型钙通道活动略有增加;而在Wistar大鼠,则以T型钙电流增加为主。MCYST-LR仅使SHRsp的L型钙通道活动显著增强。提示在分析高血压的外周阻力增高机制时,应进一步分析PKC和磷酸化机制对钙通道各电流成分的影响。

离子单通道记录数据分析的程序

本文介绍了一份自行设计的软件。该软件使用通用微机(IBM—PC)对patch clamp实验结果进行采样和自动分析。本文对于软件的基本内容和设计思想做了简要介绍。于说明数据分析在patch clamp实验中的重要性的同时,可以看出开发该项工作的实用意义。

人α-心房肽基因的化学合成及其在酵母系统中的克隆和表达

按酵母密码系统化学合成人α-心房肽。为得到人α-心房肽基因的正确表达,少数碱基已按酵母简并密码予以替换,但在DNA序列互补的另一链的相应位点上的密码则未作相应的替换,故在局部上出现了不配对的格局。该基因已被克隆入带有α-factor外分泌型启动子的穿梭质粒pCLWA_2,含有编码人α-心房肽不同DNA序列的重组体已用Bg1 Ⅱ的限制性分析加以区别。比较两种基因所表达的人α-心房肽水平表明:含有酵母简并密码的基因所表达的人α-心房肽水平(0.5～0.7mg/L)低于按天然DNA序列合成的基因所表达的人α-心房肽水平(0.8～1mg/L)。

血管内皮舒张因子是否一氧化氮的探讨

血管内皮舒张因子(Endothelium-derived relaxing factor, EDRF)是血管内皮细胞产生释放的活性物质,它介导和决定许多舒血管活性物产生的舒张效应。已知硝基类扩血管药硝普钠(Sodium Nitroprusside,SNP)是通过形成一氧化氮(Nitric oxide, NO)而导致血管平滑肌产生舒张。有报导认为EDRF等同于NO。本文采用供受者双标本微量生物测定法,以SNP作为NO的供给源,通过比较EDRF与SNP舒张大鼠主动脉平滑肌的效应及其相互作用,以研究EDRF是否NO。结果发现:大鼠主动脉的内皮细胞在无活性物刺激时也能持续产生释放一种EDRF,即基础释放的EDRF(basal EDRF)。它可抑制NO的舒张效应,而NO作用于血管平滑肌后则可增强Ach激发的EDRF的舒张效应。可见,basal EDRF与NO的性质不相同,而激发的EDRF与NO的性质相似,EDRF与NO不能等同。为目前国际上这一争议提出了新的见解。

氧自由基抑制心肌细胞膜钾通道活动及丹酚酸A的作用

本实验应用膜片钳技术发现黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶产生的氧自由基能明显抑制心肌细胞膜钾通道活动,中药丹参提取的有放成分之一丹酚酸A能逆转被抑制的通道活动。

肠系膜动脉阻力血管平滑肌钙离子单通道特性及硝普钠的作用

目的腹部血流在维持消化系统和循环系统的稳态中发挥重要作用,其中肠系膜动脉阻力血管起关键作用。我们应用膜片箝技术,研究Wistar大鼠肠系膜动脉阻力血管平滑肌钙离子单通道特性及硝普钠对其影响。方法从Wistar大鼠肠系膜动脉分支阻力血管分离新鲜平滑肌细胞。以100mmol·LBa~为载流子应用细胞贴附式(cell attached)膜片箝方法,记录细胞膜钙离子单通道电流(I_(Ca))。箝制电压为-70mV,检测电压分别为10mV和+20mV。结果此(I_(Ca))的平均电流幅值(A)开放时和开放概率(Po)分别为(平均数标准差10):在检测电压10mV时;A(1.16±0.28)pA,(1.7±0.82)ms和Po(0.16±0.09);检测电压+20mV时:A(1.14±0.34)pA,(1.5+0.76)ms和Po(0.20±0.10)。Bay K 8644(L型钙通道的激动剂)可激活I_(Ca)将一氧化氮(NO)供体硝普钠(10~9mol·L^1)加入细胞浴液,数秒之内I_(Ca)活动即被灭活或抑制,并于数分钟内恢复,有时在对I_(Ca)的抑制作用之后可记录到兴奋作用,此时如再次应用同样剂量的硝普钠I_(Ca)活动可再被抑制。结论 NO可灭活肠系膜动脉A_4A_5段阻力血管平滑肌细胞膜I_(Ca)随后所产生的兴奋作用,可能由NO的代谢产物所致,这是首次在同一膜片记录到NO双向和的报道。

高血压大鼠肠系膜阻力动脉平滑肌全细胞钙电流记录

高血压大鼠肠系膜阻力动脉平滑肌全细胞钙电流记录何加强，郑永芳，屈金河，王晓芳（中国医学科学基础医学研究所生理研究室，北京１００００５）膜片箱技术（Ｐａｔｃｈ－ｃｌａｍｐ）已广泛用于众多组织细胞离子电流的研究，就血管尤其是卒中易感型自发性高血压大鼠（Ｓ...