卷叶贝母根高效诱导愈伤组织及快速增殖研究

以卷叶贝母根为外植体,建立其愈伤组织快速繁殖体系,研究了不同消毒时间和激素配比对卷叶贝母根外植体诱导愈伤组织与增殖的影响。结果表明,卷叶贝母根快速诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2 iP 1.0 mg·L^(-1)+NAA 0.6 mg·L^(-1)+头孢曲松钠300 mg·L^(-1)+香蕉汁200 mg·L^(-1),培养30 d愈伤组织诱导率为85.41%;根愈伤组织的最佳增殖培养基为B 5+2,4-D 3.0 mg·L^(-1)+KT 0.5 mg·L^(-1)+多效唑1.0 mg·L^(-1)+活性炭1.5 mg·L^(-1),培养30 d其增殖倍数可达3.26倍。本实验实现了以卷叶贝母根为外植体的愈伤组织快速诱导和增殖培养,有效地提高了卷叶贝母植物器官的利用率,并为保护卷叶贝母植物资源提供了重要的途径。

视黄酸信号通路在青鳉精原干细胞体外增殖与分化中的作用

为探究视黄酸(RA)在鱼类精原干细胞(SSC)增殖与分化中的作用,实验首先以三色荧光报告载体pGRY[延伸因子1α启动子驱动组蛋白H2B-绿色荧光融合蛋白、减数分裂联会复合体蛋白3(Scp3)启动子驱动嘌呤霉素红色荧光融合蛋白、精蛋白启动子驱动黄色荧光蛋白]转染青鳉精原干细胞系SG3,获得稳转细胞SG3-pGRY,然后分别在2D与3D培养条件下检测RA信号对其增殖与分化的影响。结果显示,稳转细胞SG3-pGRY的红色荧光可监测细胞内源性Scp3的表达,且细胞仍保持干性及分化潜能,表明其可用于监测细胞分化状态。在2D培养条件下,即在细胞培养板中待细胞生长密度约90%就进行传代培养,RA可显著抑制细胞增殖,其受体α、β、γ泛抑制剂BMS493可促进细胞增殖。第48小时,RA处理可下调细胞多能性相关基因pou5f3、klf4表达,上调减数分裂相关基因dazl表达,但对其他减数分裂相关基因如scp3表达无明显影响。第8天,处理组及对照组均未能观察到红色荧光,这与已有报道RA处理体外培养小鼠SSC可显著促进Scp3表达,并进入减数分裂I期偶线期的研究结果明显不同。在3D培养条件下,即用96孔球形低吸附微量培养板进行培养,48 h后细胞成球状体聚集生长,RA、BMS493处理组、对照组在48 h后均观察到明显红色荧光,减数分裂相关基因表达与2D相比显著上调。第8与第34天,RA处理组减数分裂相关基因表达均显著高于对照组,而BMS493处理组低于对照组。研究表明,RA信号可抑制SG3增殖,促进其分化,但不是诱导细胞发生减数分裂的关键分子。本研究不仅为鱼类SSC分化相关研究提供了良好研究模型,而且促进了对于RA信号在鱼类SSC增殖与分化中作用的深入认识。

不同培养基对羌活植物细胞悬浮培养的影响

探究不同培养基基质对羌活植物细胞悬浮培养的影响,为建立羌活植物细胞悬浮培养体系摸索条件.通过比较不同基础培养基种类、蔗糖浓度、硝态氮与铵态氮的比值和总氮含量等因素对羌活植物悬浮细胞生长的影响,以确定羌活植物细胞悬浮培养的最佳培养基条件.实验结果显示,以MS为基本培养基,当蔗糖浓度为30g/L,NH4^+/NO3^-=1∶2,总氮量为1/2N时,最有利于羌活植物细胞的悬浮培养.实验结果表明,确定的羌活植物细胞悬浮培养的最佳培养基条件,可为后续的羌活植物细胞悬浮培养体系的建立提供依据.

青鳉精巢gdnfa与gdnfb的细胞表达模式及视黄酸和11-酮基睾酮对其差异调控作用

【目的】探究青鳉胶质细胞源神经营养因子(GDNF)在精巢中的细胞表达模式,及视黄酸(RA)和11-酮基睾酮(11-KT)对其表达调控作用。【方法】通过荧光原位杂交(FISH)检测了青鳉gdnf的2个复制基因(即gdnfa与gdnfb)在精巢中的细胞表达模式,并通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、5′端上游序列转录活性分析等从组织、细胞及分子水平探究了精巢分化发育重要调控因子RA和11-KT对二者的表达调控作用。【结果】在精巢中,gdnfa主要表达于体细胞,而gdnfb除表达于体细胞外,在生殖细胞中也有明显表达。不同浓度RA和11-KT处理体外培养的青鳉精巢组织及其传代培养体细胞MTS1,结果表明,二者均可显著下调gdnfa的表达,上调gdnfb的表达。分别用gdnfa与gdnfb不同截短5′端上游序列的荧光素酶报告载体转染MTS1,结果显示,RA处理可降低gdnfa的多个截短5′端上游序列荧光素酶活性,增强gdnfb的多个截短5′端上游序列荧光素酶活性,11-KT处理的结果与此基本相似。【结论】青鳉gdnfa与gdnfb在精巢中具有差异的细胞表达模式,同时二者在组织、细胞及分子水平均受到了RA和11-KT的差异化调控。本研究深化了对鱼类gdnf的2个复制基因的细胞表达模式及其调控的深入认识,为其进一步生物学功能研究奠定了重要基础。